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  • 【期刊】 miR-20b直接靶向3′-UTR负性调节VEGF的表达

    刊名:华中科技大学学报:医学版 作者:陶象男[1] ; 汪忆梦[2] ; 宋传旺[1] 关键词:血管内皮生长因子 3′-非编码区 miR-20b 双荧光素酶报告载体 机构:蚌埠医学院第二附属医院检验科 ; 蚌埠医学院第二附属医院检验科 年份:2016
    摘要:目的探讨miR-20b是否直接靶向VEGF 3′-非编码区(3′-UTR)而调控其表达。方法采用miRanda软件预测VEGF 3′-UTR是否存在miR-20b的结合位点;使用PCR方法扩增RAW264.7细胞VEGF基因3′-UTR序列,经双酶切后克隆到pmiR-RB-Report^TM质粒海肾荧光素酶的下游,得到pmiR-RB-Report TM-VEGF 3′-UTR双荧光素酶重组质粒,使用电泳法和测序法进行验证;将重组质粒或空质粒与miR-20b模拟物或其对照共转染HeLa细胞,24h后检测相应荧光素酶活性。结果 VEGF 3′-UTR存在miR-20b的结合位点;获得了含VEGF 3′-UTR的双荧光素酶报告载体;重组质粒与miR-20b模拟物共转染组HeLa细胞的荧光素酶活性明显低于空质粒转染组(P〈0.05)。结论成功构建小鼠VEGF基因3′-UTR双荧光素酶报告载体,miR-20b可以直接靶向VEGF 3′-UTR而负性调控其表达。
  • 【期刊】 miR-20b慢病毒表达载体的构建及表达

    刊名:江苏医药 作者:朱莎莎 ; 朱春 ; 余章斌 ; 韩树萍 ; 朱金改 ; 彭宇竹 关键词:miR-20b ; 慢病毒 ; P19细胞 机构:南京医科大学 ; 南京医科大学 ; 南京医科大学附属南京市妇幼保健院儿科 年份:2014
    摘要:目的构建鼠miR-20b慢病毒表达载体,检测其在P19细胞中的过表达效果。方法设计并合成含有miR-20b成熟序列的编码短发卡状RNA(shRNA)的双链DNA。将shRNA克隆入慢病毒载体,与Pcgvp、Rev和Vsvg包装质粒共转染HEK-293T细胞包装病毒,收取病毒上清液,纯化后感染P19细胞。荧光倒置显微镜下观察感染效率,实时定量PCR检测慢病毒感染后miR-20b的相对表达量。结果经双酶切分析及测序验证,成功构建了miR-20b的过表达载体。慢病毒感染P19细胞的效率可达到70%以上,miR-20b表达水平明显升高。结论成功构建了鼠miR-20b的慢病毒表达载体,包被的病毒可以在P19细胞中实现过表达效果。
  • 【论文】 miR-20b过表达对斑马鱼胚胎心脏发育的影响

    作者:李萌萌 关键词:斑马鱼 ; miR-20b ; 心脏发育 ; bmp信号通路 机构:南京医科大学 ; 南京医科大学 年份:2014
    摘要:先天性心脏病(CHD)是出生婴儿最常见的先天畸形,严重危害人类的生命健康。其病因和发病机制已经得到广泛的研究,但是具体机制尚未明确。目前的研究显示胚胎期环境因素和遗传因素的改变是引起先心病的主要病因,因此,研究环境因子和遗传因素在心脏发生过程中的作用对新生儿先天性心脏发育缺陷的预防、诊断和治疗有着重要的意义。 MicroRNA(miRNA)是一类具有转录后调节活性的内源性小分子RNA。它在物种进化过程中高度保守,目前对于miRNA的研究逐渐成为医学研究的一个热点,业已证明,miRNA参与诸多重要的生理、病理过程,尤其在器官发生的过程中发挥重要的作用。miR-20b是我们筛选发现的、在室间隔缺损流产胚胎心脏组织中表达显著上调的miRNA,其致胚胎心脏发育畸形及机制研究尚无文献报道。 在本研究中,我们利用在心血管系统发育研究方面具有独特优势的模式动物斑马鱼,揭示了过表达miR-20b在脊椎动物早期心脏发育的过程中产生的影响。通过在单细胞期显微注射miR-20b mimic实现过表达,从形态学上看,过表达miR-20b会导致斑马鱼胚胎出现明显的心包水肿,并呈现一定的浓度依赖性。受精后120小时(120hpf)胚胎的心脏组织学切片结果显示,miR-20b过表达会影响心室壁的正常形成和房室通道处的心内膜垫发生,导致在120hpf时,斑马鱼的心室壁明显变薄、瓣膜发育明显缺失。胚胎整体原位杂交显示,miR-20b过表达后,心脏祖细胞标记基因hand2、nkx2.5和gata4以及决定瓣膜前体细胞发生的标志基因bmp4、versican和notch1b等基因的表达显著下调,房室特异性的标志基因amhc、vmhc和cmlc2的表达范围明显变小,这就说明miR-20b过表达是通过抑制心脏前体细胞的分化影响斑马鱼的心脏发育的。上述的这些心脏发育异常最终对心脏功能造成了显著的影响,对心率的测定结果正是证明了这一点。进一步的研究发现,miR-20b通过作用于其直接靶基因bmprlaa,影响bmp信号通路,参与早期心脏发育过程,而在miR-20b过表达的胚胎内共注射bmprlaa mRNA可部分拯救过表达miR-20b引起的心脏发育异常表型。综上所述,miR-20b可以通过作用于bmp信号通路,从而影响脊椎动物心肌和房室瓣膜的发生。
  • 【期刊】 miR-20b抑制哮喘小鼠的气道炎症

