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  • 【期刊】 Rictor/mTORC2调节小鼠睾丸血睾屏障与精子发生

    刊名:南方医科大学学报 作者:董合玲 ; 吴洪渊 ; 傅友 ; 戴萌 ; 白晓春 ; 王红 关键词:血睾屏障 ; 睾丸支持细胞 ; 精子发生 ; 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 机构:暨南大学体育学院 ; 暨南大学体育学院 ; 南方医科大学 ; 南方医院健康管理科 ; 南方医科大学 ; 细胞生物学教研室 ; 南方医科大学第三附属医院 ; 广东省骨科研究院 年份:2017
    摘要:目的 研究Rictor/mTORC2在睾丸血睾屏障形成、睾丸发育和精子发生中的作用及相关机制.方法 采用Cre-loxP重组酶系统,构建睾丸支持细胞中rictor基因敲除小鼠.比较敲除鼠和对照鼠的生殖器官外观和质量.HE染色观察睾丸和附睾的组织形态.采用流式细胞技术检测生精小管的细胞周期.采用免疫荧光技术检测增殖蛋白(Ki-67)和分离酶蛋白的表达.采用免疫组化和Western blot技术检测血睾屏障相关蛋白表达.结果 相比对照鼠,敲除鼠的睾丸和附睾体积和重量都明显变小(P<0.01);敲除鼠的生精细胞中二倍体细胞显著上升(P<0.01),单倍体细胞显著下降(P<0.01),而四倍体细胞、Ki-67和分离酶蛋白无显著差异;血睾屏障相关蛋白出现严重的位置错乱,而蛋白表达量不受影响.结论 睾丸支持细胞中rictor基因的正常表达,在血睾屏障结构完整性维持和功能发挥以及精子正常发生中起着至关重要作用.
  • 【期刊】 Rictor在胚胎期肝脏造血干细胞中的作用研究

    刊名:中国实验血液学杂志 作者:王伟丽 ; 孙晓璐 ; 王乐 ; 穆晓环 ; 袁卫平 关键词:Rictor ; 胎肝 ; 造血干细胞 ; mTORC2 机构:中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室 ; 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室 ; 天津医科大学总医院妇产科生殖中心 年份:2019
    摘要:目的:观察Rictor在血细胞特异敲除后对胎肝造血的影响。方法:取实验组Vav-Cre;Rictorf/f小鼠和对照组Rictorf/+或Rictorf/f小鼠E12.5 0.08ee胎肝细胞进行骨髓重建移植实验,观察Rictor敲除对造血干细胞重建造血能力的影响。同时,实验组和对照组小鼠分选E14.5胎肝细胞0, 10, 20, 40, 60, 80个造血干细胞进行极限稀释移植实验,检测Rictor敲除后具有重建造血能力的造血干细胞的数量。进一步进行细胞周期实验以及流式细胞术分选E12.5通过一次移植成功重建造血的供体细胞进行二次移植实验,检测Rictor敲除对造血干细胞自我更新能力的影响。结果:骨髓重建造血实验结果显示,移植后4个月对照组Rictorf/+或Rictorf/f 8只受体小鼠全部重建造血功能,重建率为77.2%±11.1%,每个胎肝有57个LT-RU,实验组Vav-Cre;Rictorf/f 8只受体全部重建,重建率为37.0%±16.3%,每个胎肝8个LT-RU。极限稀释移植实验显示,移植后4个月对照组每17个SLAM细胞,实验组每39个SLAM细胞有1个具有重建造血能力的造血干细胞。二次移植实验证明,每只受体移植4×10~5供体细胞,1个月后对照组4只受体有2只重建,实验组0只重建。并且进一步证明实验组S/G2/M期细胞比率增加。结论:在胎肝造血过程中,特异敲除血细胞Rictor会导致重建造血能力降低,具有重建造血能力的造血干细胞数量下降,造血干细胞自我更新能力降低。
  • 【期刊】 氧化低密度脂蛋白下调血管内皮细胞表达Rictor

