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  • 【期刊】 miR-30c过表达对斑马鱼早期心脏发育的影响

    刊名:中华实用儿科临床杂志 作者:徐晶 ; 李萌萌 ; 刘雪华 ; 余章斌 ; 朱春 ; 韩树萍 ; 胡晓山 ; 朱金改 关键词:miR-30c 斑马鱼 心脏发育 机构:南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科 ; 南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科 年份:2016
    摘要:目的探究miR-30c过表达对斑马鱼早期心脏发育的影响。方法于斑马鱼胚胎1细胞受精卵期,显微注射3个不同浓度梯度的miR-30c模拟物以实现过表达。通过计数在不同时间点斑马鱼胚胎的病死率及心率、显微镜观察斑马鱼大体形态及心包水肿情况,以及胚胎整体原位杂交等方法,评价miR-30c过表达对斑马鱼早期心脏发育的影响。结果与野生型对照组比较,随着过表达浓度的提高,斑马鱼胚胎的病死率逐渐增高,至8μmol/L浓度时,斑马鱼受精后96h病死率已达80%。而同时,作为评价心脏功能重要指标的心率逐渐下降。此外,随着过表达浓度的递增,斑马鱼心包水肿的程度越来越高,且此种心包水肿随着时间的推移越来越严重。之后,通过胚胎整体原位杂交的方法,观察心脏部位特异性基因的表达,发现过表达miR-30c斑马鱼中,标记心房肌及心室肌探针的表达范围都有所扩大,心脏环化受到抑制,且心脏房室通道瓣膜处的基因表达缺失。结论miR-30c过表达影响斑马鱼的早期心脏发育
  • 【期刊】 MiR-738通过Wnt信号通路调控斑马鱼心脏发育

    刊名:南通大学学报(医学版) 作者:施林生 ; 黄建飞 ; 卢辉和 ; 陈小丽 ; 郑扣龙 ; 林刚 关键词:miR-738 ; 心脏 ; Wnt ; 斑马鱼 ; 发育 机构:江苏省南通市第一人民医院心内科 ; 江苏省南通市第一人民医院心内科 年份:2014
    摘要:目的:研究miR-738对模式动物斑马鱼心脏发育的影响。方法:通过全胚胎原位杂交检测miR-738的表达。在斑马鱼受精卵中显微注射miR-738前体来过表达miR-738。通过显微镜成像来检测心脏表型。通过荧光素酶报告基因检测来验证miR-738调控Lef1。结果:MiR-738在30 hpf斑马鱼心脏表达。MiR-738过表达导致斑马鱼胚胎心脏显著增大。MiR-738可以抑制Lef1的表达。结论:MiR-738通过Wnt信号通路调控斑马鱼心脏发育
  • 【期刊】 多柔比星斑马鱼胚胎心脏发育毒性表现

    刊名:中国药理学与毒理学杂志 作者:张利军 ; 史慧勤 ; 苑晓燕 ; 袁海涛 ; 赵君 ; 彭双清 关键词:斑马鱼 ; 模式动物 ; 多柔比星 ; 心脏毒性 机构:军事医学科学院疾病预防控制研究所毒理学评价研究中心 ; 军事医学科学院疾病预防控制研究所毒理学评价研究中心 年份:2013
    摘要:目的通过观察多柔比星的斑马鱼胚胎心脏毒性表现,为其作为心脏毒性评价模型提供可靠的检测指标。方法选择发育正常的6hpf(hours post fertilization)斑马鱼胚胎暴露于多柔比星2.16~34.48μmol·L-148h。显微镜观察72hpf斑马鱼心血管系统的形态学改变。通过DVC摄像系统测定心率;测量静脉窦-动脉球(SV-BA)间距,HE染色观察斑马鱼心肌结构。结果多柔比星2.16μmol·L-1组斑马鱼心血管系统形态无改变,但心率下降,为(166±5)min-1;SV-BA间距增加,为(237±13)μm。多柔比星4.31μmol·L-1可引起斑马鱼出现心包水肿,心脏畸形,心率减低,为(166±5)min-1;SV-BA间距增加,为(268±13)μm。随着多柔比星浓度增加,斑马鱼出现体长缩短、体节发育异常、脊柱弯曲、卵黄囊水肿、出血、心脏缩小等多种表型改变。心脏组织切片显示,多柔比星8.62μmol·L-1可引起斑马鱼心包腔变大、心脏缩小、心肌层变薄和心肌细胞减少。结论多柔比星对斑马鱼胚胎心脏毒性作用的表现与对哺乳动物的毒性作用表现相同,有望成为评价药物心脏发育毒性的模型。
  • 【论文】 RMND5B在斑马鱼心脏发育中的作用

