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  • 【期刊】 猪蓝耳病RT-PCR检测方法的建立

    刊名:畜牧兽医科技信息 作者:纪爱英 ; 张彦昌 ; 王皓婷 ; 赵素杏 ; 孙岐 ; 程龙 关键词:猪蓝耳病 ; 开放阅读框7 机构:河北省邯郸市动物疫病预防控制中心 ; 河北省邯郸市动物疫病预防控制中心 ; 邯郸市饲料工业办公室 年份:2017
    摘要:本研究针对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的开放阅读框7(orf7)序列设计扩增引物,建立RT-PCR检测方法,既可检测出高致病性蓝耳病,也可检测出蓝耳病经典毒株,提高了蓝耳病的检出率.
  • 【期刊】 Establishment of Universal RT-PCR Detection Method for Duck Reovirus

    刊名:Agricultural Biotechnology 作者:Yongjuan WANG ; Weiyong ZUO ; Shanyuan ZHU ; Anping WANG ; Shuang WU ; Weiming HONG ; Hui LU 关键词:Duck ; Reovirus ; RT-PCR ; Detection 机构:Jiangsu ; Jiangsu ; Agri-animal ; Husbandry ; Vocational ; College ; Jiangsu ; Provincial ; Laboratory ; Veterinary ; Bio-pharmaceutical ; Research 年份:2016
    摘要:This study was conducted to rapidly detect clinical infection condition of duck reovirus. A pair of specific primers was designed according to gene sequence of σC protein of duck reovirus,and a specific RT-PCR detection method of duck reovirus was established with genome of duck reovirus as template. Different samples were collected from ducks infected by suspected reovirus in Jiangsu Province and subjected to PCR detection. The results showed that the established RT-PCR method could specifically amplify the 438 bp sequence of the conservative region of σC gene,and detec the DNA of duck reovirus as low as 1 gf,with a detection rate of 100%. The RT-PCR method could be used for rapid clinical diagnosis of duck reovirus.
  • 【期刊】 猪PEDV与PDC_OV二重RT-PCR检测方法的建立

    刊名:生物技术通报 作者:孔维欢 ; 王晶晶 ; 万鹏程 ; 石国庆 关键词:PEDV ; PDCOV ; RT-PCR ; 临床诊断 机构:石河子大学动物科技学院 ; 石河子大学动物科技学院 ; 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所 年份:2018
    摘要:旨在建立能同时检测出猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪丁型冠状病毒(Porcine delta corona virus,PDCOV)的二重RT-PCR检测方法。根据GenBank已收录发表的PEDV和PDCOV基因序列设计2对特异性引物,首先运用RT-PCR反应技术,通过PEDV和PDCOV病毒的目的基因的单项扩增,对反应条件进行优化。然后通过特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测验证确定二重RT-PCR方法的建立。结果显示,目的基因PEDV-M扩增的片段大小是750 bp,PDCOV-N扩增的片段大小是372 bp;能够同时检测出PEDV和PDCOV目的基因,却检测不到PRV、CSFV、PPV三种病毒;体系优化扩增PEDV-PDCOV混合核酸浓度下限为100 pg/μL;能够初步诊断出临床疑似病毒感染的病例。结果表明,成功的建立PEDVPDCOV二重RT-PCR检测方法,此方法敏感性高、特异性强,是一种能够快速有效的检测出猪PEDV-PDCOV单病毒感染或多病毒混合感染的临床诊断方法。
  • 【期刊】 鲤春病毒RT-PCR检测方法的建立与应用

    刊名:兽医导刊 作者:吴斌 ; 赵娜 ; 张琳 ; 肇慧君 关键词:鲤春病毒(SVCV) ; 特异性 ; 灵敏度 ; 人工感染 机构:辽宁出入境检验检疫局 ; 辽宁出入境检验检疫局 年份:2017
    摘要:本文根据鲤春病毒糖蛋白设计并合成引物,对SVCV进行扩增鉴定,对所建立的RT-PCR方法进行灵敏度和特异性实验,实验结果表明,只有SVCV能够扩增出特异性片段,大小为714bp,对照组核酸均没有扩增,表明所设计的引物具有良好的特异性,方法的灵敏度为10-5.利用建立的方法对人工感染SVCV的鲤鱼进行检测,实验结果表明,2个感染样品中均检出SVCV病毒.本实验建立的RT-PCR为SVCV检测诊断提供了新的技术手段.
  • 【期刊】 RT-PCR检测食品中诺如病毒检测研究进展

