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  • 【期刊】 Establishment of Universal RT-PCR Detection Method for Duck Reovirus

    刊名:Agricultural Biotechnology 作者:Yongjuan WANG ; Weiyong ZUO ; Shanyuan ZHU ; Anping WANG ; Shuang WU ; Weiming HONG ; Hui LU 关键词:Duck ; Reovirus ; RT-PCR ; Detection 机构:Jiangsu ; Jiangsu ; Agri-animal ; Husbandry ; Vocational ; College ; Jiangsu ; Provincial ; Laboratory ; Veterinary ; Bio-pharmaceutical ; Research 年份:2016
    摘要:This study was conducted to rapidly detect clinical infection condition of duck reovirus. A pair of specific primers was designed according to gene sequence of σC protein of duck reovirus,and a specific RT-PCR detection method of duck reovirus was established with genome of duck reovirus as template. Different samples were collected from ducks infected by suspected reovirus in Jiangsu Province and subjected to PCR detection. The results showed that the established RT-PCR method could specifically amplify the 438 bp sequence of the conservative region of σC gene,and detec the DNA of duck reovirus as low as 1 gf,with a detection rate of 100%. The RT-PCR method could be used for rapid clinical diagnosis of duck reovirus.
  • 【期刊】 猪蓝耳病RT-PCR检测方法的建立

    刊名:畜牧兽医科技信息 作者:纪爱英 ; 张彦昌 ; 王皓婷 ; 赵素杏 ; 孙岐 ; 程龙 关键词:猪蓝耳病 ; 开放阅读框7 机构:河北省邯郸市动物疫病预防控制中心 ; 河北省邯郸市动物疫病预防控制中心 ; 邯郸市饲料工业办公室 年份:2017
    摘要:本研究针对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的开放阅读框7(orf7)序列设计扩增引物,建立RT-PCR检测方法,既可检测出高致病性蓝耳病,也可检测出蓝耳病经典毒株,提高了蓝耳病的检出率.
  • 【期刊】 RT-PCR测序法检测G6PD缺乏症基因突变

    刊名:《中国当代儿科杂志》 作者:吕荣钰 ; 陈小文 ; 张民 ; 陈运生 ; 于洁 ; 文飞球 关键词:G6PD缺乏症 ; 基因突变 ; RT-PCR ; 基因测序 ; 儿童 机构:重庆医科大学附属深圳市儿童医院血液肿瘤科 ; 重庆医科大学附属深圳市儿童医院血液肿瘤科 ; 重庆医科大学附属深圳市儿童医院儿科研究所 ; 重庆医科大学附属深圳市儿童医院检验科 ; 重庆医科大学附属儿童医院血液肿瘤科 年份:2016
    摘要:目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症是最常见的遗传性溶血性红细胞酶缺陷病,绝大多数为编码区单碱基突变,现有的多种基因突变检测方法均存在漏检率。该研究拟探讨RT-PCR测序法检测G6PD缺乏症基因突变的可行性。方法将2013年8月至2014年7月的195例贫血查因或体检儿童根据G6PD/6GPD比值(〈1.00)分为G6PD缺乏组(130例)和对照组(G6PD/6GPD比值≥1.00)65例,优化引物设计及PCR扩增条件,采用RT-PCR测序法对G6PD缺乏组及对照组进行全编码序列分析,基因组DNA测序验证。结果 G6PD缺乏组的基因突变检出率为100%,共检出13种错义突变,包括1种新突变。对照组中28例男性均没有检出错义突变;37例女性中13例检出杂合型错义突变,1例国内外未见报道的纯合型同义突变C1191T,14例C1311T多态位点。对照组的女性标本存在较高的G6PD缺乏症(携带者)漏检率(35%,13/37)。结论 RT-PCR测序法对G6PD基因突变检出率高,具有较大临床诊断价值。
  • 【期刊】 小鼠β-actin基因的RT-PCR克隆与真核表达

    刊名:辽东学院学报(自然科学版) 作者:王丹丹 ; 李冬颖 关键词:小鼠 ; β-actin基因 ; RT-PCR ; 克隆 ; 真核表达 机构:辽东学院农学院 ; 辽东学院农学院 年份:2016
    摘要:以Trizol-异丙醇法提取小鼠肝脏总RNA,根据NCBI数据库中小鼠β-actin基因序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增小鼠β-actin基因编码区并测序;以pcDNA3.1-flag为载体,构建β-actin基因真核表达质粒,继而将其重组产物转染于HeLa细胞,采用Western blot印迹法鉴定重组蛋白pcDNA3.1-flag/β-actin的表达水平。结果表明:克隆获得的289 bp片段与NCBI数据库中β-actin基因序列完全吻合,并且成功构建的pcDNA3.1-flag/β-actin真核基因表达载体,其重组质粒可在HeLa细胞中有效表达约43×10~3KD融合蛋白。
  • 【期刊】 猪PEDV与PDC_OV二重RT-PCR检测方法的建立