    作者:张湘涛 关键词:心脏发育 ; 斑马鱼 ; morpholino ; RMND5B ; 胚胎抗体染色 机构:湖南师范大学 ; 湖南师范大学 年份:2010
    摘要:心脏是胚胎发育过程中最早形成器官之一。心脏病是影响人类健康与生命的第一大杀手。因此研究心脏发育心脏病发生的分子机制意义重大。 我们研究室的前期研究表明,RMND5B的无脊椎动物果蝇同源基因CG3295可能在心脏发育中起着重要的作用。本文利用斑马鱼模型研究了RMND5B基因在脊椎动物心脏发育中的作用及其与Smads蛋白的相互作用关系。 胚胎原位杂交实验分析表明,RMND5B的mRNA在斑马鱼发育各时期均有表达。为了研究其蛋白表达,我制备了斑马鱼RMND5B的多克隆抗体。Western-blotting结果表明,RMND5B在斑马鱼胚胎发育的各时期均表达,在成年斑马鱼心脏、肌肉、眼睛、皮肤、卵、鳍中均有表达,且在心脏的表达较强烈。 胚胎抗体染色结果显示,在斑马鱼胚胎发育128细胞期出现单个RMND5B蛋白强表达的细胞,256细胞期时该细胞一分为二,512细胞期时该细胞二分为四,72小时期时RMND5B蛋白在心脏强表达。胚胎亚细胞定位分析表明,RMND5B蛋白定位在胚胎细胞的细胞质中。 利用GFP特异标志心脏的转基因斑马鱼作为模型对RMND5B在心脏发育中的作用进行了研究。利用斑马鱼RMND5B基因特异性的morpholino反义寡核酸敲低RMND5B蛋白的表达和过表达斑马鱼胚胎中RMND5B,结果显示斑马鱼胚胎的心脏出畸形,如心脏不能正常环化,心室心房呈线性化,围心腔增大,心率减慢,这些结果提示RMND5B可能参与早期心脏的形态建成,在心脏发育过程中起重要作用。 为了进一步研究RMND5B对斑马鱼胚胎心脏发育的调控机制,我们利用免疫共沉淀技术分析RMND5B与Smads的相互作用,结果表明RMND5B蛋白与Smad4、Smad3、Smad7和Smad8蛋白均相互作用,提示RMND5B可能与Smad结合,通过TGF-β途径调控心脏发育。 综上所述,RMND5B可能通过与Smad4、Smad3、Smad7和Smad8相互作用而影响TGF-β和BMP信号途径,进而在斑马鱼心脏发育过程中起重要的作用。该研究为RMND5B基因在心脏发育过程中的作用机制的后续研究奠定了基础。
  • 【期刊】 福美双对斑马鱼胚胎心脏发育的影响

    刊名:内蒙古民族大学学报(自然科学版) 作者:于永利 ; 李慧蕾 ; 王亚臣 ; 乔新国 关键词:福美双 ; 斑马鱼 ; 心囊水肿 机构:内蒙古民族大学 ; 内蒙古民族大学 ; 通辽市早繁鱼苗试验厂 年份:2011
    摘要:福美双是我国使用非常广泛、生产量非常大的一种高残留农药,福美双的毒性与高残留性逐步引起世界各国的重视.本研究使用斑马鱼作为实验动物模型,研究了福美双的毒性机制.结果表明福美双引起心囊水肿等外观形态学的变化,心囊水肿率与福美双的浓度呈正相关,通过组织切片进一步证实其致畸性变化.研究表明斑马鱼早期胚胎作为农药的生物学评价具有一定的参考价值.
  • 【期刊】 海七鳃鳗pma-miR-200c-3p对斑马鱼心脏发育的作用研究

    刊名:大连海洋大学学报 作者:刘云[1] 王丛丛[1,2] 郭亚南[3] 许强华[1,2,3,4] 关键词:海七鳃鳗 miR-200c-3p 斑马鱼 心脏发育 cdx1b 机构:上海海洋大学海洋科学学院 ; 上海海洋大学海洋科学学院 年份:2016
    摘要:为研究海七鳃鳗Petromyzon marinus pma-miR-200c-3p在心脏发育过程中的生物学功能,采用显微注射技术,将pma-miR-200c-3p模拟体注射到斑马鱼Danio rerio胚胎,过表达pma-miR-200c-3p后,使用qRT-PCR及Western blot法检测了一些与心脏发育相关的标志性基因的表达水平,以及BMP/Smad通路重要基因蛋白水平的变化,并利用生物信息学预测、GFP荧光表达分析了pma-miR-200c-3p的生物学作用。结果表明:过表达pma-miR-200c-3p的斑马鱼胚胎中,与心脏发育相关的标志性bmp4、bmp5、smad1、gata5、tbx2b和notch1a基因的表达水平极显著上调(P〈0.01),同时BMP/Smad通路中BMP4、Smad1、GATA5蛋白表达水平也明显升高;细胞试验表明,cdx1b基因可能是pma-miR-200c-3p的一个靶基因。研究表明,pma-miR-200c-3p可能通过抑制cdx1b基因的表达,参与BMP/Smad通路以促进心脏发育
  • 【论文】 miR-20b过表达对斑马鱼胚胎心脏发育的影响