    刊名:食品工业 作者:韦带莲 王萍 关键词:食品 ; 诺如病毒 ; 提取 ; 检测方法 ; RT-PCR 机构:宜春职业技术学院医学基础部 ; 宜春职业技术学院医学基础部 年份:2017
    摘要:诺如病毒是一种通过食品传染进入人体导致人体急性肠胃炎的杯状病毒。诺如病毒的发病范围越来越广,造成的危害也越来越大。但由于诺如病毒富集及其核酸提取的困难,而且目前缺乏标准有效的诺如病毒检测方法,很难准确地检测到诺如病毒在食品中的存在。目前,荧光定量PCR由于其高灵敏度和特异性被广泛应用于食品中诺如病毒的检测,能有效预防食品中诺如病毒对人体的危害。因此,对诺如病毒的富集、核酸提取方法、诺如病毒的RT-PCR检测方法进行了综述,为控制食品中诺如病毒对人体的危害奠定基础。
  • 【期刊】 大连齿兰环斑病毒RT-PCR检测体系的建立

    刊名:分子植物育种 作者:倪天泽 ; 冷阳 ; 吕杰凯 ; 钱文丹 ; 冯宁 ; 侯义龙 关键词:齿兰环斑病毒 ; RT-PCR ; 检测 机构:大连大学生命科学与技术学院生命科学工作室 ; 大连大学生命科学与技术学院生命科学工作室 年份:2017
    摘要:齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)是严重危害兰科植物的主要病毒之一。本研究根据NCBI基因库中ORSV外壳蛋白基因设计特异性引物,应用RT-PCR方法对ORSV进行检测研究。本试验所使用的植物总RNA提取方法,可以提取出完整且纯度高的总RNA,能够满足RT-PCR的要求;本研究所建立起的ORSV RT-PCR检测体系,可以从感病的指示植物及染病蝴蝶兰中扩增出与预期的332 bp大小完全一致的扩增产物,而健康的指示植物无此扩增产物。对此片段的测序研究也证明了RT-PCR的检测。利用BLAST及DNAMAN 6.0.3.99软件将我们检测的蝴蝶兰齿兰环斑病毒与来自中国海南、台湾以及新加坡的病毒分离物进行同源性分析,其同源性均达98%以上。
  • 【期刊】 一步法荧光RT-PCR检测肠道病毒EV71的研究

    刊名:现代医院 作者:刘晓青 关键词:一步法 ; RT-PCR ; 肠道病毒EV71 机构:汕尾逸挥基金医院 ; 汕尾逸挥基金医院 年份:2018
    摘要:目的建立一种快速准确诊断肠道病毒EV71型的实时荧光定量RT-PCR检测方法。方法参照NCBI公布的EV71基因序列,设计特异性引物及Taq Man探针;构建阳性重组质粒,验证其最低检测拷贝数、重复性及特异性。结果试验构建的阳性重组质粒,线性关系在9×10~2copies/μL~9×10~7copies/μL范围内检测结果良好;用该方法测得最低拷贝数为900 copies/μL,特异性和重复性(CV <5%)良好,无交叉反应;用该荧光定量RTPCR检测方法检测80份阳性样品和36份阴性样品,准确率为100%(116/116)。结论试验建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法可用于肠道病毒EV71型的快速检测。
  • 【期刊】 1型鸭肝炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立

    刊名:河南农业科学 作者:王永娟 ; 朱善元 ; 王安平 ; 吴双 ; 洪伟鸣 ; 左伟勇 关键词: ; 1型鸭肝炎病毒 ; 反转录PCR ; 检测 年份:2017
    摘要:为建立快速检测临床1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)感染的方法,根据DHAV-1的vp1基因序列设计1对引物,以DHAV-1及其他常见的感染鸭的病毒基因组为模板,建立了DHAV-1的特异性RT-PCR检测方法;以10倍梯度稀释的DHAV-1 RNA为模板,测定该方法的灵敏度;采集江苏多地的疑似DHAV-1感染病料,提取基因组进行RT-PCR扩增,产物经测序鉴定后判断所建立方法的检测率.结果显示,建立的方法可以特异性扩增DHAV-1 vp1基因保守区360 bp的序列,最低可检测1 fg基因组模板,对临床样品检测率为100%.表明,成功建立了特异性强、灵敏度高且可以用于临床快速诊断DHAV-1感染的方法.
  • 【期刊】 鸭坦布苏病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