    刊名:基础医学与临床 作者:于淼 ; 吕宏娟 ; 尹洪超 关键词:Rictor ; 血管内皮细胞 ; 氧化低密度脂蛋白 ; eNOS 机构:中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院内分泌科卫生部内分泌重点实验室 ; 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院内分泌科卫生部内分泌重点实验室 ; 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理学系 年份:2013
    摘要:目的探讨氧化低密度脂蛋白对培养血管内皮细胞表达基因Rictor的影响。方法分离并培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度(10、20、40和80 mg/L)氧化低密度脂蛋白作用24 h后,用RT-PCR及Western blot检测Rictor的表达情况,并检测转染Rictor后,蛋白激酶Akt及eNOS磷酸化的变化,用硝酸还原酶还原法测定NO释放量。结果氧化低密度脂蛋白显著降低Rictor的mRNA及蛋白的表达量(P<0.01),使Rictor-mTOR复合物形成减少。转染Rictor后,不仅Rictor表达增加而且使蛋白激酶Akt及eNOS磷酸化增加;内皮细胞NO释放量增多(P<0.05)。结论影响内皮细胞表达Rictor,是氧化低密度脂蛋白诱发血管内皮细胞功能不良的重要机制之一。
  • 【期刊】 二代测序探究晚期肺癌患者RICTOR扩增和P13K基因改变

    刊名:《循证医学》 关键词:二代测序 ; 肺鳞癌 ; mTOR通路 ; FGFR1扩增 ; P13K变异 年份:2016
    摘要:研究一:靶向治疗在肺癌中取得了重大进展,但仍有接近一半的肺腺癌患者未能确定常规治疗靶点的基因改变,有学者通过二代测序技术在一位年轻肺腺癌患者发现仅有RICTOR扩增。RICTOR是mTOR复合体2(mTORC2)的重要组成成分,mTORC2在多个癌种的调控肿瘤细胞迁移、浸润和转移中发挥了重要作用,但是RICTOR扩增在人群中的发生率、是否为致瘤基因以及对药物的敏感性等问题有待阐明。
  • 【期刊】 二代测序探究晚期肺癌患者RICTOR扩增和P13K基因改变

    刊名:循证医学 关键词:二代测序 肺鳞癌 mTOR通路 FGFR1扩增 P13K变异 年份:2016
    摘要:研究一:靶向治疗在肺癌中取得了重大进展,但仍有接近一半的肺腺癌患者未能确定常规治疗靶点的基因改变,有学者通过二代测序技术在一位年轻肺腺癌患者发现仅有RICTOR扩增。RICTOR是mTOR复合体2(mTORC2)的重要组成成分,mTORC2在多个癌种的调控肿瘤细胞迁移、浸润和转移中发挥了重要作用,但是RICTOR扩增在人群中的发生率、是否为致瘤基因以及对药物的敏感性等问题有待阐明。
  • 【期刊】 RICTOR对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活力的影响

    刊名:中国病理生理杂志 作者:郭欣 ; 胡爱玲 ; 方霖楷 ; 刘岩 ; 潘云峰 关键词:RICTOR蛋白 ; 关节炎 ; 类风湿 ; 成纤维样滑膜细胞 ; RNA干扰 机构:中山大学附属第三医院风湿免疫科 ; 中山大学附属第三医院风湿免疫科 ; 中山大学附属第三医院护理部 年份:2013
    摘要:目的:通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)mTORC2的特异组成蛋白RICTOR的表达,观察其对细胞活力的影响。方法:组织块法培养RA-FLS。应用阳离子脂质体转染的方法,把化学合成的特异性RICTOR siRNA转染RA-FLS,并以转染非特异性siRNA作为阴性对照。利用荧光定量PCR法分析转染24 h后细胞RICTOR mRNA表达水平的变化;Western blotting法分析转染48和72 h后细胞RICTOR蛋白表达水平的变化;以噻唑蓝(MTT)比色法检测转染成纤维样滑膜细胞不同时间(24、48和72h)RICTOR siRNA对细胞活力的影响。结果:荧光定量PCR结果显示特异性RICTOR siRNA转染组与对照组相比,细胞中RICTOR的mRNA表达水平显著下调,24 h干扰效率达78.3%±63.71%(P<0.01)。Western blotting结果显示与对照组相比,RICTOR siRNA转染组48 h和72 h后RICTOR蛋白表达水平明显降低,沉默效率分别为92.48%±6.14%和98.57%±1.40%(均P<0.01)。MTT结果显示,早期(24和48 h)RICTOR siRNA转染组与阴性对照组细胞存活率比较无显著差异;72 h后,RICTOR siRNA转染组与阴性对照相比,细胞活力明显降低,抑制率为90.14%±1.90%(P<0.01)。结论:转染特异性RICTOR siRNA可降低RA-FLS的活力,提示mTORC2可能与RA-FLS的生长有关。
  • 【期刊】 Rictor基因特异性RNA干扰表达载体的构建和筛选