    作者:李萌萌 关键词:斑马鱼 ; miR-20b ; 心脏发育 ; bmp信号通路 机构:南京医科大学 ; 南京医科大学 年份:2014
    摘要:先天性心脏病(CHD)是出生婴儿最常见的先天畸形,严重危害人类的生命健康。其病因和发病机制已经得到广泛的研究,但是具体机制尚未明确。目前的研究显示胚胎期环境因素和遗传因素的改变是引起先心病的主要病因,因此,研究环境因子和遗传因素在心脏发生过程中的作用对新生儿先天性心脏发育缺陷的预防、诊断和治疗有着重要的意义。 MicroRNA(miRNA)是一类具有转录后调节活性的内源性小分子RNA。它在物种进化过程中高度保守,目前对于miRNA的研究逐渐成为医学研究的一个热点,业已证明,miRNA参与诸多重要的生理、病理过程,尤其在器官发生的过程中发挥重要的作用。miR-20b是我们筛选发现的、在室间隔缺损流产胚胎心脏组织中表达显著上调的miRNA,其致胚胎心脏发育畸形及机制研究尚无文献报道。 在本研究中,我们利用在心血管系统发育研究方面具有独特优势的模式动物斑马鱼,揭示了过表达miR-20b在脊椎动物早期心脏发育的过程中产生的影响。通过在单细胞期显微注射miR-20b mimic实现过表达,从形态学上看,过表达miR-20b会导致斑马鱼胚胎出现明显的心包水肿,并呈现一定的浓度依赖性。受精后120小时(120hpf)胚胎的心脏组织学切片结果显示,miR-20b过表达会影响心室壁的正常形成和房室通道处的心内膜垫发生,导致在120hpf时,斑马鱼的心室壁明显变薄、瓣膜发育明显缺失。胚胎整体原位杂交显示,miR-20b过表达后,心脏祖细胞标记基因hand2、nkx2.5和gata4以及决定瓣膜前体细胞发生的标志基因bmp4、versican和notch1b等基因的表达显著下调,房室特异性的标志基因amhc、vmhc和cmlc2的表达范围明显变小,这就说明miR-20b过表达是通过抑制心脏前体细胞的分化影响斑马鱼心脏发育的。上述的这些心脏发育异常最终对心脏功能造成了显著的影响,对心率的测定结果正是证明了这一点。进一步的研究发现,miR-20b通过作用于其直接靶基因bmprlaa,影响bmp信号通路,参与早期心脏发育过程,而在miR-20b过表达的胚胎内共注射bmprlaa mRNA可部分拯救过表达miR-20b引起的心脏发育异常表型。综上所述,miR-20b可以通过作用于bmp信号通路,从而影响脊椎动物心肌和房室瓣膜的发生。
  • 【论文】 Gata6在斑马鱼胰腺和心脏发育中的功能研究