    刊名:生物技术通报 作者:孔维欢 ; 王晶晶 ; 万鹏程 ; 石国庆 关键词:PEDV ; PDCOV ; RT-PCR ; 临床诊断 机构:石河子大学动物科技学院 ; 石河子大学动物科技学院 ; 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所 年份:2018
    摘要:旨在建立能同时检测出猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪丁型冠状病毒(Porcine delta corona virus,PDCOV)的二重RT-PCR检测方法。根据GenBank已收录发表的PEDV和PDCOV基因序列设计2对特异性引物,首先运用RT-PCR反应技术,通过PEDV和PDCOV病毒的目的基因的单项扩增,对反应条件进行优化。然后通过特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测验证确定二重RT-PCR方法的建立。结果显示,目的基因PEDV-M扩增的片段大小是750 bp,PDCOV-N扩增的片段大小是372 bp;能够同时检测出PEDV和PDCOV目的基因,却检测不到PRV、CSFV、PPV三种病毒;体系优化扩增PEDV-PDCOV混合核酸浓度下限为100 pg/μL;能够初步诊断出临床疑似病毒感染的病例。结果表明,成功的建立PEDVPDCOV二重RT-PCR检测方法,此方法敏感性高、特异性强,是一种能够快速有效的检测出猪PEDV-PDCOV单病毒感染或多病毒混合感染的临床诊断方法。
  • 【期刊】 RT-PCR测序法检测G6PD缺乏症基因突变

    刊名:中国当代儿科杂志 作者:吕荣钰[1] ; 陈小文[2] ; 张民[2] ; 陈运生[3] ; 于洁[4] ; 文飞球[1] 关键词:G6PD缺乏症 基因突变 RT-PCR 基因测序 儿童 机构:重庆医科大学附属深圳市儿童医院血液肿瘤科 ; 重庆医科大学附属深圳市儿童医院血液肿瘤科 年份:2016
    摘要:目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症是最常见的遗传性溶血性红细胞酶缺陷病,绝大多数为编码区单碱基突变,现有的多种基因突变检测方法均存在漏检率。该研究拟探讨RT-PCR测序法检测G6PD缺乏症基因突变的可行性。方法将2013年8月至2014年7月的195例贫血查因或体检儿童根据G6PD/6GPD比值(〈1.00)分为G6PD缺乏组(130例)和对照组(G6PD/6GPD比值≥1.00)65例,优化引物设计及PCR扩增条件,采用RT-PCR测序法对G6PD缺乏组及对照组进行全编码序列分析,基因组DNA测序验证。结果 G6PD缺乏组的基因突变检出率为100%,共检出13种错义突变,包括1种新突变。对照组中28例男性均没有检出错义突变;37例女性中13例检出杂合型错义突变,1例国内外未见报道的纯合型同义突变C1191T,14例C1311T多态位点。对照组的女性标本存在较高的G6PD缺乏症(携带者)漏检率(35%,13/37)。结论 RT-PCR测序法对G6PD基因突变检出率高,具有较大临床诊断价值。
  • 【期刊】 小鼠β-actin基因的RT-PCR克隆与真核表达

    刊名:《辽东学院学报:自然科学版》 作者:王丹丹 ; 李冬颖 关键词:小鼠 ; β-ACTIN基因 ; RT-PCR ; 克隆 ; 真核表达 机构:辽东学院农学院 ; 辽东学院农学院 年份:2016
    摘要:以Trizol-异丙醇法提取小鼠肝脏总RNA,根据NCBI数据库中小鼠β-actin基因序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增小鼠β-actin基因编码区并测序;以pcDNA3.1-flag为载体,构建β-actin基因真核表达质粒,继而将其重组产物转染于HeLa细胞,采用Western blot印迹法鉴定重组蛋白pcDNA3.1-flag/β-actin的表达水平。结果表明:克隆获得的289 bp片段与NCBI数据库中β-actin基因序列完全吻合,并且成功构建的pcDNA3.1-flag/β-actin真核基因表达载体,其重组质粒可在HeLa细胞中有效表达约43×10^3KD融合蛋白。
  • 【期刊】 鲤春病毒RT-PCR检测方法的建立与应用

    刊名:兽医导刊 作者:吴斌 ; 赵娜 ; 张琳 ; 肇慧君 关键词:鲤春病毒(SVCV) ; 特异性 ; 灵敏度 ; 人工感染 机构:辽宁出入境检验检疫局 ; 辽宁出入境检验检疫局 年份:2017
    摘要:本文根据鲤春病毒糖蛋白设计并合成引物,对SVCV进行扩增鉴定,对所建立的RT-PCR方法进行灵敏度和特异性实验,实验结果表明,只有SVCV能够扩增出特异性片段,大小为714bp,对照组核酸均没有扩增,表明所设计的引物具有良好的特异性,方法的灵敏度为10-5.利用建立的方法对人工感染SVCV的鲤鱼进行检测,实验结果表明,2个感染样品中均检出SVCV病毒.本实验建立的RT-PCR为SVCV检测诊断提供了新的技术手段.
  • 【期刊】 鸭呼肠孤病毒的RT-PCR检测方法的建立