    刊名:中华全科医学 作者:邹根贵 ; 何春锋 ; 刘永 关键词:RNA干扰 ; Rictor基因 ; 膀胱癌 ; 影响 机构:上海交通大学附属第一人民医院移植泌尿外科 ; 上海交通大学附属第一人民医院移植泌尿外科 ; 上海长征医院泌尿外科 年份:2012
    摘要:目的构建针对Rictor基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人膀胱癌T24细胞,观察其对目的基因Rictor表达的影响,为探讨沉默Rictor基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响奠定基础。方法根据GENEBANK提供Rictor基因系列,设计并化学合成三对Rictor-RNAi和一对阴性对照寡核苷酸序列,定向克隆入真核质粒载体pGCSIL-PUR中,构建pGCSIL-RICTOR-RNAi表达载体。各质粒载体瞬时转染到T24细胞,Western-Blot检测筛选载体。筛选出的载体稳定转染,Realtime-PCR和Western-Blot筛选干扰效果明显的稳定株。结果重组质粒pGCSIL-RICTOR-RNAi经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,成功构建Rictor-RNAi载体。瞬时转染T24细胞,RICTOR蛋白表达明显降低。稳定转染T24细胞,Rictor基因表达在mRNA水平和蛋白水平均明显降低。结论成功构建Rictor-RNAi表达载体,转染T24细胞后可有效抑制Rictor表达。
  • 【期刊】 白藜芦醇靶向mTORC2/Rictor抑制HUVECs的增殖迁移及管腔形成

    刊名:基础医学与临床 作者:李明珠 ; 刘丽乔 ; 刘卓琦 ; 王群 关键词:RICTOR ; 白藜芦醇 ; 静脉移植物再狭窄 ; mTORC2 机构:[1]南昌大学第一临床医学院 ; [1]南昌大学第一临床医学院 ; [2]南昌大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 ; [3]南昌大学第一附属医院心胸外科 年份:2018
    摘要:目的探讨白藜芦醇对腺病毒介导的Rictor基因转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖、迁移及管腔形成的影响。方法将PCR扩增得到的目的基因Rictor定向克隆入GV314载体获得重组质粒,经AdMax包装系统与辅助包装质粒在HEK 293T细胞中重组构建Rictor过表达腺病毒载体(Ad-Rictor),不含目的基因的Ad-Null为阴性对照组。分离培养HUVECs后分别用Ad-Rictor及Ad-Null重组腺病毒感染细胞,另设空白对照组及白藜芦醇干预组Ad-Rictor+Res。感染后荧光显微镜及Western blot检测重组蛋白表达;CCK8、划痕实验和血管形成实验观察HUVECs增殖、迁移及血管形成能力。结果重组腺病毒Ad-Rictor及Ad-Null构建成功。与对照组相比,Ad-Rictor感染HUVECs显著上调基因Rictor的表达,提高了HUVECs的增殖活力,迁移和体外管腔形成能力(P<0.05);白藜芦醇干预显著抑制了Rictor过表达情况下HUVECs的增殖、迁移和体外管腔形成(P<0.05)。结论白藜芦醇可以靶向mTORC2/Rictor抑制人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及管腔形成。
  • 【期刊】 内皮和造血系统特异性敲除Rictor基因对胎肝造血的影响

    刊名:生物技术通讯 作者:穆晓环 ; 王伟丽 ; 赵云泽 ; 倪艳丽 ; 李专 ; 顾洁 ; 张丽艳 ; 汪晓敏 ; 程涛 ; 刘汉芝 ; 袁卫平 ; 刘兵 关键词:Rictor基因 ; VEC-Cre ; Vav1-Cre ; 胎肝造血 ; 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 机构:军事医学科学院附属医院肿瘤学研究室 ; 军事医学科学院附属医院肿瘤学研究室 年份:2014
    摘要:目的:研究Rictor基因对胚胎发育过程中胎肝造血的影响。方法:利用Cre-LoxP基因敲除系统,特异性在小鼠内皮(VEC-Cre)和造血(Vav1-Cre)系统敲除Rictor基因;通过流式细胞术分析特异敲除Rictor基因后小鼠胚胎第15 d胎肝中的各系细胞比例的变化,并进一步分析造血干细胞的变化。结果:利用VEC-Cre和Vav1-Cre小鼠敲除Rictor基因后,胎肝中各系细胞比例均有所减少,B细胞比例的减少较为明显,造血干细胞比例也明显减少。结论:Rictor基因敲除损害胎肝组织中造血干细胞的产生和各系细胞的分化。
  • 【论文】 Rictor在血管新生及成熟中的作用机制研究