    刊名:南方医科大学学报 作者:马华 ; 罗玉岚 ; 郭术俊 ; 申林 ; 宋传旺 关键词:miR-20b ; 哮喘 ; 气道炎症 ; 血管内皮生长因子 机构:蚌埠医学院科研中心 ; 蚌埠医学院科研中心 年份:2015
    摘要:目的探讨miR-20b对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、哮喘+miR-20b模拟物处理组、哮喘+miR-20b模拟物对照处理组。卵清白蛋白(OVA)致敏和激发构建哮喘模型小鼠,miR-20b模拟物及其对照采用鼻滴的方式给药干预。实验流程的第49天检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞总数和分类计数,肺组织进行HE染色观察病理学变化,ELISA检测BALF中血管内皮生长因子(VEGF)的浓度。结果哮喘小鼠经miR-20b模拟物处理后,BALF中细胞总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的分类计数明显降低(P<0.01),并且气道黏膜增厚减轻,气道腔内粘液分泌及支气管周围炎性细胞的浸润减少。与哮喘组BALF中VEGF的含量28.55±3.42 pg/m L相比,哮喘+miR-20b模拟物处理组的含量18.19±3.67 pg/m L明显降低(P<0.01)。结论 miR-20b对哮喘小鼠气道炎症产生抑制作用,这一效应可能是通过降低VEGF的表达来介导。
  • 【期刊】 miR-20b过表达对P19细胞增殖和细胞分化的影响

    刊名:发育医学电子杂志 作者:朱莎莎 ; 刘雪华 ; 余章斌 ; 朱春 ; 李萌萌 ; 韩树萍 ; 胡晓山 ; 朱金改 ; 彭宇竹 关键词:P19细胞 ; miR-20b ; 细胞增殖 ; 心肌分化 机构:南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科 ; 南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科 年份:2014
    摘要:目的探讨miR-20b过表达对P19细胞增殖和细胞分化的影响。方法将包含鼠miR-20b成熟序列的慢病毒载体及空载体分别感染P19细胞,通过嘌呤霉素筛选2周,建立稳定过表达鼠mR-20b的P19细胞系。用Real-time PCR的方法验证稳定细胞表达株。用CCK-8方法检测稳定感染miR-20b过表达慢病毒和空载体的P19细胞间细胞增殖的差别。将稳定感染的两组细胞以无血清培养液37℃孵育24小时使细胞停留于G0期,而后恢复血清培养,取不同时间点的细胞,使用流式细胞仪检测两组间细胞周期的差别,从而间接验证CCK-8的结果。以1%二甲基亚砜(DMSO)将两组稳定感染的P19细胞诱导分化为心肌细胞,Real-time PCR检测心肌分化相关标志基因的表达,并用光镜观察分化过程中的形态变化。结果建立了稳定表达miR-20b的P19细胞系,与空载体组相比,miR-20b过表达可抑制P19细胞的增殖,促进心肌分化相关标志基因的表达(P<0.05,P<0.01或P<0.001)。结论 miR-20b过表达可显著抑制P19细胞的增殖,并具有促进P19细胞向心肌细胞分化的作用。
  • 【期刊】 miR-20b 在肾癌中的表达分析及临床意义研究

