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  • 【论文】 EZH2调控人头颈部鳞癌生长的实验研究

    作者:孔令平 关键词:EZH2 ; DZNEP ; MICU1 ; 细胞凋亡 ; 肿瘤生长 ; 人头颈部鳞状细胞癌 机构:天津医科大学 ; 天津医科大学 年份:2016
    摘要:近年来,头颈部鳞癌的患病率逐渐增加。且头颈部鳞癌患者的病情进展较快,治疗效果及预后均不理想。尽管对于头颈部鳞癌的诊断与治疗方面已经有了明显的发展与突破,但是每年死于头颈部鳞癌的患者仍很多。因此研究头颈部鳞癌细胞的生长,寻找头颈部鳞状细胞癌新的有效治疗靶点是当前改善头颈部鳞癌患者治疗效果的重要突破口。Zest同源增强子(EZH2)是组成多梳蛋白PRC2复合物的核心亚基,它可以催化组蛋白H3K27三甲基化介导其下游靶基因转录沉默,其中肿瘤的发生与发展过程中尤为重要。EZH2如何调控肿瘤细胞凋亡的报道并不多,对于EZH2影响头颈部鳞状细胞癌细胞凋亡和肿瘤生长的报道更属空白。线粒体钙离子摄入蛋白1(MICU1)是线粒体依赖性死亡途径的负调控因子。本文采用通过采用EZH2的小分子抑制剂DZNEP抑制头颈部鳞癌细胞表达及功能作用,另外还选取MICU1的表达及干扰质粒改变HNSCC细胞中MICU1的表达水平,对EZH2调控细胞凋亡以及肿瘤生长的作用效果和机制进行了以下体内外实验研究。研究共分为三部分:第一部分:对天津医科大学肿瘤医院的97例不同级别与分期的HNSCC组织标本提取蛋白,运用免疫组化染色法检测组织标本切片中EZH2的定位及表达情况。结合癌症基因组图谱(TCGA)的生存分析研究HNSCC中EZH2表达水平与HNSCC不良预后的相关性。采用Western blot方法检测5个HNSCC细胞系EZH2及MICU1蛋白的表达情况。第二部分:MTT法测定DZNEP对两舌癌细胞的半数致死量(IC50)及对细胞活性的抑制能力;平板克隆实验检测DZNEP对单个细胞的克隆形成能力的影响;Western blot检测细胞株DZNEP处理后相关蛋白的表达变化。流式细胞术检测细胞凋亡比率以及细胞周期的分布情况;β-半乳糖苷酶染色法检测抑制EZH2的表达后HNSCC细胞的衰老数目变化;JC-1荧光探针检测HNSCC细胞中EZH2受到抑制后线粒体膜电位的丧失情况;钙离子荧光探针检测HNSCC细胞中EZH2受到抑制后细胞浆内钙离子的浓度变化;Western blot分别检测细胞凋亡、周期相关蛋白及MICU1的表达变化。以上实验研究抑制EZH2的表达水平后,HNSCC细胞体外生长受到抑制的效果。为进一步探究EZH2/MICU1调控线粒体死亡通路影响肿瘤生长的机制。选用MICU1 Sh RNA敲低两个HNSCC细胞系中的MICU1水平;流式细胞术检测细胞凋亡的比例;钙离子荧光探针检测HNSCC细胞中MICU1受到抑制后细胞浆内钙离子的浓度变化,JC-1荧光探针检测HNSCC细胞中MICU1受到抑制后线粒体膜电位的丧失情况,Western blot分别检测凋亡相关蛋白及MICU1的表达变化。同时选用MICU1过表达质粒(GV230-MICU1)升高Hep-2的MICU1的水平,检测其凋亡变化。第三部分:建立HNSCC Cal27裸鼠皮下荷瘤动物模型,瘤内注射DZNEP,密切观察肿瘤生长情况,免疫组化检测HNSCC生长相关蛋白的变化情况,检测肿瘤组织凋亡比率,进一步验证体外的实验结果。结果:97例标本的免疫组化结果显示,在HNSCC中EZH2处于高表达状态,并且级别越高EZH2的表达水平越高,并且其预后较差。实验结果显示在5种细胞系中Cal27和SCC25中EZH2和MICU1的表达均相对较高。Cal27、SCC25细胞DZNEP的IC50分别为6和3μmol/L。体外实验结果表明,DZNEP处理后,能够明显抑制细胞的活性,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡及衰老;EZH2表达水平的改变破坏了细胞线粒体膜电位的稳定性;钙离子探针检测细胞内Ca2+浓度明显增加;Western blot结果表明示MICU1的表达明显受到DZNEP的抑制。