    作者:司小琴 关键词:mTOR-Rictor ; 血管生成 ; 内皮细胞 ; RNA干扰 机构:云南中医学院 ; 云南中医学院 年份:2017
    摘要:缺血性疾病如:脑缺血、肢体缺血、心肌缺血等已成为威胁人类健康的杀手之一。目前,促进缺血后血管新生,改善侧支循环来治疗缺血性疾病已成为心血管领域的研究热点。在血管生成至成熟过程中血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)起到极其关键的作用。已有相关研究表明m TOR-Rictor在调节内皮细胞功能中发挥重要作用,但其在血管形成至成熟过程中的作用机制还不明确。本课题前期研究表明Rictor缺失后,小鼠术后缺血区新生血管数量虽有增加但相对正常血管内皮细胞排列絮乱且形态不规则。为了验证Rictor在血管成熟中是否发挥作用及探索其作用机制,本课题通过利用m TOR阻断剂KU0063794及m TORC1阻断剂Rapamycin,缺氧环境下,细胞水平间接推测m TOR-Rictor在缺血后血管成熟中的作用机制,并通过整体动物水平及细胞水平RNA干扰验证m TOR-Rictor在血管成熟中作用。方法:1、原代培养小鼠胸主动脉内皮细胞(mouse aortic endothelial cells,MAECs),用免疫荧光方法鉴定MAECs。采用体外i CELLigence实时细胞分析系统及CCK8试验方法,在正常细胞培养条件下检测KU0063794及Rapamycin对小鼠血管内皮细胞生存率的影响。2、通过Transwell、细胞划痕、细胞成管实验方法研究m TOR-Rictor对小鼠内皮细胞侵袭、迁移、成环能力的影响。3、在缺氧细胞培养条件下,加入不同浓度的KU0063794及Rapamycin,用酶联免疫吸附法检测小鼠内皮细胞培养基上清液中VEGF和ANG1的释放量。4、采用Western Blot技术检测缺氧条件下加入不同浓度KU0063794及Rapamycin后Akt、p-Akt蛋白表达变化。之后检测小鼠血管内皮细胞中Rictor、CX43、PDGF、TGFβ1、Smad3、e NOS、p-e NOS等与血管生成、成熟有关蛋白表达变化。5、shRNA下调MAECs中Rictor表达,western blot检测蛋白Rictor、CX43、PDGF、TGFβ1、Smad3表达;QPCR检测sh RNA干扰后,Rictor、CX43、TGFβ1基因水平变化,酶联免疫法检测培养基上清液ANG1含量。6、小鼠下肢缺血造模,在体干扰Rictor,7天后western blotting法测术侧腓肠肌Rictor蛋白表达变化,同时取小鼠腓肠肌进行冰冻切片,免疫荧光法检测血管新生情况。结果:(1)免疫荧光鉴定原代培养细胞为小鼠胸主动脉内皮细胞;KU0063794及Rapamycin随着浓度升高,对细胞损伤越大。(2)KU0063794处理后细胞迁移、侵袭、成环能力与空白组相比明显下降,有显著性差异(P<0.05)。Rapamycin处理组能抑制细胞迁移、侵袭、成环能力,相对KU0063794处理抑制能力较弱,高浓度之间相比有显著性差异(P<0.05),提示m TOR-Rictor可促进内皮细胞迁移、侵袭、成环。(3)KU0063794组在缺氧环境下,与空白组比较VEGF、ANG1释放量明显降低(P<0.05);Rapamycin处理组与空白组相比,VEGF释放量降低,有统计学差异(P<0.05),ANG1释放量相比空白组差别不大,提示m TOR-Rictor可促进内皮细胞释放VEGF、ANG1。(4)缺氧环境下,较高浓度KU0063794处理组与Rapamycin处理组相比,p-Akt、p-e NOs、TGFβ1、Smad3、CX43、PDGF蛋白表达明显降低(P<0.01),提示m TOR-Rictor可促进p-Akt、p-e NOs、TGFβ1、Smad3、CX43、PDGF蛋白表达。(5)sh RNA下调MAECs中Rictor表达相对成功,下调Rictor后,TGFβ1、CX43、PDGF、Smad3表达显著性下降(P<0.05)。QPCR检测sh RNA干扰后,Rictor,CX43、TGFβ1基因水平明显下调,且Rictor下调后,ANG1释放减少,实验结果加阻断剂后实验结果趋势一致。(6)小鼠下肢缺血造模后,在体干扰Rictor后,小鼠腓肠肌Rictor蛋白表达水平下降,免疫荧光检测新生血管数量有增加,但内皮细胞排列絮乱,提示Rictor可促进血管稳定。结论:实验结果提示,mTOR-Rictor在缺氧环境下能促进内皮细胞中VEGF等相关促血管生成因子释放从而促进血管内皮细胞迁移、侵袭及成管;促进ANG1释放进而促进新生的血管稳定;通过调节与血管形成、稳定、成熟相关信号通路PI3K-Akt-e NOS通路、PDGFR-PI3K-Akt通路、TGFβ1-ALK-Smad通路来促进血管稳定成熟。
  • 【期刊】 RNAi沉默rictor基因表达抑制人膀胱癌T24细胞体内外生长