    作者:马希睿 关键词:斑马鱼 ; gata6 ; 胰腺 ; 心脏 ; 空腔 机构:西南大学 ; 西南大学 年份:2017
    摘要:胰腺是脊椎动物中参与营养代谢和血糖平衡的重要器官。心血管系统负责氧气、二氧化碳、营养物质和代谢废物的运输及调节内稳态。斑马鱼为小型亚热带淡水鱼,胚胎体外发育,胚胎透明易观察,单次产量高,成熟周期短,易于饲养等优势使其成为理想的脊椎动物模型,可用于消化器官和心血管系统发育。在斑马鱼中胰腺由背侧胰芽(dorsal bud)和腹侧胰芽(ventral bud)融合发育而来,背侧胰芽在24hpf出现,主要发育成内分泌细胞(endocrine),腹侧胰芽在34hpf开始出现,主要发育成外分泌细胞(exocrine)及少部分内分泌细胞。心脏则是由两侧的心肌祖细胞向背侧中线迁移并融合形成圆锥状,心内膜祖细胞在圆锥体中间,当圆锥转变成心脏管后心内膜祖细胞将形成心内膜细胞并形成空腔。这两个器官形成受一系列动态变化的信号和转录因子精确调控,gata6在这两个器官中均有表达,这暗示着gata6可能参与调控胰腺和心脏发育,但是到目前为止gata6参与调控胰腺和心脏发育的具体分子机制尚未完全阐释。gata6是GATA锌指结构转录因子家族一员,主要负责中胚层和内胚层的特化与分化。为了研究gata6在胰腺和心脏发育中的功能,我们利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除了gata6,并获得了两个在外显子2上分别删除5个和20个碱基的突变体,其突变型mRNA含有早熟终止密码子,编码蛋白都为截短蛋白,缺失结合DNA的锌指结构域。在gata6△20/△20中前肠发育缺陷、肝脏偏小及外分泌胰腺严重缺失,在3dpf的突变体中trypsin标记的分化的外胰为两小团分散的组织。为研究外分泌胰腺祖细胞的发育状况,我们将gata6△20/+杂交至Tg(ptf1a:GFP)背景上,连续观察发现野生型腹侧胰腺祖细胞只形成一个腹侧胰芽并且长大,然而在突变体中形成两个分离的腹侧胰芽,其正常生长也受到抑制。上述结果表明在在gata6突变体中腹侧胰芽异位生长且生长受到抑制。前期研究结果表明LPM迁移缺陷可能会导致外分泌胰腺发育缺陷,为了探究腹侧胰芽不能融合的原因,我们检测了LPM的迁移情况,突变体中LPM迁移正常。文献表明在小鼠中shh异位表达会导致外分泌胰腺发育缺陷,我们检测了shha的表达水平,shha在突变体中的内胚层异位过表达,为研究此异位表达是否为导致胰腺发育缺陷的原因,我们用cyclopamine抑制Hedgehog信号通路,但是不能挽救突变体的外胰腺缺陷。gata6影响外分泌胰腺发育的机制需要进一步探索研究。我们还研究了gata6在心脏发育过程中的功能,观察发现在野生型中24hpf开始出现血液循环,然而在突变体此时没有血液循环,但是心跳正常,为了进一步研究心脏发育状况,我们借助转基因鱼Tg(flk1:GFP)发现突变体的心脏流出道(outflow tract)的内皮细胞相互紧靠,没有形成能够通过血液细胞的空腔。在随后的观察中发现大约70%的突变体会在26hpf到48hpf之间恢复血液循环。前期研究表明基因突变体中可能存在遗传补偿效应,我们检测发现gata5在突变体的心脏中表达水平明显上升。在突变体中适量敲降gata5可以显著降低突变体恢复血流的比例,并且适量注射gata5 mRNA可以逆转此结果。文献报道血管形成空腔的机制存在一种内皮细胞聚集成棒状结构后内皮细胞极化分开再形成空腔的模式,这种血管形成主要是通过VE-cadherin—PKC—Factin—myosin II途径。为验证斑马鱼心脏流出道中空腔形成分子机制是否符合这种模式,我们用Blebbistatin、Latrunculin B和Nocodazole分别处理22hpf的野生型胚胎,分别抑制myosinII、F-actin和microtubule,发现用这三种药都能使心脏流出道不能形成空腔,我们检测了36hpf时心脏流出道中PKC表达量,我们发现sibling中PKC表达量更高,恢复血液循环的突变体比没有恢复的突变体有更高的PKC表达量,gata6/gata5可能是通过直接调控PKC的表达量来控制心脏流出道中的空腔的形成。综上所述,我们的研究为探索gata6在胰腺和心血脏发育提供了新的信息。
  • 【期刊】 斑马鱼脏发育研究进展

    刊名:安徽农业科学 作者:王朋辉 关键词:斑马鱼 ; 肾脏 ; 结构 ; 发育 ; 再生 机构:西南大学生命科学学院 ; 西南大学生命科学学院 年份:2013
    摘要:综述了斑马鱼肾脏结构、发育和再生研究的最新进展,为进一步研究肾脏的发育、再生及再生机制提供了借鉴。
  • 【期刊】 多氯联苯对斑马鱼胚胎心脏发育的毒性作用

