·
搜索结果:找到“DNA聚合酶--Taq酶的发现”相关结果86113条
排序: 按相关 按相关 按时间降序
  • 【期刊】 Taq DNA聚合酶的制备和纯化

    刊名:湖南农业科学 作者:詹庆才 ; 詹祎捷 ; 刘之熙 ; 朱克永 关键词:Taq DNA聚合酶 ; Bio-Rex70柱层析 ; 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ; PCR 机构:湖南省水稻研究所 ; 湖南省水稻研究所 ; 北京联合大学应用文理学院 年份:2013
    摘要:Taq DNA聚合酶是分子生物学研究中最常用的热稳定DNA聚合酶之一。试验利用含Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化大肠杆菌E.coli菌株,用异丙基硫代-β-D-乳糖苷(IPTG)诱导表达耐热Taq DNA聚合酶;采用热变性沉淀杂蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯度,Bio-Rex 70柱层析纯化蛋白,PCR反应检测Taq DNA聚合酶的浓度和活性。结果表明:分离纯化制备的Taq DNA聚合酶,其纯度、酶活性和酶特异性均达到市售的Taq DNA聚合酶水平。
  • 【期刊】 Taq DNA聚合酶的热纯化制备

    刊名:安徽农业科学 作者:丁燕华 ; 刘树涛 ; 齐庆远 关键词:Taq DNA聚合酶 ; 热纯化 ; pET-32A ; BL21 ; DE3 机构:浙江师范大学化学与生命科学学院 ; 浙江师范大学化学与生命科学学院 年份:2011
    摘要:[目的]提高Taq DNA聚合酶的制备效率。[方法]利用Ni柱亲和色谱纯化载有6xHis标记的Taq DNA聚合酶,并重组载体,利用Taq DNA聚合酶的耐热特性,对粗提液75℃处理1h,之后通过PCR试验验证制备酶液的活力。[结果]所获重组的pET-32A-Taq能够在BL21(DE3)宿主菌中高效表达并可通过热变性去除杂蛋白,获得了活力远高于购买的Taq DNA聚合酶的酶制剂。[结论]使用热纯化法制备的Taq DNA聚合酶工艺简单,成本较低,能满足常规大量PCR实验要求。
  • 【期刊】 DNA聚合酶I的发现与意义

    刊名:生物学通报 作者:任衍钢 ; 宋玉奇 ; 白冠军 关键词:大肠杆菌 ; DNA聚合酶 ; 科恩伯格 ; 科学发现 机构:阳泉师范高等专科学校 ; 阳泉师范高等专科学校 年份:2014
    摘要:DNA聚合酶I是在DNA双螺旋结构模型提出后被发现的,阿瑟·科恩伯格在研究过程中起到至关重要的作用。在其研究成果的推动下,大肠杆菌DNA聚合酶I得到进一步揭示,并催生了PCR技术的问世,同时也促进了其他DNA聚合酶的发现
  • 【期刊】 Taq DNA聚合酶的热纯化制备(摘要)

    刊名:农业科学与技术:英文版 作者:丁燕华 ; 刘树涛 ; 齐庆远 关键词:Taq DNA聚合酶 ; 热纯化 ; pET-32A BL21(DE3) 机构:浙江师范大学化学与生命科学学院 ; 浙江师范大学化学与生命科学学院 年份:2011
    摘要:[目的]提高Taq DNA聚合酶的制备效率。[方法]利用Ni柱亲和色谱纯化载有6xHis标记的Taq DNA聚合酶,并重组载体,利用Taq DNA聚合酶的耐热特性,对粗提液75℃处理1h,之后通过PCR试验验证制备酶液的活力。[结果]所获重组的pET-32A-Taq能够在BL21(DE3)宿主菌中高效表达并可通过热变性去除杂蛋白,获得了活力远高于购买的Taq DNA聚合酶的酶制剂。[结论]使用热纯化法制备的Taq DNA聚合酶工艺简单,成本较低,能满足常规大量PCR实验要求。
  • 【期刊】 DNA聚合酶Ⅲ全酶的功能和结构的发现

    刊名:《自然杂志》 作者:向义和 关键词:DNA聚合酶Ⅲ ; DNA聚合酶Ⅲ* ; 共聚物酶Ⅲ* ; α核心聚合酶 ; ε亚基 ; β亚基滑动夹子 ; γ复合物 机构:清华大学物理系 ; 清华大学物理系 年份:2012
    摘要:介绍了DNA聚合酶Ⅲ和聚合酶Ⅲ*的发现,DNA聚合酶Ⅲ全酶形式的提出以及全酶亚基的分离。同时,介绍了DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能,其中包括α核心的聚合酶功能,ε亚基的3′→5′外切核酸酶活性,β亚基滑动夹子的功能以及γ复合物的结构与功能。
  • 【期刊】 DNA聚合酶Ⅲ全酶的功能和结构的发现