    刊名:《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 作者:金露 ; 李一帆 ; 陈独群 ; 苏郑明 ; 刘家驹 ; 杨尚琪 ; 桂耀庭 ; 毛向明 ; 来永庆 关键词:肾肿瘤 ; 肿瘤分期 机构:安徽医科大学 ; 安徽医科大学 ; 北京大学深圳医院泌尿外科 ; 北京大学深圳医院男性生殖实验室 年份:2015
    摘要:目的:检测 miR-20b 在肾癌及癌旁组织中的表达水平,分析 miR-20b 的表达与临床病理特征之间的关系,探究其临床意义。方法提取42例手术切除的肾癌及配对癌旁组织标本中的总RNA,经逆转录获得 cDNA,通过实时荧光定量 PCR 检测研究标本中 miR-20b 的表达量,使用统计学软件分析 miR-20b 表达的差异及表达水平与患者临床病理特征之间的相关性。结果 miR-20b 在肾癌组织中的表达水平明显低于配对癌旁组织(P 〈0.05),其中有29例(69.048%)肾癌标本 miR-20b表达下调。肾癌组织中 miR-20b 表达量与患者性别、年龄、肾癌组织类型、AJCC 临床分期、TNM 分期无明显相关(P 〉0.05)。结论 miR-20b 在肾癌组织中的表达明显下调,提示其可能和肾癌的发生发展相关。
  • 【期刊】 miR-20b在肾癌中的表达分析及临床意义研究

    刊名:现代泌尿生殖肿瘤杂志 作者:金露 ; 李一帆 ; 陈独群 ; 苏郑明 ; 刘家驹 ; 杨尚琪 ; 桂耀庭 ; 毛向明 ; 来永庆 关键词:肾肿瘤 ; 肿瘤分期 ; 微小RNAs ; miR-20b 机构:安徽医科大学 ; 安徽医科大学 ; 北京大学深圳医院泌尿外科北京大学深圳医院男性生殖实验室 年份:2015
    摘要:目的检测miR-20b在肾癌及癌旁组织中的表达水平,分析miR-20b的表达与临床病理特征之间的关系,探究其临床意义。方法提取42例手术切除的肾癌及配对癌旁组织标本中的总RNA,经逆转录获得cDNA,通过实时荧光定量PCR检测研究标本中miR-20b的表达量,使用统计学软件分析miR-20b表达的差异及表达水平与患者临床病理特征之间的相关性。结果 miR-20b在肾癌组织中的表达水平明显低于配对癌旁组织(P<0.05),其中有29例(69.048%)肾癌标本miR-20b表达下调。肾癌组织中miR-20b表达量与患者性别、年龄、肾癌组织类型、AJCC临床分期、TNM分期无明显相关(P>0.05)。结论 miR-20b在肾癌组织中的表达明显下调,提示其可能和肾癌的发生发展相关。
  • 【期刊】 人肝癌组织中miR-20b的表达水平及其与临床病理关系

    刊名:肝脏 作者:刘忆华 ; 成善泉 ; 郑安斌 ; 罗燕 关键词:人肝癌组织 ; 表达水平 ; 病理参数 机构:湖北省阳新县人民医院病理科 ; 湖北省阳新县人民医院病理科 ; 湖北省阳新县人民医院消化内科 ; 湖北省肿瘤医院胸部放疗科 年份:2017
    摘要:目的 检测人肝癌组织中miR-20b的表达水平,分析miR-20b的表达与临床病理参数的关系,探究miR-20b的临床意义.方法 收集本院肝癌组织标本80例,正常肝组织80例,分别作为实验组和对照组,提取肝癌组织及正常组织中的总RNA,并逆转录合成cDNA;通过RT-PCR(Real Time PCR)分别检测实验组和对照组中miR-20b的表达水平,然后以miR-20b在实验组的表达水平为依据,将肝癌患者分为低表达组以及高表达组,并运用SPSS软件分析miR-20b的表达水平与肝癌患者临床病理参数的关系.结果 与对照组相比,在实验组中大部分肝癌组织中的miR-20b的表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).虽然miR-20b的表达与肿瘤大小、年龄、性别以及肿瘤的分级无相关性,但是miR-20b的表达与肿瘤的复发(P<0.05)及转移(P<0.05)却紧密相关.提示当判断肝癌患者的预后情况时,miR-20b的表达水平可作为一项独立的预测因子.结论 miR-20b在肝脏组织中的表达与肿瘤的转移以及复发紧密相关,因此可将miR-20b的表达水平作为一个预测指标,判断肝癌患者的预后情况.
  • 【期刊】 miR-20b对小鼠RAW264.7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

    刊名:上海交通大学学报:医学版 作者:宋传旺 ; 陶象男 ; 唐洁 ; 申林 关键词:20b ; miR ; 血管内皮生长因子 ; RAW264 ; 7细胞 机构:蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室 ; 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室 ; 蚌埠医学院科研中心 年份:2014
    摘要:目的探讨miR-20b对小鼠RAW264.7细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法以不同浓度(1、10、50、100、200ng/mL)TNF-α刺激小鼠RAW264.7细胞24h,ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α(50ng/mL)刺激RAW264.7细胞6h,Real-TimePCR检测miR.20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264.7细胞,用TNF-α(100ng/mL)刺激24h,ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264.7细胞分泌VEGF,50-100ng/mLTNF-α.是最适合的刺激浓度;50ng/mLTNF-α刺激RAW264.7细胞6h,VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的(1.60±0.85)倍,而miR-20b的相对表达量降至对照组(0.55±0.33)倍。PicTar算法表明,小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后,TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制(P〈0.01),但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响(P〉0.05)。结论小鼠RAW264.7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。
  • 【期刊】 miR-20b对自身免疫性肝炎小鼠肝脏的保护作用及机制

