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  • 【期刊】 EV71不同临床株的新生小鼠毒力研究

    刊名:中国实验动物学报 作者:李怡沅 ; 陈恒 ; 苗瑞雪 ; 李伟然 ; 程悦 ; 万朝敏 ; 朱渝 关键词:EV71 ; 感染 ; 毒力 ; 小鼠 机构:四川大学华西第二医院儿科出生缺陷与相关幼儿疾病教育部重点实验室 ; 四川大学华西第二医院儿科出生缺陷与相关幼儿疾病教育部重点实验室 ; 成都市疾病预防控制中心 ; 四川大学公共卫生学院 年份:2018
    摘要:目的探索不同EV71毒株在新生鼠的毒力。方法临床轻症、重症和死亡来源的EV71毒株,接种1日龄BALB/c乳鼠,观察14 d小鼠的症状,于感染后1、3、5、7 d和9 d,取小鼠组织RT-QPCR测病毒载量,HE染色观察病变。结果重症株与轻症株症状严重程度差异无显著性(P=0.693),且两组均较死亡株组重(P=0.000,P=0.000);轻症、重症和死亡株组小鼠生存率分别为77.2%、81.7%和97.8%,差异有显著性(P=0.0010,P=0.001,P=0.0004);轻症株组肺出血最重,脑、肌肉、脾和肠病理定性差异无显著性;轻症株组各组织病毒量最高,死亡株组最低。结论临床轻症毒株在乳鼠症状最重,死亡株最轻,与人的临床结局不一致,可能与病毒基因、宿主等因素相关。
  • 【期刊】 手足口病疾病负担和EV71疫苗的研究进展

    刊名:《上海预防医学》 作者:姜铭波 ; 陆瑾 ; 牟文 ; 周文瑜 关键词:EV71 ; 疫苗接种 ; 托幼机构 ; 急性传染 ; 斑丘疹 ; 肠道病毒 ; 接触传播 ; 联合疫苗 ; 流行毒株 ; 免疫原性 机构:上海市黄浦区疾病预防控制中心 ; 上海市黄浦区疾病预防控制中心 年份:2016
    摘要:1手足口病发病率高手足口病主要是由肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组(CoxA)引起的急性传染病,在5岁以下儿童中常见,通过消化道、呼吸道和密切接触传播,易在集体机构如托幼机构或学校发生暴发流行。患儿大多症状轻微,主要表现为手、足、口腔等部位的斑丘疹、疱疹。
  • 【期刊】 肠道病毒EV71型手足口病的护理及预防进展

    刊名:当代护士(上旬刊) 作者:蒋梅玉 关键词:EV71 ; 手足口病 ; 护理 ; 肠道病毒 机构:广西壮族自治区贵港市人民医院儿内科 ; 广西壮族自治区贵港市人民医院儿内科 年份:2018
    摘要:综述了手足口病护理措施及预防方法,主要护理措施包括:发热护理,口腔护理,皮肤护理,饮食护理,患儿及家长的心理护理,并发症的观察和护理;预防措施包括:强化培训,规范门诊预检分诊工作流程,加强消毒隔离,健康教育等。认为只要严格科学地预防、加强专科知识学习、规范诊治程序、加强病情动态监护、积极防治并发症就可以达到有效预防和治疗手足口病的目的。
  • 【期刊】 EV71与CA16所致手足口病的病原学特征分析