    刊名:江苏农业学报 作者:王永娟 ; 左伟勇 ; 朱善元 ; 王安平 ; 吴双 ; 洪伟鸣 ; 陆辉 关键词:鸭 呼肠孤病毒 RT-PCR 检测 年份:2016
    摘要:为快速检测临床鸭呼肠孤病毒的感染情况,根据鸭呼肠孤病毒σC蛋白的基因序列设计1对特异性PCR引物,并以呼肠孤病毒基因组为模板,建立了鸭呼肠孤病毒的特异性RT-PCR检测方法。采集江苏省多地疑似呼肠孤病毒感染病料,提取基因组DNA进行RT-PCR扩增,产物经测序鉴定后判断建立的方法对临床样品的检出率。结果显示,该方法可以特异性扩增鸭呼肠孤病毒σC基因保守区438 bp的序列,与其他鸭病毒无交叉反应,最低可检测1 fg基因组DNA,对于临床样品检出率为100%。该方法可以用于临床快速诊断鸭呼肠孤病毒感染。
  • 【期刊】 一步法荧光RT-PCR检测肠道病毒EV71的研究

    刊名:现代医院 作者:刘晓青 关键词:一步法 ; RT-PCR ; 肠道病毒EV71 机构:汕尾逸挥基金医院 ; 汕尾逸挥基金医院 年份:2018
    摘要:目的建立一种快速准确诊断肠道病毒EV71型的实时荧光定量RT-PCR检测方法。方法参照NCBI公布的EV71基因序列,设计特异性引物及Taq Man探针;构建阳性重组质粒,验证其最低检测拷贝数、重复性及特异性。结果试验构建的阳性重组质粒,线性关系在9×10~2copies/μL~9×10~7copies/μL范围内检测结果良好;用该方法测得最低拷贝数为900 copies/μL,特异性和重复性(CV <5%)良好,无交叉反应;用该荧光定量RTPCR检测方法检测80份阳性样品和36份阴性样品,准确率为100%(116/116)。结论试验建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法可用于肠道病毒EV71型的快速检测。
  • 【期刊】 大连齿兰环斑病毒RT-PCR检测体系的建立

    刊名:分子植物育种 作者:倪天泽 ; 冷阳 ; 吕杰凯 ; 钱文丹 ; 冯宁 ; 侯义龙 关键词:齿兰环斑病毒 ; RT-PCR ; 检测 机构:大连大学生命科学与技术学院生命科学工作室 ; 大连大学生命科学与技术学院生命科学工作室 年份:2017
    摘要:齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)是严重危害兰科植物的主要病毒之一。本研究根据NCBI基因库中ORSV外壳蛋白基因设计特异性引物,应用RT-PCR方法对ORSV进行检测研究。本试验所使用的植物总RNA提取方法,可以提取出完整且纯度高的总RNA,能够满足RT-PCR的要求;本研究所建立起的ORSV RT-PCR检测体系,可以从感病的指示植物及染病蝴蝶兰中扩增出与预期的332 bp大小完全一致的扩增产物,而健康的指示植物无此扩增产物。对此片段的测序研究也证明了RT-PCR的检测。利用BLAST及DNAMAN 6.0.3.99软件将我们检测的蝴蝶兰齿兰环斑病毒与来自中国海南、台湾以及新加坡的病毒分离物进行同源性分析,其同源性均达98%以上。
  • 【期刊】 H9N2亚型禽流感病毒RT-PCR鉴定方法的应用

    刊名:《黑龙江畜牧兽医》 作者:司振书 ; 朱明霞 ; 王桂英 关键词:禽流感病毒(AIV) ; H9N2亚型 ; 鉴定方法 ; RT-PCR ; 血清学试验 ; 应用 机构:聊城大学农学院 ; 聊城大学农学院 年份:2016
    摘要:为了对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)进行快速鉴定,试验根据H9N2亚型禽流感病毒的HA和NA基因分别设计引物,初步建立H9N2亚型禽流感病毒的RT-PCR检测方法;同时为了检验该检测方法的可靠性,对送检的264份疑似禽流感病鸡的病料进行处理,接种SPF鸡胚,分别采用RTPCR和血清学试验两种方法检测收集的尿囊液。结果表明:两种方法均检出有14个样品为H9N2亚型禽流感病毒阳性,符合率达100%。说明建立的RT-PCR检测方法可用于鉴定H9N2亚型禽流感病毒。