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  • 【期刊】 流感病毒RNA聚合酶抑制剂的研究进展

    刊名:中国药物化学杂志 作者:唐文萍 ; 金辄 ; 王丹妮 ; 张富荣 ; 胡春 关键词:流感病毒 ; RNA聚合酶 ; 抑制剂 机构:沈阳药科大学基于靶点的药物设计与研究教育部重点实验室 ; 沈阳药科大学基于靶点的药物设计与研究教育部重点实验室 年份:2017
    摘要:流行性感冒是由流感病毒引起的传染性疾病。流感病毒是一种RNA病毒,流感病毒RNA聚合酶是由PB1、PB2和PA 3个亚基构成的复合体,它们通过相互结合发挥功能,在流感病毒的转录复制过程中发挥着必不可少的作用。因此,如果能够抑制RNA聚合酶的PB1、PB2和PA亚基的生物活性,使其在病毒的转录和复制过程中失去活性,就能够达到抑制流感病毒的效果。本文对流感病毒RNA聚合酶抑制剂的研究进行综述,以期为抗流感病毒RNA聚合酶药物的设计提供参考。
  • 【期刊】 水牛RNA聚合酶Ⅲ启动子的克隆与鉴定

    刊名:南方农业学报 作者:张晓溪 刘庆友 邓彦飞 罗婵 崔奎青 石德顺 关键词:水牛 RNA聚合酶Ⅲ启动子 7SK U6 克隆 鉴定 基因沉默 机构:广西大学动物科学技术学院 ; 广西大学动物科学技术学院 年份:2014
    摘要:[目的]获得有效的水牛RNA聚合酶Ⅲ启动子序列,为开展水牛源细胞的基因特异沉默研究奠定基础.[方法]通过启动子上、下游保守序列对水牛源启动子7SK、U6进行克隆和启动子关键顺式作用元件识别,利用一段针对EGFP的shRNA片段(shEGFP)对水牛7SK、U6启动子进行功能性分析,然后分别在水牛源及鼠源细胞中与pEGFP-N1共转染,转染48h后用荧光显微镜检测EGFP的表达情况,并用流式细胞仪和荧光实时定量PCR检测EGFP沉默表达情况.[结果]克隆获得水牛7SK、U6启动子序列分别为430和357 bp,其OCT-1(或CACCC盒)及TATA盒高度保守.连接shEGFP后与pEGFP-N1共转染细胞,通过荧光显微镜可观察到细胞发生了明显的荧光表达沉默现象;通过流式细胞分析,发现水牛7SK和U6启动子引导的shEGFP在水牛源细胞中沉默效率高达93.82%和87.45%;荧光实时定量PCR检测结果显示,在转染bu7SK-shEGFP和buU6-shEGFP的水牛源BFF细胞中,EGFP表达水平均显著低于其他物种启动子的细胞转染组(P<0.05),而在鼠源PT67细胞中,水牛启动子的启动效率与其他物种启动子差异不显著(P>0.05).[结论]水牛7SK和U6启动子可高效启动shRNA表达,且具有一定的物种特异性.
  • 【会议】 基于T7 RNA聚合酶构建光诱导的基因开关

    作者:韩悌云 ; 陈泉 ; 刘海燕 关键词:基因开关 ; T7 RNAP拆分体系 ; 光诱导蛋白-蛋白相互作用 ; 别构调控 ; 模块化调控 机构:中国科学技术大学生命科学学院 ; 中国科学技术大学生命科学学院 年份:2017
    摘要:本研究基于T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)构建了一种可直接受外界信号控制的基因开关。构建这种基因开关采用的策略是:将T7 RNAP在指定氨基酸位置拆分成两个片段,然后与可诱导结构域融合,促使T7 RNAP拆分体系的重组装和活性恢复实现可诱导控制。本研究采用的可诱导结构域是VVD,该结构域是一种受光可激活结构域,利用VVD或其突变体(VVD—C71S或Magnets)与T7 RNAP拆分体系的融合,使T7 RNAP成为一类简单方便可靠的基因开关。该开关具有在黑暗条件下无活性,光照条件下恢复活性的特征。此外,T7RNAP拆分体系,研究发现该系统既可以采用光诱导的蛋白一蛋白相互作用方式恢复活性,也可以采用光诱导的别构效应恢复活性。而且,该拆分体系可实现模块化调控,即该拆分体系可与其它类型的化学可诱导结构域融合,以此实现化学因子诱导调控。总而言之,基于T7RNAP创建的光诱导控制的基因开关作为一类可靠适用的分子生物学工具,具有在不用环境条件下,不同时间和空间维度上实现对基因表达的精确调控,而且相较于先前报道的photo-caged T7 RNAP系统,该基因开关不涉及非天然氨基酸翻译系统,并采用可见光…蓝光作为诱导因子,可大幅降低对细胞的毒性。此外,本研究发现的T7 RNAP高度可塑性和模块化等特征为其他相关同类型研究提供了强大的参考价值。
  • 【期刊】 细菌RNA聚合酶抑制剂的分子生物学机制研究进展