    刊名:自然杂志 作者:向义和 关键词:DNA聚合酶Ⅲ ; DNA聚合酶Ⅲ* ; 共聚物酶Ⅲ* ; α核心聚合酶 ; ε亚基 ; β亚基滑动夹子 ; γ复合物 机构:清华大学物理系 ; 清华大学物理系 年份:2012
    摘要:介绍了DNA聚合酶Ⅲ和聚合酶Ⅲ*的发现,DNA聚合酶Ⅲ全酶形式的提出以及全酶亚基的分离。同时,介绍了DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能,其中包括α核心的聚合酶功能,ε亚基的3′→5′外切核酸酶活性,β亚基滑动夹子的功能以及γ复合物的结构与功能。
  • 【期刊】 重组Taq DNA聚合酶的表达和纯化鉴定

    刊名:江西农业学报 作者:刘钦松 ; 刘孟刚 ; 张丛丛 ; 张程 ; 许彤 关键词:Taq DNA聚合酶 ; 纯化 ; 扩增性能 机构:山东博奥克生物科技有限公司 ; 山东博奥克生物科技有限公司 年份:2012
    摘要:【目的】表达、纯化Taq DNA聚合酶,并检测其扩增性能。【方法】活化含Taq DNA聚合酶基因的菌株JM109,IPTG诱导表达。目的蛋白利用AKTA蛋白纯化系统,依次过Affi-Gel Blue Sepharose,Heparin Sepharose Fast Flow,Q-Sepha-rose Fast Flow,经SDS-PAGE分析,以国外进口Taq酶为标准,采用对比法初略测定酶活性,验证产品质量。【结果】制备的Taq DNA聚合酶具有扩增效率高、纯度高、特异性强、无核酸酶污染、活性稳定等优点。【结论】成功表达纯化Taq DNA聚合酶,其扩增性能达到甚至超过国外同类产品。
  • 【期刊】 Taq DNA聚合酶的热纯化制备(摘要)(英文)

    刊名:Agricultural Science & Technology 作者:丁燕华 ; 刘树涛 ; 齐庆远 关键词:Taq DNA聚合酶 ; 热纯化 ; pET-32A ; BL21 ; DE3 机构:浙江师范大学化学与生命科学学院 ; 浙江师范大学化学与生命科学学院 年份:2011
    摘要:[目的]提高Taq DNA聚合酶的制备效率。[方法]利用Ni柱亲和色谱纯化载有6xHis标记的Taq DNA聚合酶,并重组载体,利用Taq DNA聚合酶的耐热特性,对粗提液75℃处理1h,之后通过PCR试验验证制备酶液的活力。[结果]所获重组的pET-32A-Taq能够在BL21(DE3)宿主菌中高效表达并可通过热变性去除杂蛋白,获得了活力远高于购买的Taq DNA聚合酶的酶制剂。[结论]使用热纯化法制备的Taq DNA聚合酶工艺简单,成本较低,能满足常规大量PCR实验要求。
  • 【期刊】 DNA聚合酶Ⅰ的功能与结构的发现

    刊名:《自然杂志》 作者:向义和 关键词:DNA聚合酶Ⅰ ; 活性中心模型 ; Klenow片段 ; 晶体结构 ; 右手模型 机构:清华大学物理系 ; 清华大学物理系 年份:2011
    摘要:本文具体介绍了DNA聚合酶Ⅰ的功能与结构的发现过程,包括聚合酶活性中心模型的提出;聚合酶分子量的测定;聚合酶的分离及其活性片段的获得;聚合酶Klenow片段晶体结构的测定以及DNA结合部位与活性位点的确立;Klenow片段结合DNA的晶体结构以及噬菌体T7DNA复制的晶体结构的测定,在测定这些复合物共晶体的基础上,提出了DNA聚合酶合的右手模型。
  • 【期刊】 DNA聚合酶Ⅰ的功能与结构的发现