    刊名:临床儿科杂志 作者:王薛洁 ; 余章斌 ; 韩树萍 ; 朱春 ; 彭宇竹 关键词:斑马鱼 ; 多氯联苯 ; 心脏发育 机构:南京医科大学 ; 南京医科大学 ; 南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科 年份:2012
    摘要:目的探讨环境污染物多氯联苯(polychlorinated biphenyls,PCBs)对斑马鱼胚胎心脏发育的毒性影响及机制。方法采用水域染毒法,将受精后4 h(4 hours post fertilization,4 hpf)内的斑马鱼胚胎分别暴露于浓度为1 000、500、250、125μg/L的多氯联苯中,作为4个浓度组,然后设置溶剂(0.01%甲醇)对照组、60 mg/L的氯化钠溶液空白对照组。通过死亡率、孵化时间、发育畸形等指标评价多氯联苯对胚胎心脏发育毒性。结果与对照组相比较,随着PCBs质量浓度的增加,斑马鱼胚胎的孵化率降低,畸形率和死亡率增加。当PCBs达到1 000μg/L时,斑马鱼72 hpf的孵出率由对照组的99.44%下降到75.56%,并且120 hpf的死亡率为40.14%、畸形率为57.78%。结论PCBs能影响斑马鱼胚胎发育,导致斑马鱼胚胎和幼鱼的畸形与死亡。
  • 【期刊】 raldh2基因阻抑导致斑马鱼心脏发育畸形的机制

    刊名:中国实验动物学报 作者:侯佳 ; 桂永浩 ; 王跃祥 ; 宋后燕 关键词:视黄醛脱氢酶2 ; 基因阻抑 ; 斑马鱼 ; 心脏发育 机构:复旦大学附属儿科医院心血管中心 ; 复旦大学附属儿科医院心血管中心 ; 复旦大学分子医学教育部重点实验室 年份:2011
    摘要:目的通过显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸(MO)阻抑视黄醛脱氢酶2(raldh2)基因表达,探讨raldh2基因阻抑对斑马鱼胚胎心脏发育的影响及可能的分子机制。方法根据斑马鱼raldh2基因起始密码区域序列设计合成吗啡啉修饰的反义寡核苷酸,采用显微注射方法阻抑斑马鱼胚胎raldh2基因表达。构建raldh2-EG-FP重组质粒进一步验证MO的特异性和有效性。分析raldh2基因阻抑后对胚胎发育,尤其心脏表型和功能的影响。通过胚胎整体原位杂交,分析心脏相关nppa和tbx20基因表达模式以及raldh2阻抑后对其表达的影响。结果显微注射raldh2-MO能有效地特异地阻抑斑马鱼胚胎raldh2基因表达,raldh2-MO对胚胎发育影响呈剂量依赖性。raldh2基因阻抑可导致胚胎心脏发育畸形,干扰正常的房室分化和向右环化,导致房室瓣血液反流。与野生型胚胎比较,raldh2基因阻抑组胚胎心率和心室收缩分数降低(P<0.05),心功能受损。整体原位杂交结果显示raldh2基因阻抑后nppa基因表达改变,心室部位nppa表达清晰,而心房部位表达减弱。tbx20基因在心脏、运动神经元、顶盖及视网膜表达,raldh2基因阻抑后,tbx20表达下调,在心脏表达减弱,以心房和流出道部位更显著。结论 raldh2基因在心脏早期发育的多个环节发挥重要作用,影响房室分化、心管环化和心肌收缩等。在心脏发育过程中nppa和tbx20基因表达受到raldh2基因调控,可能参与RA信号缺乏导致心脏畸形的潜在分子机制。
  • 【期刊】 斑马鱼心脏发育候选基因Klhl31的TALEN打靶有效性分析

    刊名:激光生物学报 作者:蔡湾湾 ; 陈发 ; 万永奇 ; 吴秀山 ; 邓云 ; 袁婺洲 关键词:基因突变 ; 酶切位点 ; 基因敲除 机构:湖南师范大学生命科学学院 ; 湖南师范大学生命科学学院 ; 蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心 年份:2016
    摘要:TALEN(transcription activator-like effector nuclease)打靶是一种定向敲除基因技术,利用该技术能解决目前在斑马鱼体内难以进行基因敲除的难题.Klhl31是本实验室鉴定的人类心脏发育候选基因,且目前国内外尚无斑马鱼Klhl31敲除品系.为了在斑马鱼的整体水平鉴定Klhl31的生物学功能,我们利用TALEN打靶技术建立斑马鱼KlHl31基因敲除品系.酶切验证的结果显示,注射了TALEN表达质粒的胚胎在酶切位点处发生了基因突变,该突变破坏了酶切位点导致酶切出现阳性结果,证明了TALEN打靶的有效性.对F0代突变体成鱼的筛选过程中,经酶切验证,同样出现了阳性结果.这些结果说明用TALEN这种技术成功敲除了斑马鱼Klhl31基因,获得了Klhl31基因敲除的嵌合体斑马鱼.
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