    刊名:浙江大学学报(医学版) 作者:史婧 ; 冯钰 关键词:利福霉素类/药代动力学 ; 抗菌药 ; 指导DNA的RNA聚合酶类/拮抗剂和抑制剂 ; 显微镜检查,电子 ; 冷冻 ; 综述 机构:浙江大学医学院生物物理系 ; 浙江大学医学院生物物理系 ; 浙江大学医学院附属邵逸夫医院病理科 年份:2019
    摘要:细菌RNA聚合酶抑制剂利福霉素类药物是治疗结核病的一线药物,随着利福霉素类药物耐药菌的出现,开发能杀灭利福霉素类药物耐药菌且生物利用度高的新型RNA聚合酶抑制剂已迫在眉睫。细菌RNA聚合酶与不同抑制剂复合物的晶体结构和冷冻电镜结构研究揭示了RNA聚合酶抑制剂主要具有以下分子生物学作用机制:①阻止短RNA延伸;②与底物竞争;③阻止"桥螺旋"变构;④阻止蟹钳打开;⑤阻止蟹钳关闭。本文综述了这五类重要RNA聚合酶抑制剂的研究进展,以期为已有RNA聚合酶抑制剂的修饰改造和新型RNA聚合酶抑制剂的开发提供参考。
  • 【期刊】 流感病毒RNA聚合酶PA亚基:潜在抗流感药物靶点

    刊名:中国药理学通报 作者:连雯雯 ; 刘艾林 ; 杜冠华 关键词:流感病毒 ; PA亚基氨基端 ; PA亚基羧基端 ; 内切酶 ; 金属离子结合位点 ; 高通量筛选模型 机构:中国医学科学院北京协和医学院药物研究所 ; 中国医学科学院北京协和医学院药物研究所 ; 药物靶点研究与新药筛选北京市重点实验室 ; 天然药物活性物质与功能国家重点实验室 年份:2015
    摘要:流感是世界范围内的严重传染性疾病,目前抗流感药物面临的主要问题是病毒耐药性和对高致病性流感病毒的效价低。流感病毒RNA聚合酶是病毒在宿主细胞内完成复制和转录过程的关键性酶,其中PA亚基通过内切酶活性为流感病毒的转录过程提供引物,成为潜在抗流感药物靶点。该文对PA亚基的结构、功能及内切酶抑制剂类抗流感药物研究进展进行概述,为PA亚基的深入研究及针对此靶点的抗流感药物发现提供信息指导。
  • 【专利】 控制昆虫害虫的RNA聚合酶II33核酸分子

    摘要:本公开涉及核酸分子和使用所述核酸分子控制昆虫害虫的方法,所述方法通过对包括鞘翅目害虫和/或半翅目害虫的昆虫害虫中的靶标编码序列和转录的非编码序列进行RNA干扰介导的抑制来实施。本公开还涉及用于制造表达可用于控制昆虫害虫的核酸分子的转基因植物的方法,以及由此获得的植物细胞和植物。
  • 【专利】 控制昆虫害虫的RNA聚合酶II215核酸分子

    摘要:本公开涉及核酸分子和使用所述核酸分子控制昆虫害虫的方法,所述方法通过对包括鞘翅目害虫和/或半翅目害虫的昆虫害虫中的靶标编码序列和转录的非编码序列进行RNA干扰介导的抑制来实施。本公开还涉及用于制造表达可用于控制昆虫害虫的核酸分子的转基因植物的方法,以及由此获得的植物细胞和植物。
  • 【期刊】 水稻条纹病毒RNA聚合酶在昆虫细胞中的表达