敲低MICU1的表达水平后,细胞早期凋亡比率增高;细胞内Ca2+浓度显著升高;线粒体膜电位水平丧失;凋亡相关蛋白的变化与抑制EZH2表达后变化一致。体内实验观察结束时,DZNEP处理组裸鼠荷瘤体积明显小于其各自的无义对照组,肿瘤质量明显低于对照组。免疫组织化学染色结果示,DZNEP组中BAX、Cleaved Caspase-3表达水平增加,抗凋亡蛋白的表达水平受到抑制;TUNEL结果显示,DZNEP能够诱导体内肿瘤细胞凋亡凋亡。体内外实验结果一致。结论:1.EZH2在头颈部鳞癌标本中高表达提示患者预后不良。2.DZNEP可以通过抑制EZH2的功能作用,进而抑制MICU1的表达水平,参与调控头颈部鳞癌细胞线粒体途径凋亡。3.DZNEP可以抑制人HNSCC细胞Cal27裸鼠荷瘤模型的生长;EZH2的抑制剂将可能成为HNSCC新的治疗靶点。
  • 【论文】 辐射诱导DNA损伤修复中EZH2与ATM调控作用的研究

    作者:江阔 关键词:EZH2 ; 电离辐射 ; DNA损伤 ; ATM/Chk2/p53 ; H3K27me3 机构:吉林大学 ; 吉林大学 年份:2018
    摘要:背景:电离辐射(ionizing radiation,IR)引起的DNA损伤是辐射损伤效应的重要内容之一,也是放射生物学研究的主要内容之一。在辐射引起的DNA损伤修复过程中ATM/Chk2/p53通路起重要作用。DNA损伤后ATM立刻被激活,活化Chk2,从而磷酸化p53或直接通过p53传递损伤信号,开启DNA损伤修复进程。随着辐射研究的不断深入,表观遗传学的逐渐兴起,人们发现组蛋白修饰在DNA损伤修复中起重要作用。Valérie Borde等研究发现在IR照射后,SPR-5迅速聚集到DNA双链断裂(DNA doubled-strand breaks,DSBs)区移除H3K4me2,从而招募双链断裂修复(doubled-strand break repair,DSBR)蛋白对DNA损伤进行修复。Sheema Fnu等发现H3K36me2在辐射诱导的DSB中可以通过增强非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)介导的DSB损伤修复。H3K9me3在IR诱导的小鼠胚胎成纤维细胞中会与Tip60在DNA损伤区域相互作用,促使ATM激活,进而触发下游DNA损伤应答(DNAdamage response,DDR)对DSB进行修复。目前H3K27me3在DNA损伤修复中研究较少,Zhiqing Li等人对家蚕在紫外线UV诱导的DNA损伤中发现PRC2介导的H3K27me3增加,并且发现具有PcGs基因缺失的蚕细胞显示出对UV-C辐射的高度敏感性。同时,Shu-Bin Gao等人研究显示通过EZH2甲基转移酶抑制剂GSK126抑制HepG2细胞的H3K27me3后会促进化疗药物MMC诱导的DNA损伤。以上研究证实了组蛋白甲基化在DNA损伤修复中的重要作用。目的:通过建立干扰EZH2和过表达HepG2细胞模型,证实H3K27me3在辐射诱导DNA损伤中的作用,探讨PcGs家族成员EZH2介导的H3K27me3对ATM/Chk2/p53调控机制。方法:1.通过流式细胞术检测不同处理组HepG2细胞的细胞周期变化。2.通过免疫荧光方法检测不同处理组HepG2细胞γH2AX及H3K27me3的表达。3.通过Real-time PCR方法检测各处理条件下HepG2细胞EZH2、BMI1及ATM、Chk2和p53基因表达水平变化,再通过Western blot方法检测EZH2、H3K27me3、ATM和p53蛋白表达水平变化。4.采用瞬时转染方法建立干扰EZH2EZH2过表达HepG2细胞模型,观察EZH2与ATM/Chk2/p53通路的调控关系。5.采用免疫共沉淀技术,检测不同处理组HepG2细胞ATM启动子区域H3K27me3的修饰变化。结果:1.电离辐射对HepG2细胞周期、DNA损伤及目的基因转录及蛋白表达水平的影响HepG2细胞进行不同剂量辐射后12h及24h细胞发生G2期阻滞,且呈剂量依赖性升高;各照射组相与假照组比较,γH2AX和H3K27me3焦点数明显增多,DNA损伤及H3K27me3表达呈剂量依赖性升高;辐射组中PcGs家族成员EZH2及BMI-1 mRNA表达水平显著高于对照组,EZH2和H3K27me3蛋白表达水平明显高于对照组;照射后ATM、Chk2及p53基因mRNA表达水平显著高于对照组,同时ATM、p53蛋白表达水平亦明显高于对照组。