    刊名:中国病原生物学杂志 作者:韩志娟 ; 徐俊昌 ; 孙荣兴 关键词:手足口病 ; 肠道病毒EV71 ; 柯萨奇病毒 ; 病原学特征 机构:襄阳市中心医院传染病分院 ; 襄阳市中心医院传染病分院 ; 湖北医药学院附属襄阳医院 年份:2016
    摘要:目的了解肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇病毒A组16型(CA16)所致手足口病的病原学分布特点,为临床合理用药提供参考依据。方法选取自2014年3月至2015年2月医院收治的共409例手足口病患儿作为研究对象,采集咽、肛拭子和粪便,进行EV71、CA16和其他肠道病毒的核酸检测与体外分离培养,同时收集该次病程观察期内其他相关临床资料,观察并分析结果。结果409例患儿中检出肠道病毒阳性248例,其中EV71病毒102例(24.94%),CA16病毒88例(21.52%),其他肠道病毒58例(14.18%)。在EV71和CA16致病病例中,以12~23月龄婴儿为主分别为53(51.96%)和42(47.73%)。不同月龄组发病数差异有统计学意义(χ2=6.177,P=0.046);发病时间主要集中在5~7月;重症病例10例(男性6例,女性4例),占病例总数的4.03%,皆由EV71(7例)和CA16(3例)引起;3个年龄段(6~、12~、24~36月龄)重症病例分别为2、7和1例。EV71、CA16与其他肠道病毒致病病例的病程M值分别为9d、9d和6d,组间差异有统计学意义(χ2=18.199,P<0.01),排毒周期的M值分别为11d,9d和6d,组间差异均有统计学意义(χ2=22.463,P<0.01)。结论肠道病毒手足口病主要为EV71和CA16感染所致,主要感染1~2岁婴幼儿,且具有一定的季节性,病程与排毒周期较长。
  • 【期刊】 手足口病病毒EV71衣壳蛋白VP1基因特征分析

    刊名:中国病原生物学杂志 作者:赵曦 ; 刘明石 ; 陈绮娴 ; 陈奇丹 关键词:EV71 ; 手足口病 ; VP1 ; 同源性分析 机构:吉林大学珠海学院 ; 吉林大学珠海学院 年份:2017
    摘要:目的分析幼童手足口病病毒EV71衣壳蛋白VP1基因特征,为手足口病临床预防和控制提供指导。方法随机收集604例手足口病幼童患者标本,培养病毒株并分离鉴定。采用RT-PCR扩增EV71及其VP1区基因,经基因产物测序分析毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性。结果604例手足口病幼童患者标本中,男性患者369例(61.09%)和女性235例(38.91%);(34.60%).1~岁179例(29.64%),2~岁216例(35.76%)和3~岁209例(34.60%)。共分离出病毒129株,分离率21.36%,其中EV71 61株(占47.29%),CoxA16 28株(占21.71%),其他肠道病毒40株(占31.01%)。61株EV71的VP1区基因序列间核苷酸同源性95.7%~100.0%,氨基酸同源性97.3%~100.0%。与C4a亚型代表株的核苷酸同源性96.4%~98.9%,氨基酸同源性99.0%~100.0%。与CoxA16原始株G-10、A、B基因型代表株VP1区以及C4b、C5亚型代表株的核苷酸同源性分别为66.0%~68.9%、78.6%~82.8%、83.2%~85.5%、95.2%~97.4%和84.5%~87.6%,氨基酸同源性分别为71.4%~75.7%、90.5%~93.6%、95.1%~96.0%、99.0%~99.8%和97.6%~99.4%。结论手足口病发病以3~4岁男性幼童为主,且以EV71为主。所分离的EV71流行株属于C4亚型。
  • 【期刊】 肠道病毒EV71型对不同细胞的敏感性研究

    刊名:山西医科大学学报 作者:李冰洁 关键词:EV71 ; 病毒分离 ; 敏感性 机构:抚顺市卫生学校检验教研室 ; 抚顺市卫生学校检验教研室 年份:2015
    摘要:目的确定肠道病毒EV71的敏感细胞。方法采用三种不同细胞(HEP-2、VERO、RD)对EV71核酸检测阳性标本进行病毒分离,对比不同细胞的分离率来比较细胞的敏感性。结果本研究中肠道病毒EV71型对VERO细胞的敏感性最高,其次是RD细胞,对HEP-2细胞不敏感。结论分离肠道病毒EV71型首选的细胞是VERO细胞。
  • 【期刊】 EV71 IgM抗体均相酶联免疫检测方法的初步建立