    刊名:自然杂志 作者:向义和 关键词:DNA聚合酶Ⅰ ; 活性中心模型 ; Klenow片段 ; 晶体结构 ; 右手模型 机构:清华大学物理系 ; 清华大学物理系 年份:2011
    摘要:本文具体介绍了DNA聚合酶Ⅰ的功能与结构的发现过程,包括聚合酶活性中心模型的提出;聚合酶分子量的测定;聚合酶的分离及其活性片段的获得;聚合酶Klenow片段晶体结构的测定以及DNA结合部位与活性位点的确立;Klenow片段结合DNA的晶体结构以及噬菌体T7DNA复制的晶体结构的测定,在测定这些复合物共晶体的基础上,提出了DNA聚合酶合的右手模型。
  • 【论文】 Taq DNA聚合酶的结构修饰与表征

    作者:郭佳 关键词:Taq DNA聚合酶 ; KT-C3DNA聚合酶 ; PCR抑制剂 机构:厦门大学 ; 厦门大学 年份:2014
    摘要:本论文根据Taq DNA聚合酶的结构与功能信息以及前人对该酶的研究,对Taq DNA聚合酶基因进行了结构修饰,并对修饰后的聚合酶活性进行了表征,旨在提高酶对抑制剂的耐受程度,使其既可以应用于普通PCR体系和实时荧光PCR体系中,也可以应用于全血和土壤提取物直接扩增的体系。 第一章,概述了PaqDNA聚合酶的发现、性质、结构及其在PCR技术中的应用。TaqDNA聚合酶应用广泛,但在临床应用中仍有诸多不足之处。通过对Taq DNA聚合酶进行结构改造或化学修饰,可以降低或消除酶的5'-3’核酸外切酶活性,提高酶的耐热性、续进性、忠实性、特异性、对抑制剂的耐受程度以及使酶具有热启动活性等。 第二章,我们利用基因工程技术对Taq DNA聚合酶进行改造。首先,通过定点突变对酶的3个氨基酸位点进行突变,即E626K、I707L和E708Q。其中E626K和1707L这两个位点的突变可以提高酶的最适反应温度,减少非特异性产物的扩增。E708Q的突变可以显著提高酶对多种PCR抑制剂的耐受能力。其次,通过缺失突变去除了酶N端的278个氨基酸,以消除酶的5'-3’核酸外切酶活性。在基因突变改造后,我们还对改造后的酶进行柠康酸酐修饰,以使其具有热启动的效果,从而减少PCR扩增中引物二聚体及非特异性产物的扩增。 第三章,对改造后的酶—KT-C3DNA聚合酶的性质进行表征。首先,考察该酶的热稳定性和最适反应温度。结果显示KT-C3DNA聚合酶具有较高的热稳定性,在95℃加热4h后还能进行正常的PCR扩增,它的最适延伸温度比普通Taq DNA聚合酶提高约4℃,较高的延伸温度可以有效减少引物二聚体及非特异性产物的扩增。其次,考察KT-C3DNA聚合酶在实时PCR体系中的应用性能,并与商品Taq DNA聚合酶及具有热启动活性的Taq-HS (Takara)作对比。发现该酶具有与商品酶相当的扩增效果和灵敏度。第三,考察KT-C3DNA聚合酶对乙醇、SDS、NaCl的耐受程度,及在全血和土壤提取物中的扩增性能,发现该酶可以耐受10%的乙醇、0.048%的SDS、100mM的NaCl。可以在35%及以上的全血中进行很好的扩增,而且在含有5%的全血中还能达到1×101copies/μL的扩增灵敏度,柠康酸酐修饰后的KT-C3DNA聚合酶还能耐受10μL/反应的土壤提取物,并且在含有4μL/反应的土壤提取物中还能达到1×100copies/μL的扩增灵敏度。说明KT-C3DNA聚合酶对抑制剂的耐受程度远远高于一般的商品酶。一定程度上降低了PCR反应对模板的要求,扩大了PCR技术的应用范围。对促进DNA聚合酶的发展和PCR技术在分子诊断技术上的应用都具有重要意义。
  • 【期刊】 DNA聚合酶发现、特性及其功能

    刊名:国外科技新书评介 作者:乌尔里克·胡布舍尔 ; 鲁敏 关键词:DNA聚合酶 ; 聚合酶链式反应 ; 功能 ; 特性 ; cDNA克隆 ; 基因组测序 ; DNA诊断 ; 生物体内 机构:中国科学院动物研究所 ; 中国科学院动物研究所 年份:2011
    摘要:在自然界,DNA聚合酶在生物体内DNA的合成中起着至关重要的作用。此外,DNA聚合酶在许多重要的生物化学和核心药物技术中也扮演着重要的角色,比如聚合酶链式反应、cDNA克隆、基因组测序、DNA诊断以及那些分析远古的和受损的DNA的技术。
上一页 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 下一页 跳转