2.抑制EZH2酶活性后辐射对细胞周期、DNA损伤及目的基因转录及蛋白表达水平的影响对HepG2细胞进行不同剂量的照射后,加入3μmol/L GSK126抑制EZH2酶活性,HepG2细胞发生G2/M期阻滞,呈剂量依赖性升高,而且IR+GSK126组与IR组相比,G2/M期阻滞显著降低;免疫荧光结果显示IR+GSK126组与IR组相比H3K27me3焦点数明显减少,而γH2AX焦点数明显增多;基因表达结果显示IR+GSK126组与IR组相比EZH2 mRNA表达水平显著升高,但H3K27me3蛋白表达水平却显著降低;辐照后6h IR+GSK126组与IR组相比ATM和p53 mRNA表达水平显著升高,Chk2 mRNA表达水平变化不明显;但辐照后12h在8Gy剂量条件下IR+GSK126组与IR组相比ATM、Chk2及p53mRNA表达水平显著降低。3.EZH2干扰和过表达中辐射对ATM、Chk2及p53基因表达的影响免疫荧光结果显示,干扰EZH2后不同照射剂量组中γH2AX的焦点数明显增多,而H3K27me3的焦点数明显减少;基因表达水平结果显示EZH2干扰照射组与单纯照射组比EZH2 mRNA表达水平显著下降,同时H3K27me3蛋白表达水平也下降;EZH2过表达照射组与单纯照射组比,EZH2 mRNA和H3K27me3蛋白表达水平都显著升高;照射后6h EZH2干扰组与单纯照射组比ATM、Chk2、p53 mRNA表达水平显著升高;照射后12h EZH2干扰组与单纯照射组比ATM、p53蛋白表达水平明显升高;EZH2过表达后ATM、Chk2及p53基因在转录及蛋白水平上变化不明显。4.GSK126处理组和EZH2干扰组中ATM启动子区域H3K27me3的修饰变化我们在ATM启动子上游-1630~-774区域及下游719~3475区分别选取3个H3K27me3的结合位点,采用ChIP实验检测H3K27me3的表达变化,发现siEZH2组和GSK126组,ATM启动子区H3K27me3的表达水平显著降低。且在PP4位点上H3K27me3的表达变化最为明显。结论:1.在电离辐射诱导的HepG2细胞DNA损伤反应中ATM/Chk2/P53通路被激活。2.EZH2甲基转移酶抑制剂GSK126通过降低H3K27me3表达水平促进电离辐射诱导的DNA损伤。3.PcGs家族中关键基因EZH2通过介导ATM启动子区域的H3K27me3参与到DNA损伤修复中。
  • 【期刊】 下调EZH2基因对胃癌细胞株SGC7901增殖作用的影响

    刊名:癌症进展 作者:万倩 ; 邓野 ; 李弦 ; 王丹 ; 杨继元 关键词:zeste基因增强子同源物2 ; 干扰RNA ; 胃癌 ; 细胞增殖 机构:长江大学附属第一医院肿瘤科 ; 长江大学附属第一医院肿瘤科 ; 荆州市第一人民医院中心实验室 年份:2018
    摘要:目的探讨下调EZH2基因对胃癌细胞株SGC7901的增殖作用,研究EZH2基因在胃癌发生发展中的作用。方法针对EZH2基因序列设计合成小干扰RNA片段(si RNA)及无效序列片段,将EZH2 si RNA转染至胃癌细胞株SGC7901中作为干扰组,以转染无效序列片段作为阴性对照组,以未作任何处理组作为空白对照组,采用荧光定量PCR(q RT-PCR)检测EZH2基因下调后EZH2 m RNA的表达,采用Western blot法检测EZH2蛋白表达量,采用CCK-8法检测细胞增殖的活性。结果成功转染EZH2 si RNA至胃癌SGC7901细胞,干扰组的EZH2m RNA和蛋白相对表达量较阴性对照组及空白对照组下降,且干扰组细胞增殖受到抑制。结论下调EZH2基因的表达,使胃癌细胞增殖受到抑制,说明EZH2基因在胃癌细胞的增殖发展进程中有很重要的意义,为深入研究胃癌基因治疗提供一定的理论依据。
  • 【期刊】 沉默EZH2基因抑制胃癌细胞增殖及促凋亡研究

    刊名:国际检验医学杂志 作者:杨必伟 ; 赵二川 ; 石祥 ; 刘强 关键词:EZH2 ; 胃肿瘤 ; 细胞增殖 ; 细胞凋亡 机构:贵州省人民医院检验科 ; 贵州省人民医院检验科 ; 运城市第一医院检验科 ; 潜江市中心医院病理科 年份:2019