    刊名:中国癌症杂志 作者:何春锋 ; 张青川 ; 刘永 关键词:RNA干扰 ; Rictor基因 ; 膀胱癌 ; 抑制 机构:上海中医药大学附属普陀医院泌尿外科 ; 上海中医药大学附属普陀医院泌尿外科 ; 上海交通大学附属第一人民医院泌尿外科 年份:2019
    摘要:背景与目的:膀胱癌是泌尿系统高发肿瘤,浅表性膀胱癌发展成为浸润性膀胱癌后,预后较差。该研究利用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术沉默rictor基因后,观察其对人膀胱癌T24细胞在体内外生长的影响。方法:构建3个rictor-RNAi表达载体(1#、2#和3#)和1个阴性对照载体。采用瞬时转染和稳定转染技术筛选出干扰效果明显的单克隆稳定细胞株。应用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)实验、细胞划痕试验、流式细胞术(flow cytometry,FCM)、裸鼠皮下移植瘤模型研究抑制rictor基因后对T24细胞生长的影响。结果:成功构建rictor-RNAi表达载体和阴性对照载体,瞬时转染T24细胞后,2#蛋白表达量下降最明显。利用2#载体稳定转染T24细胞,筛选2#-1、2#-2两株单克隆细胞。2#-1组和2#-2组细胞较空白组细胞生长减慢(P<0.05)。细胞划痕实验表明,2#-1组和2#-2组细胞的迁移速度也较空白组明显降低(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,2#-1组和2#-2组G1期细胞比例增加(P<0.05),细胞死亡率增加(P<0.05)。裸鼠皮下移植瘤模型显示,移植瘤的平均体积,2#-1组和2#-2组明显低于空白组和阴性对照组(P<0.001)。结论:成功构建rictor-RNAi稳定表达载体,可有效抑制rictor基因表达。抑制rictor基因表达能显著抑制T24细胞增殖,促进肿瘤细胞死亡,诱使细胞停滞在G1期,并能有效抑制裸鼠移植瘤的生长。RNAi抑制rictor基因的治疗策略可能为膀胱癌的治疗提供新的思路。
  • 【期刊】 Rictor在贲门癌组织中的表达及临床意义

    刊名:河南科技大学学报(医学版) 作者:张鹏飞 ; 刘永萱 ; 张亚利 ; 马志坤 ; 梁硕 ; 冯笑山 关键词:Rictor ; 贲门癌 ; 荧光定量PCR ; 免疫组织化学 机构:河南科技大学第一附属医院 ; 河南科技大学第一附属医院 年份:2015
    摘要:目的检测Rictor在贲门癌及相应癌旁正常组织中的表达差异,分析其与贲门癌临床病理之间及预后的关系,判断其作为贲门癌早期诊断及预后指标的可能性。方法采用荧光定量PCR方法、免疫组织化学S-P法检测Rictor在30例贲门癌组织及相应癌旁正常组织中的表达情况。结果贲门癌癌旁组织中Rictor基因拷贝数为9.10×108~11.12×109,贲门癌组织中为7.78×105~8.58×106;Rictor在贲门癌组织及相应癌旁正常组织中的阳性表达率分别为56.7%(17/30)、76.7%(23/30),统计学处理有显著性差异(P<0.05)。Rictor在贲门癌组织中表达降低与患者的年龄、性别、TNM分期及淋巴结转移均无关(P>0.05),与肿瘤分化程度相关(P<0.05)。结论 Rictor在贲门癌旁组织中的表达明显高于贲门癌组织中的表达,初步推断该基因的表达与癌症进程相关,有可能成为贲门癌早期诊断、治疗以及预测贲门癌患者预后的具有重要应用价值的指标。