    刊名:生物技术 作者:赵淑玲 ; 刘璐璐 ; 薛亚男 ; 郝佳慧 关键词:水稻条纹病毒 ; RdRp ; 杆状病毒表达系统 ; 表达 ; 纯化 机构:扬州大学生物科学与技术学院 ; 扬州大学生物科学与技术学院 年份:2014
    摘要:[目的]利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)RNA聚合酶(RdRp)基因。[方法]RT-PCR扩增RdRp基因功能区片段,克隆于转移载体p Fast Bac HTb上,转化到大肠杆菌DH10Bac中,得到重组杆状病毒表达载体Bacmid-rp。提取Bacmid-rp DNA,转染Sf9细胞获得重组病毒v Ac-rp。将重组病毒v Ac-rp感染Sf9细胞使目的蛋白在细胞内表达,并利用亲和层析纯化,SDS-PAGE检测RdRp的表达情况。将纯化的RdRp蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot分析RdRp的免疫原性。[结果]RSV RdRp基因功能区能够在Sf9细胞中表达,蛋白分子量约为45k Da,与预测大小一致,且可与RdRp抗血清发生特异性反应。[结论]在真核细胞中成功表达了RSV RdRp,并得到了纯化的RdRp和其多克隆抗体。
  • 【期刊】 稳定表达T7 RNA聚合酶的BHK-21细胞系的建立

    刊名:中国兽医科学 作者:关洪鑫 ; 李志勇 ; 高鹏 ; 许生智 ; 白银梅 ; 柳纪省 关键词:T7 RNA聚合酶 ; 细胞系 ; 慢病毒表达系统 机构:中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室 ; 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室 ; 甘肃农业大学生命科学技术学院 年份:2013
    摘要:为了建立能稳定表达T7RNA聚合酶的BHK-21细胞系,利用PCR方法从BL21(DE3)细菌中扩增T7RNA聚合酶基因,并克隆到慢病毒表达系统的pLVX-Puro转移载体上,然后与Lenti-X HTX包装载体共转染Lenti-X 293T细胞系,收获高效价的慢病毒。将慢病毒感染BHK-21细胞,用嘌呤霉素多次筛选后获得抗性细胞。用构建的pET-28a-IRES-EGFP检测质粒转染得到的抗性细胞,有荧光表达的细胞即可以稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系。结果表明:构建的BHK-T7株细胞能稳定表达T7RNA聚合酶
  • 【期刊】 真核生物RNA聚合酶的结构和功能概述

    刊名:生物学教学 作者:严意华 ; 林颖韬 ; 胡雪峰 关键词:RNA聚合酶Ⅰ ; RNA聚合酶Ⅱ ; RNA聚合酶Ⅲ ; 转录 机构:福建师范大学生命科学学院 ; 福建师范大学生命科学学院 ; 福建教育学院 年份:2018
    摘要:真核生物中存在三种RNA聚合酶,它们对基因的表达起着十分重要的作用。本文概述三种RNA聚合酶的结构和功能。
  • 【期刊】 酵母RNA聚合酶Ⅲ负调控因子Maf1的研究进展

    刊名:中国细胞生物学学报 作者:闫洪波 ; 蒋伶活 关键词:酿酒酵母 ; RNA聚合酶Ⅲ ; Maf1 ; 转移核糖核酸 机构:天津大学药物科学与技术学院 ; 天津大学药物科学与技术学院 ; 江南大学生物工程学院 ; 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 年份:2013
    摘要:在生长受限条件下,由RNA聚合酶Ⅲ控制的tRNA合成是受抑制的,这种抑制是通过RNA聚合酶Ⅲ转录活性的负调节因子Maf1介导的。Maf1最先是从酿酒酵母中通过遗传学方法发现的,在酵母到人体的真核细胞中保守存在。Maf1的磷酸化状态决定它的亚细胞定位以及与RNA聚合酶Ⅲ复合体的相互作用。目前,多个Maf1蛋白激酶也已被证实参与了RNA聚合酶Ⅲ的活性调控。此外,Maf1还可间接影响tRNA的成熟与降解。该文主要就酵母中Maf1对于RNA聚合酶Ⅲ的活性调控机理及其在tRNA生物合成中的作用进行了概述。同时,探讨了目前Maf1研究中存在的问题及其未来的研究方向。
  • 【期刊】 原核生物RNA聚合酶辅助因子σ因子的研究进展

    刊名:中国农业科技导报 作者:徐江涛 ; 刘晓青 ; 田健 ; 伍宁丰 关键词:原核模式生物 ; RNA聚合酶 ; 可替换型σ因子 机构:中国农业科学院生物技术研究所 ; 中国农业科学院生物技术研究所 年份:2017
    摘要:在原核生物中,σ因子是RNA聚合酶的辅助因子,被用来识别启动子中的功能序列,在基因的转录调控中发挥着重要的功能。目前原核模式生物中的可替换型σ因子大部分已被发现,其中大肠杆菌有4种,枯草芽胞杆菌有18种。从σ因子的分类、应答机制、识别元件、结构特征等方面进行了归纳。将为系统的理解原核生物σ因子的功能,及其在基因表达调控中的贡献等方面提供帮助。
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