    摘要:目的探讨沉默胃癌细胞株MGC803中EZH2基因对细胞增殖及凋亡的影响。方法采用小干扰RNA(siRNA)沉默胃癌细胞中的EZH2基因并用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白质印迹(Western blot)验证沉默效率,MTT法评估细胞增殖情况,运用Western blot分析凋亡相关蛋白——Bcl-2及Bax,流式细胞仪检测细胞的凋亡变化。结果胃癌细胞中的EZH2基因被成功沉默;沉默组细胞的增殖情况相较于正常组和阴性对照组明显降低,而凋亡率相较于正常组和阴性对照组则明显升高,同时,沉默组中的Bcl-2蛋白表达量降低而Bax蛋白表达则显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论沉默胃癌细胞中的EZH2基因能抑制该肿瘤细胞的增殖并促进其凋亡。
  • 【期刊】 抑制EZH2表达对宫颈癌细胞凋亡的影响及机制

    刊名:山东医药 作者:段继惠 ; 杨磊 ; 穆红 ; 唐志琴 关键词:人类Zest同源增强子 ; 宫颈癌 ; 细胞凋亡 ; EZH2抑制剂 ; B淋巴细胞瘤-X基因长片段 ; 促凋亡蛋白Bcl-2家族细胞凋亡相互作用因子 ; 半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3 机构:天津市第一中心医院 ; 天津市第一中心医院 年份:2019
    摘要:目的观察抑制人类Zest同源增强子(EZH2)表达对宫颈癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法选择人宫颈癌细胞系Siha和C33A细胞,采用MTT法确定EZH2抑制剂3-去氮腺嘌呤(DZNep)在两种细胞中的半数抑制浓度(IC_(50))。将两种细胞分为DMSO组、1/2 IC_(50)组和IC_(50)组,分别以DZNep终浓度0、3、6μmol/L处理Siha细胞各组,以0、2、4μmol/L处理C33A细胞各组。培养48 h后收集各组细胞,采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,采用Western blotting法检测EZH2蛋白、抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-X基因长片段(Bcl-xL)、促凋亡蛋白Bcl-2家族细胞凋亡相互作用因子(Bim)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果在Siha、C33A细胞中,1/2 IC_(50)组、IC_(50)组早期凋亡率均高于DMSO组,IC_(50)组早期凋亡率均高于1/2 IC_(50)组(P均<0. 05)。IC_(50)组EZH2蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05); IC_(50)组Bcl-xL蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组,Bim和Caspase-3蛋白表达均高于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05)。结论利用DZNep抑制宫颈癌细胞EZH2的表达后,能够诱导宫颈癌细胞早期凋亡,其机制可能与下调Bcl-xL蛋白表达并上调Bim和Caspase-3蛋白表达有关。
  • 【论文】 鼠尾草酚通过激活SIRT1/EZH2信号通路减轻肝脏纤维化

    作者:赵环宇 关键词:EZH2 ; 鼠尾草酚 ; 肝纤维化 ; SIRT1 机构:大连医科大学 ; 大连医科大学 年份:2018