    刊名:山东医药 作者:孟子愉 ; 朱恩东 关键词:自身免疫性肝炎 ; 微小RNA-20b ; 刀豆蛋白A ; 丙氨酸转氨酶 ; 炎症因子 ; 干扰素 ; 白细胞介素 机构:天津医科大学代谢病医院内分泌研究所国家卫生健康委员会激素与发育重点实验室天津市代谢性疾病重点实验室 ; 天津医科大学代谢病医院内分泌研究所国家卫生健康委员会激素与发育重点实验室天津市代谢性疾病重点实验室 年份:2018
    摘要:目的观察miR-20b对自身免疫性肝炎小鼠肝脏的保护作用,并探讨其作用机制。方法将52只小鼠随机分成模型组16只、对照慢病毒组18只、miR-20b慢病毒组18只。模型组正常饲养,对照慢病毒组注射点突变miR-20b与靶基因结合的种子序列而构建得到对照载体,miR-20b慢病毒组注射miR-20b慢病毒表达载体。7 d后三组均注射刀豆蛋白A(Con A)诱导自身免疫性肝炎。造模后6、12、18、24、36、48 h眼静脉采血,采用赖氏法检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平;造模后2 h采用ELISA法检测血清炎症因子IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-4水平;处死小鼠,取肝组织进行病理切片及HE染色,观察肝组织损伤情况;应用实时荧光定量PCR法检测肝组织中IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-4 mRNA表达。结果模型组血清ALT水平于造模后6 h开始升高,18 h左右达峰值,48 h左右基本恢复。与对照慢病毒组相比,miR-20b慢病毒组血清ALT水平降低(P <0. 05);模型组与对照慢病毒组比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。对照慢病毒组肝组织有一定面积的坏死区域,同时伴有炎症细胞浸润和肝实质细胞坏死;miR-20b慢病毒组仅有炎症细胞浸润,未见明显坏死区域。与对照慢病毒组相比,miR-20b慢病毒组血清IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-4水平和肝组织中IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-4 mRNA表达水平均降低(P均<0. 05),模型组与对照慢病毒组比较差异无统计学意义(P均> 0. 05)。结论 miR-20b在小鼠自身免疫性肝炎的病程中发挥一定的保护作用,其机制可能是通过抑制肝脏炎症反应从而减轻肝损伤。
  • 【期刊】 miR-20b对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制

    刊名:临床与病理杂志 作者:王政;王芳; 关键词:miR-20b;;卵巢癌;;转移;;侵袭;;血管内皮细胞生长因子 机构:武汉市中医医院检验科 ; 武汉市中医医院检验科 ; 武汉市传染病医院肿瘤科 年份:2017
    摘要:目的:研究miR-20b在卵巢癌细胞系中的表达及其对迁移和侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR检测卵巢癌细胞系HO8910,A2780,SKOV3与正常卵巢细胞系Hose中miR-20b的表达水平。将A2780细胞系分成两组,miR-20b模拟物组和阴性对照组,分别转染miR-20b mimics和阴性对照质粒;细胞划痕实验和Transwel l实验分别测定两组细胞迁移和侵袭能力,qRT-PCR和Western印迹分别测定两组血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)mRNA和蛋白表达水平。结果:miR-20b在卵巢癌细胞系HO8910,A2780,SKOV3中低表达,分别为0.30±0.05,0.23±0.03及0.10±0.02,显著低于Hose细胞系的1.00±0.03(P<0.001)。miR-20b模拟物组划痕愈合率为23.20%±3.50%,阴性对照组为65.70%±8.30%,miR-20b模拟物组划痕愈合率显著低于阴性对照组(P<0.01)。miR-20b模拟物组侵袭细胞数为(21.3±4.5)个,阴性对照组为(73.5±6.7)个,miR-20b模拟物组侵袭细胞数显著少于阴性对照组(P<0.01)。miR-20b模拟物组VEGF mRNA相对表达量为0.30±0.02,而阴性对照组为1.00±0.05,miR-20b模拟物组VEGF mRNA表达量显著低于阴性对照组(P<0.001)。miR-20b模拟物组VEGF蛋白表达量为118.00±8.00,显著低于阴性对照组的180.00±5.90(P<0.05)。结论:miR-20b在卵巢癌细胞系中低表达,过表达miR-20b抑制卵巢癌细胞转移与侵袭,可能通过下调VEGF发挥抑癌作用。
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