    刊名:中华实验和临床病毒学杂志 作者:崔雨[1] ; 王颖[2] ; 甘星[3] ; 宋娟[4] ; 韩俊[4] 关键词:EV71 VPl IgM 均相酶联免疫检测方法 机构:郑州人民医院 ; 郑州人民医院 年份:2016
    摘要:目的 建立一种快速检测肠道病毒71型(EV71) IgM抗体的均相ELISA新技术.方法 首先克隆表达纯化EV71 VP1蛋白,使用生物素标记该蛋白.通过ELISA法摸索出Bio-EV71 VP1的最适抗原量为0.0375 μg.优化供体微球、受体微球、血清等实验反应体系,建立EV71 VP1的均相酶联免疫检测方法的IgM检测技术.使用EV71感染的手足口病(HFMD)患者和健康人血清进行均相酶联免疫检测方法检测评价,并与ELISA检测结果相比较.结果 获得EV71 VP1纯化蛋白并生物素化.摸索出均相酶联免疫检测方法的体系:5 μg/ml受体微球、0.037 5μg生物素化的VP1、20μg/ml供体微球、血清2μl,总体系为20μl.采用ELISA和均相酶联免疫检测方法检测方法对样本血清进行IgM检测.两种方法同时检出手足口病患者lgM阳性16份;14份ELISA法检出阴性样本中,均相酶联免疫检测方法法检出阳性6份.20份健康人血清,2种方法检测结果均为阴性.结论 本研究初步建立了EV71 VP1 IgM的均相酶联免疫检测方法.
  • 【期刊】 广西健康幼托儿童EV71和CVA16血清抗体水平分析

    刊名:热带病与寄生虫学 作者:李燕 ; 蒋敏 ; 张艳艳 ; 林威 ; 农光民 关键词:手足口病 ; 隐性感染 ; 肠道病毒71型 ; 柯萨奇病毒A组16型 机构:广西医科大学第一附属医院 ; 广西医科大学第一附属医院 年份:2017
    摘要:目的 了解广西百色、都安、平果地区健康幼托儿童肠道病毒隐性感染状况,为手足口病防控提供科学依据.方法 采集幼托机构健康儿童135例静脉血标本,酶联免疫(ELISA)法检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CVA16)IgM和IgG抗体,对检测结果进行分析.结果 135例健康幼托儿童血样中EV71 IgM抗体阳性3例(2.22%),CVA16 IgM抗体阳性12例(8.89%),EV71 IgG抗体阳性110例(81.48%),CVA16 IgG抗体阳性112例(82.96%).女童EV71 IgM、IgG阳性率分别为0.00%,86.76%,男童的EV71 IgM、IgG阳性率分别为4.48%,76.12%;女童CVA16 IgM、IgG阳性率分别为0.00%,86.76%,男童的CVA16 IgM、IgG阳性率分别为4.48%,76.12%,性别差异无统计学意义(P>0.05).结论 肠道病毒EV71和CVA16的隐性感染在健康幼托儿童中较为普遍,学龄前儿童是感染高风险人群.
  • 【论文】 EV71毒力表型差异与氨基酸突变关系的研究