    摘要:背景:肝纤维化(liver fibrosis)是多种慢性肝损害所致的可逆性病理改变,是肝硬化发展的必经阶段。其主要表现为肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)激活所致的肝细胞外间质成分过度异常沉积,影响肝脏的功能。目前肝纤维化在诊治方面虽然有一些进展,但仍缺乏确定有效的药物,且相关分子机制尚不完全明确。有研究表明Enhancer of Zeste Homolog 2(EZH2)在促进肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)分化中发挥重要作用,但其具体机制仍不完全清楚。鼠尾草酚(carnosol,CS)是迷迭香中提取的一种脂溶性有效成分,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性,但其对肝纤维化的治疗作用国内外未见报道。目的:探究CS对肝纤维化的保护作用,以及Sirtuin 1(SIRT1)/EZH2在抗肝纤维化中的分子机制。方法:1.CS在大鼠肝纤维化中保护作用的研究60只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为五组:(A)空白对照组;(B)CS空白给药组(30mg/kg);(C)CCl4腹腔注射组;(D)CCl4+CS低剂量(15mg/kg)给药组;(E)CCl4+CS高剂量(30mg/kg)给药组。C、D、E组通过腹腔注射CCl4(0.5 mg/kg,按1:10比例稀释于橄榄油中,2次/周,4周)模拟肝纤维化模型,A、B组给予等量溶媒橄榄油腹腔注射;同时,B、D、E组每天通过灌胃方式给予不同浓度CS油溶液,A、C组给予等量溶媒橄榄油。四周后腹主动脉取血,分离肝脏组织标本。检测大鼠血清中谷丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、谷草氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase,AST)活性。采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)和Masson染色法检查肝脏病理改变及胶原累积分布情况;通过Western Blot法检测肝组织SIRT1、EZH2、Collagen I、α-SMA、E-Cadherin、Vimentin等蛋白水平;real-time PCR法检测肝组织PPARγ、TIMP1、CTGF、Collagen I、α-SMA等的m RNA水平。2.CS对转化生长因子(transforming growth factorβ1,TGFβ1)诱导肝细胞损伤的保护作用及相关机制研究(1)AML-12、LX-2细胞分成四组:空白对照组;CS(10μM)组;TGFβ1(4ng/ml)组;CS(10μM)+TGFβ1(4ng/ml)组。CS预给药6h,TGFβ1诱导12h后提取细胞全蛋白。Western Blot法检测细胞内Collagen I、α-SMA表达情况。(2)AML-12、LX-2细胞分成五组:空白对照组;TGFβ1(4ng/ml)组;高、中、低剂量CS(2.5μM、5μM、10μM)+TGFβ1(4ng/ml)组。CS预处理6h,使用TGFβ1诱导12h后提取细胞全蛋白。Western Blot法检测细胞内Collagen I、α-SMA蛋白表达水平。(3)大鼠原代HSC、AML-12细胞分成四组:阴性对照(si-control)组;si-control+TGFβ1(4ng/ml)组;EZH2干扰(si-EZH2)组;si-EZH2+TGFβ1(4ng/ml)组。control si RNA/EZH2 si RNA转染48h,TGFβ1诱导12h后,提取细胞RNA或全蛋白。采用real-time PCR法检测EZH2、PPARγ、TIMP1、CTGF、Collagen I、α-SMA的m RNA表达情况;Western Blot法检测Collagen I、α-SMA、E-Cadherin、Vimentin蛋白表达水平;免疫荧光法观察细胞中E-Cadherin、Vimentin的分布和表达情况。(4)大鼠原代HSC、AML-12细胞分成五组:阴性对照(si-control)组;si-control+TGFβ1(4ng/ml)组;si-control+TGFβ1(4ng/ml)+CS(10μM)组;SIRT1干扰(si-SIRT1)+TGFβ1(4ng/ml)组;si-SIRT1+TGFβ1(4ng/ml)+CS(10μM)组。