    刊名:中国兽药杂志 作者:邹敏 ; 张青 ; 王红 ; 刘东 ; 刘新文 ; 范根成 ; 吴发兴 关键词:鸭坦布苏病毒 ; E基因 ; RT-PCR 机构:青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室 ; 青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室 ; 中国动物卫生与流行病学中心 年份:2018
    摘要:为建立一种能快速检测鸭坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)的分子生物学方法,从GenBank中下载了51个具有代表性的黄病毒全基因组序列及白洋淀病毒等5个禽源黄病毒株E基因序列,进行了黄病毒E基因序列分析,应用Primer 5.0软件设计了一对引物,扩增目的片段为549 bp,进行了TMUV RT-PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性试验,建立了TMUV RT-PCR检测方法应用该方法对收集的14份临床疑似蛋鸭鸭坦布苏病毒病发病样品进行了检测,共检出6份TMUV核酸阳性样品,检出率达42.86%。结果表明,该方法可用于水禽坦布苏病毒病的临床快速诊断、检测及流行病学调查。
  • 【期刊】 ELISA和RT-PCR技术诊断猪戊型肝炎的对比研究

    刊名:世界最新医学信息文摘 作者:焦彤 ; 邹云梅 ; 陈晓溪 ; 高颖 ; 李丽娟 关键词:ELISA ; RT-PCR ; 诊断 ; ; 戊型肝炎 机构:大理大学农学与生命科学学院 ; 大理大学农学与生命科学学院 ; 大理大学公共卫生学院 年份:2017
    摘要:酶联免疫吸附试验(ELISA)是把抗原或抗体吸附在固相载体上,通过免疫酶染色、底物显色后,用肉眼或酶标仪判断试验结果的一种方法。反转录PCR(RT-PCR)是将病毒RNA作为模板进行逆转录,再以PCR进行核酸扩增,从而来检测病毒的一种分子生物学实验方法。本研究拟分别运用ELISA和RT-PCR技术诊断猪戊型肝炎,并对比其检测效果及灵敏性,以寻找建立快速诊断的方法,为疾病防控提供参考。
  • 【期刊】 高速RT-PCR法检测手足口病肠道病毒效果评价

    刊名:预防医学 作者:高蕾 ; 楼永良 关键词:手足口病 ; 肠道病毒 ; 高速PCR ; RT-PCR 机构:温州医科大学检验医学院生命科学学院 ; 温州医科大学检验医学院生命科学学院 年份:2018
    摘要:目的建立高速反转录PCR(RT-PCR)法,并探讨其在手足口病肠道病毒检测中的应用前景。方法采用Speed Star HS DNA polymerase和Hi Script II Reverse Transcriptase建立高速RT-PCR法,采用高速RT-PCR法和常规试剂盒法对不同浓度肠道病毒阳性基因标准品和112份手足口病核酸阳性样本进行检测,比较两种方法检测结果差异。结果高速RT-PCR法和常规试剂盒法整个PCR扩增时间分别为54和96 min。高速RT-PCR法的最低检出限为105拷贝/μL,常规试剂盒法的最低检出限为为106拷贝/μL;高速RT-PCR法的扩增效率为106.67%,高于常规试剂盒法的102.12%;两种方法的检测结果具有高度一致性(Kappa=0.755,P<0.05)。高速RT-PCR法的批内变异系数为0.88%~1.37%,批间变异系数为1.04%~2.95%。结论所建立的高速RT-PCR法具有良好的检测效率、灵敏度、重复性和稳定性,适用于手足口病肠道病毒核酸快速检测。
  • 【期刊】 牛病毒性腹泻病毒RT-PCR方法的建立及应用

    刊名:中国比较医学杂志 作者:王吉 ; 付瑞 ; 李晓波 ; 王淑菁 ; 王莎莎 ; 李威 ; 秦骁 ; 巩薇 ; 岳秉飞 ; 贺争鸣 关键词:牛病毒性腹泻病毒 ; RT-PCR ; 牛源样本 机构:中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心 ; 中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心 年份:2017
    摘要:目的建立用于牛源样本中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重RT-PCR检测方法。方法选择已发表的BVDV 1型和BVDV 2型包含5’UTR区高保守区域基因作为靶基因,分别设计合成引物,建立双重BVDV RT-PCR方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行方法学评价。同时用建立的RT-PCR方法检测了小牛血清、小牛血清去蛋白提取液、脾多肽注射液等41批次牛源性样本和64份牛血浆样本。牛源样本和64份牛临床样本。结果建立的BVDV RT-PCR检测方法与牛副流感病毒III型(BPIV3)、猪瘟病毒(CSFV)、乙型脑炎病毒(JEV)均无交叉反应;检测BVDV 1型和BVDV 2型DNA模板最低浓度分别为每微升8.87×10~2拷贝和6.31×10~2拷贝,BVDV 1型和2型c DNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带。应用建立的BVDV RT-PCR方法检测41批次牛源样本和64份牛血浆样本,核酸阳性率分别为14.6%和29.7%。结论建立的BVDV RT-PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源样本携带BVDV核酸的检测。
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