    作者:张亚杰 关键词:EV71 ; 反向遗传学 ; 3C蛋白酶 ; 毒力位点 机构:济南大学 ; 济南大学 年份:2016
    摘要:肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引起儿童手足口病(Hand-foot-and-mouth disease,HFMD)的重要病原。感染EV71后大多数患儿表现的症状较为轻微,如手足口部位的疱疹或疱疹性咽峡炎(Herpetic angina,HA);少数患儿能够发生严重的中枢神经系统(Central nervous system,CNS)炎症等并发症,如脑炎、脑膜炎、肺水肿甚至死亡。目前EV71感染致使CNS炎症损伤机制并不完全明确。多数研究表明,由EV71感染引起临床症状轻重的不同,一方面与被感染者身体免疫水平有关,也与病毒本身毒力强弱有关,即病毒基因组内可能存在毒力相关位点。课题组前期在临床分离得到6株不同毒力表型的EV71毒株,经动物实验分为强毒株组与弱毒株组,经测序发现两组不同毒力的毒株基因组内部发生了多处核苷酸的变异,并且引发了编码区内8处氨基酸发生了变化(结构蛋白VP3-I537V,VP1-S639G;非结构蛋白2A-P937 S/C/G,2B-V1014A,2B-I1062T,3C-V1597I,3C-N1617D和3D-V2146A)。为明确病毒毒力的差异是否是由于这些变异位点造成的,并且探明这些突变点与病毒毒力的关系,试验选取编码区内的8处变异位点作为研究对象,在EV71全长cDNA感染性克隆(A12质粒)基础上逐一构建了相应的突变株病毒的感染性克隆并进行了病毒拯救,并对拯救病毒突变前后在细胞上的复制能力作比较。结果发现位于3C蛋白酶上的nt5591(3C-N69D)位点突变后病毒复制能力明显降低,甚至无法在RD细胞上进行传代。为进一步明确nt5591位点变异致使病毒复制及感染能力降低的原因,我们对突变体3C蛋白进行了结构的模拟和分析,发现突变点临近酶的活性中心,突变使活性中心的构象发生变化,可能会对3C蛋白的功能造成影响。为验证猜想,我们将课题组前期在原核体系中克隆表达的对应nt5591突变点的3C蛋白突变体(3C-N69D),在体外通过酶活实验与野生株3C蛋白进行了酶活性的比较,结果显示突变体蛋白3C-N69D与野生3C蛋白相比其活性显著降低,切割不同底物多肽的能力分别下降了5-10倍。试验结果表明,nt5591位点的突变造成其所在的3C蛋白酶活性下降,使其剪切病毒多聚蛋白的效率降低,从而抑制了病毒的复制,是造成两组毒株毒力不同的根本原因。目的:运用反向遗传学的方法,构建针对编码区变异位点的8株EV71突变体感染性克隆并进行病毒拯救,通过比较病毒突变前后复制能力的变化,找出对病毒性状的改变产生作用的突变点,进而明确这两组毒力不同的EV71毒株的编码区内8处氨基酸的变异是否与病毒复制或毒力有关,并深入探寻变异位点影响病毒复制或毒力的机制。方法:1.在EV71全长cDNA感染性克隆(A12质粒)基础上,利用Quikchange方法构建针对编码区的突变株cDNA感染性克隆,将其按照在编码区的顺序依次命名为M1-M8(由重株向轻株进行突变),并进行突变株病毒的拯救,将得到的拯救病毒M1-M8在核酸水平(RT-PCR)和蛋白水平(western blot、间接免疫荧光实验)进行性质检测,并在RD细胞进行传代验证;绘制拯救病毒的生长曲线并分析突变点对病毒复制能力的影响,找出能影响病毒复制的关键位点。2.进一步探寻致使M7株突变体病毒复制能力下降的原因。通过生物信息学手段分析突变位点对3C蛋白的影响,设计EV71-3C蛋白酶的多肽底物,通过酶活性实验检测突变体3C-N69D的活性变化情况,并结合实验结果阐述突变与病毒毒力之间的关系。结果:1.成功构建了8株针对编码区变异位点的突变体cDNA感染性克隆并在RD细胞上进行拯救尝试,除M7(突变点nt5591位于3C蛋白酶)和M8(突变点nt7179位于3D蛋白酶)外所有拯救病毒均能稳定传代,生长曲线与未突变前相比无明显改变;突变株M7和M8转录本RNA转染细胞后虽能表达病毒特异蛋白,但将转染复合物继续传代后无法在细胞上产生细胞毒性效应(Cytopathogenic effect,CPE),且不能在RD细胞上传代;M7和M8回复突变验证结果显示,M7经回复突变后病毒恢复了野生株的生物学性状,而M8的回复突变体病毒仍不能使细胞产生CPE现象也不能进行传代。2.通过结构分析可知,突变点紧靠3C蛋白酶活性中心,N69D的突变造成了催化三联体的构象发生改变,可能影响酶的活性;酶活试验结果显示,突变体蛋白3C-N69D与野生株3C蛋白相比切割底物的能力下降了5-10倍,酶活性显著下降。分析得知N69D的突变极有可能是通过抑制3C蛋白酶的活性进而阻碍病毒的复制功能。结论:位于编码区3C蛋白的nt5591位点的变异是造成试验中两组病毒株毒力不同的根本原因;变异位点引起3C蛋白酶活性中心构像发生变化,使酶的活性显著降低,切割底物效率下降,抑制了病毒的复制,可能是病毒的毒力相关位点。
  • 【期刊】 IgM抗体检测对EV71感染手足口病诊断价值的探讨