control si RNA/SIRT1 si RNA转染48h,CS作用6h,TGFβ1诱导12h后,提取细胞全蛋白或RNA。采用Western Blot法检测细胞内SIRT1、EZH2、Collagen I、α-SMA、E-Cadherin及Vimentin蛋白表达情况;real-time PCR技术检测PPARγ、TIMP1、CTGF、Collagen I、α-SMA的m RNA表达水平;免疫荧光方法观察细胞中E-Cadherin、Vimentin的分布和表达情况。(5)AML-12细胞分成四组:阴性对照(si-control)组;si-control+CS(10μM)组;SIRT1干扰(si-SIRT1)组;si-SIRT1+CS(10μM)组。control si RNA/SIRT1 si RNA转染48h,CS作用6h后Western Blot法检测细胞内SIRT1及EZH2的蛋白表达情况,免疫沉淀法检测EZH2蛋白的乙酰化水平。(6)AML-12细胞分成五组:阴性对照组(si-control);si-control+TGFβ1(4ng/ml)组;si-control+TGFβ1(4ng/ml)+白藜芦醇(resveratrol,Res,10μM)组;si-control+TGFβ1(4ng/ml)+CS(10μM)组;si-SIRT1+TGFβ1(4ng/ml)。control si RNA/SIRT1 si RNA转染48h后,CS/Res作用6h,TGFβ1诱导12h,提取细胞全蛋白或RNA。Western Blotting法检测细胞内SIRT1及EZH2蛋白表达情况;免疫沉淀法检测EZH2蛋白的乙酰化水平。(7)大鼠原代HSC、AML-12细胞分成四组:阴性对照(pc DNA3.1)组;pc DNA3.1+TGFβ1(4ng/ml)组;pc DNA3.1+TGFβ1(4ng/ml)+Res(10μM)组;EZH2过表达(pc DNA-EZH2)+TGFβ1(4ng/ml)+Res(10μM)组;转染pc DNA3.1/pc DNA-EZH2 48h后,Res作用6h,TGFβ1诱导12h。提取细胞RNA或全蛋白,采用real-time PCR技术检测TIMP1、CTGF、Collagen I、α-SMA的m RNA表达水平;Western Blot法检测细胞内E-Cadherin及Vimentin蛋白表达情况。结果:CCl4诱导的肝纤维化引起大鼠血清中ALT、AST上升,正常肝小叶结构丧失、炎症渗出、肝细胞排列紊乱、大量胶原纤维增生;CS治疗后能明显改善上述情况。CS上调肝组织中SIRT1,下调EZH2,抑制HSC激活及上皮间质转化(EMT)。机制上,CS对肝纤维化的保护作用与SIRT1的激活相关:上调SIRT1能通过抑制EZH2的乙酰化表达,影响其稳定性,从而减弱HSC激活及EMT,缓解肝纤维化。以上结果表明CS可通过激活SIRT1/EZH2信号通路减轻肝纤维化。结论:SIRT1/EZH2信号通路在肝纤维化中发挥重要作用;CS通过激活SIRT1降低EZH2的乙酰化水平,影响EZH2稳定性,从而抑制HSC激活及EMT,减轻肝纤维化。
  • 【期刊】 肿瘤相关巨噬细胞对肝癌EZH2表达的影响

    刊名:解剖学研究 作者:陈娟 ; 成炜 ; 刘珊珊 ; 黄丽 ; 刘玉荣 ; 马宁芳 关键词:EZH2 ; 肝癌 ; 巨噬细胞 ; 免疫微环境 机构:广州医科大学基础学院组织学与胚胎学教研室 ; 广州医科大学基础学院组织学与胚胎学教研室 年份:2016
    摘要:目的研究肝癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞对转录因子EZH2表达的影响及意义。方法用佛波豆寇乙酸(PMA)诱导人单核细胞系THP-1细胞分化为M2型巨噬细胞;用M2型巨噬细胞与肝癌BEL-7402 or QGY-7703细胞共培养方法模拟肝癌免疫微环境,未共培养的肝癌BEL-7402或QGY-7703细胞为空白对照,q RT-PCR和Western blot分别从m RNA和蛋白质水平检测两组肝癌细胞EZH2的表达水平;免疫组织化学检测肿瘤相关巨噬细胞标记分子CD163与EZH2的表达并进行相关性分析。结果 q RT-PCR及细胞形态学显示巨噬细胞诱导成功;巨噬细胞与肝癌细胞QGY-7703、BEL-7402共培养后,EZH2的表达明显下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);肝癌组织芯片免疫组织化学显示肝癌癌巢组织中CD163+巨噬细胞数量明显少于癌旁组织(P<0.05),癌巢组织中巨噬细胞CD163表达分值与肝癌细胞EZH2表达分值呈负相关(r=-0.32,P=0.018)。结论巨噬细胞与肝癌细胞共培养可下调肝癌细胞EZH2的表达;肝癌癌巢组织中巨噬细胞CD163表达分值与肝癌细胞EZH2表达分值呈负相关。
  • 【期刊】 EZH2介导ROS1表达上调促进肺癌细胞上皮-间质转化

    刊名:热带医学杂志 作者:韩向前 ; 傅珉倚 ; 刘欣 ; 朱豪帅 ; 邹健勇 ; 苏春华 ; 罗红鹤 关键词:EZH2 ; 肺癌 ; ROS1 ; 上皮-间质转化 机构:中山大学附属第一医院胸外科 ; 中山大学附属第一医院胸外科 ; 珠海市金湾中心医院胸外科 ; 中山大学附属第一医院手术麻醉中心 年份:2018
    摘要:目的研究Zeste基因增强子同源物2(EZH2)对肺癌细胞中沉默抑制子1(ROS1)表达及细胞上皮-间质转化的影响。方法 Western blot检测肺癌细胞中EZH2表达;过表达EZH2后,RT-PCR和Western blot检测肺癌细胞HCC461中EZH2表达水平;Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力变化;Western blot检测过表达EZH2对ROS1、E-cadherin、Snail、vimentin表达影响;Western blot检测53例肺癌组织和42例癌旁组织中EZH2与ROS1表达水平并分析其相关性。结果肺癌细胞中EZH2均高表达;肺癌细胞HCC461过表达EZH2后ROS1表达上调,上皮标记物E-cadherin下调,间质标记物Snail、vimentin表达上调,细胞侵袭转移能力增加;肺癌组织中EZH2、ROS1均显著高表达,且两者表达呈显著正相关。结论 EZH2可介导肺癌细胞中ROS1表达上调来促进肺癌细胞上皮-间质转化。
  • 【期刊】 利用CRISPR/Cas9慢病毒系统构建肺部EZH2基因敲除小鼠

    刊名:中国肺癌杂志 作者:孟凡荣 ; 赵丹 ; 周清华 ; 刘喆 关键词:EZH2 ; CRISPR/Cas9系统 ; sgRNA ; 基因敲除 机构:天津医科大学总医院 ; 天津医科大学总医院 ; 天津市肺癌研究所 ; 天津市肺癌转移与肿瘤微环境实验室 ; 天津医科大学 年份:2018
    摘要:背景与目的已有的研究证明CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated 9)系统是一种能够在哺乳动物细胞中高效操作的新型基因编辑技术,应用人工设计的向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)介导外源表达的Cas9蛋白与靶点DNA特异性结合以实现对基因组DNA的切割,被切割后的基因组DNA通过非同源重组或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、或者外源基因的敲入等目标。本研究的目的是应用CRISPR/Cas9技术构建小鼠肺部EZH2基因敲除的动物模型。方法针对EZH2基因的编码区,设计两个靶向EZH2基因Exon3和Exon4的sgRNA,通过慢病毒包装、感染细胞、SURVEYOR assay等一系列体外实验,验证所设计的sgRNA的有效性。应用支气管插管的方式把慢病毒灌注到小鼠肺部,利用免疫组化方法和qRT-PCR进行检测。结果 NIH-3T3细胞的体外实验结果验证了实验所设计的sgEZH2能够有效地在体外细胞系中介导Cas9切割靶DNA;小鼠支气管插管实验及肺部组织免疫组化和qRT-PCR方法检测EZH2基因敲除的效率,发现实验组小鼠肺部组织EZH2表达明显降低。结论本研究成功设计了两条能够敲除EZH2功能的sgRNA,并应用CRISPR/Cas9技术成功建立了肺部EZH2基因敲除的小鼠模型,为研究EZH2的功能和作用机制提供了有效的动物模型。