    刊名:现代预防医学 作者:林威 ; 农光民 ; 李燕 ; 陆富策 ; 陈经纶 关键词:EV71 ; 手足口病 ; IgM抗体 ; 荧光定量RT-PCR 机构:广西医科大学第一附属医院儿科 ; 广西医科大学第一附属医院儿科 年份:2017
    摘要:目的探讨检测血清EV71-IgM抗体在EV71感染手足口病早期诊断中的应用价值。方法综合收集广西地区2014年4月-10月和2016年4月-10月临床诊断手足口病患儿436例,对所有患儿血清进行EV71-IgM抗体检测。其中136例患儿同时采集咽拭子或肛拭子通过荧光定量RT-PCR检测EV71-RNA。录入数据后采用SPSS 17.0进行统计学分析。结果临床诊断手足口病436人中EV71-IgM抗体阳性256例,阴性180例,危重症组和重症组的EV71-IgM抗体阳性率高于轻症组,差异有统计学意义(χ2=88.016,P<0.001)。以荧光定量RT-PCR检测为标准,同时检测136例患儿肛拭子或咽拭子EV71-RNA和血清EV71-IgM抗体,2种方法的检测一致性中等可靠(Kappa=0.575,P<0.001)。EV71-IgM检测的灵敏度为93.67%(74/79),特异度为61.40%(35/57)。EV71-IgM抗体阳性检出率在病程1~3 d逐渐升高,在病程d3检出率达到92.31%,在病程4~10 d检出率达到100.00%。结论血清EV71-IgM抗体检测具有较高的灵敏度,可行性强,操作方便,对早期诊断手足口病病原学有良好的应用价值。
  • 【期刊】 EV71感染重症手足口病患儿循环障碍特点及治疗

    刊名:现代医学 作者:陈秀英 ; 赖茂 关键词:肠道病毒71型 ; 手足口病 ; 循环障碍 ; 柯萨奇病毒 机构:东莞第八人民医院儿科 ; 东莞第八人民医院儿科 年份:2017
    摘要:目的:观察分析肠道病毒71型(EV71)感染所致重症手足口病患儿临床表现及循环障碍发生的特点及治疗方法。方法:回顾性分析186例重症手足口病患儿为研究对象,其中EV71感染者53例,柯萨奇病毒A组16型(COA16)感染者97例,其他病毒感染者36例,根据感染病毒不同分为EV71组、CA16组、其他病毒组,观察三组患儿循环障碍发生等临床特点、治疗方法及预后。结果:EV 71组患儿循环障碍、神经系统受累、肺出血临床发生率高于CA16组及其他病毒组,EV71组中心动过速、血压增高、末端循环障碍为EV71组最为常见的循环障碍临床表现,且发生率高于CA16组及其他病毒组,EV71组住院时间长于CA16组及其他病毒组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:EV71感染重症手足口病患儿神经系统受损、肺出血、循环障碍发生率高于其他病毒感染,血压不稳、心率加快是其主要循环障碍临床表现,有效的预防措施能够有效的防止EV71感染患儿短时间内发展为危重病例。
  • 【期刊】 STAT1基因敲除提高小鼠对EV71病毒的敏感性研究

    刊名:中国医药导报 作者:李光超 ; 张倩 ; 武婧 ; 赵彬彬 ; 陈鑫 ; 秦川 ; 刘江宁 关键词:病毒感染 ; 炎症因子 机构:中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所 ; 中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所 ; 卫计委人类疾病比较医学重点实验室 ; 国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室 年份:2017
    摘要:目的 分析STAT1基因敲除小鼠免疫相关因子表达差异,观察STAT1基因敲除小鼠感染EV71病毒后的症状表现及病毒载量,为EV71抗病毒治疗提供数据基础.方法 LPS刺激STAT1基因敲除小鼠后,利用微珠免疫分析(CBA)方法对血清免疫相关因子定量分析;EV71感染STAT1基因敲除小鼠后,观察症状及病理表现,利用实时荧光定量检测对肌肉病毒RNA定量分析.结果 LPS刺激后,STAT1基因敲除小鼠血清多种细胞因子分泌水平下降(P< 0.01);EV71感染后,STAT1基因敲除小鼠病理损伤加重,肌肉中病毒载量升高(P<0.01),与野生型小鼠相比表现出更严重的症状与更高的死亡率.结论 STAT1在抗EV71感染的免疫过程中扮演重要角色,提示STAT1基因敲除可以提高小鼠对EV71病毒的敏感性.
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