  • 【期刊】 Ezh2与G9a在Msx1抑制成肌细胞分化过程中的协同作用

    刊名:基因组学与应用生物学 作者:李慧霞 ; 朱晓莉 ; 王敬强 关键词:Ezh2 ; Msx1 ; G9a ; 细胞分化 ; 协同作用 机构:复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室 ; 复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室 年份:2017
    摘要:组蛋白H3第27位赖氨酸的三甲基化(H3K27me3)和第9位赖氨酸的二甲基化(H3K9me2)参与很多重要的生物学过程,如与基因转录调控和细胞分化密切相关。H3K27me3和H3K9me2分别由赖氨酸甲基转移酶(KMTs)Ezh2和G9a催化形成。在基因转录调控和细胞分化调控过程中Ezh2和G9a之间是否存在协同,目前还不清楚。我们的前期研究表明,在成肌细胞中,同源异型框蛋白(homeoprotein)Msx1可分别招募Ezh2和G9a到其抑制靶标基因,通过影响其靶标基因的H3K27me3和H3K9me2的状态来抑制靶基因的表达,从而抑制肌肉细胞的分化。为了进一步探究Ezh2和G9a在Msx1介导的抑制成肌细胞分化过程中是否具有协同作用,我们对比了同时敲低Ezh2和G9a与分别敲低Ezh2或G9a对Msx1抑制成肌细胞分化、结合并抑制靶标基因能力的影响,研究显示双敲的影响更大。我们的研究表明,在Msx1抑制成肌细胞分化的过程中,Ezh2和G9a具有协同作用。另外,我们的研究为基因转录调控和细胞分化提供了新的分子机制。
  • 【期刊】 EZH2表达与食管鳞癌同步放化疗的近期疗效关系

    刊名:吉林医学 作者:范俊利 ; 张卫国 ; 陈建民 ; 雷彩鹏 关键词:EZH2 ; 食管鳞癌 ; 同步放化疗 ; 免疫组化 ; 近期疗效 机构:河南科技大学第一附属医院肿瘤外科 ; 河南科技大学第一附属医院肿瘤外科 年份:2016
    摘要:目的:研究食管鳞癌和癌旁正常组织EZH2的表达情况及同步放化疗的近期疗效的相关性。方法:选取经确诊为食管鳞癌的癌和癌旁正常组织标本30例,用免疫组化法检测EZH2的表达情况,前瞻性分析癌和癌旁正常组织中EZH2表达与同步放化疗的近期疗效关系。结果:EZH2在食管鳞癌组织中的阳性表达高于癌旁正常组织(P<0.05);EZH2低表达的食管鳞癌患者对同步放化疗近期疗效的有效性高于高表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EZH2的高低表达情况可能作为食管鳞癌同步放化疗疗效的一个有效预测参考指标。
  • 【期刊】 宫颈癌2种新辅助化疗方案血清EZH2和HGF的表达水平

    刊名:新疆医科大学学报 作者:李霞 ; 周琦 关键词:EZH2 ; 宫颈癌 ; 新辅助化疗 ; 血清生化标志物 ; HGF 机构:新疆医科大学附属肿瘤医院妇外四科 ; 新疆医科大学附属肿瘤医院妇外四科 年份:2017
    摘要:目的探讨宫颈癌2种新辅助化疗方案血清EZH2、HGF的表达水平及其疗效。方法收集2015年1月-2016年2月在新疆医科大学附属肿瘤医院确诊为宫颈癌的患者54例,按照患者意愿选择接受宫颈癌术前新辅助化疗的方案,分为接受TP方案者(TP组)27例和接受PVB方案者(PVB组)27例。所有留置的血液标本由新疆医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所标本库存储、处理。使用人HGF ELISA、人EZH2ELISA检测化疗前、后血清EZH2和HGF的表达水平。结果 PVB组患者化疗后血清EZH2表达水平明显低于化疗前,PVB组化疗后血清EZH2表达水平明显低于TP组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌PVB新辅助化疗可能通过降低血清中EZH2的表达水平起效,促使病灶缩小,可作为观察宫颈癌新辅助化疗前后疗效评价的一个指标。
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