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  • 【期刊】 鸡巨噬细胞HD11不同转染方法的比较分析

    刊名:畜牧与兽医 作者:韩笑 ; 胡序明 ; 袁君婷 ; 吕贝 ; 孙振 ; 陈世豪 ; 耿拓宇 ; 崔恒宓 关键词:鸡巨噬细胞 ; 转染效率 ; 电穿孔法 ; 脂质体法 机构:扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所 ; 扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所 ; 扬州大学动物科学和技术学院 ; 扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所 ; 扬州大学动物科学和技术学院 ; 扬州大学医学院 年份:2017
    摘要:以鸡巨噬细胞HD11作为研究对象,分别采用5种不同的脂质体试剂转染和电转方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)的质粒转入HD11细胞中,然后通过比较并筛选出适合鸡巨噬细胞HD 11的最佳转染方法.结果显示:Lipofectamine 2000 Reagent、Attractene Transfection Reagent和TransiT(R)-2020 Transfection Reagent几种常见的脂质体转染试剂并不适用于HD11细胞转染.而Coming Transfection Reagent、Lip2000 Transfection Reagent脂质体转染试剂和电转可用于HD11细胞转染;其中,Lip2000 Transfection Reagent转染试剂效果最好.在此基础上,通过进一步优化得出:当DNA(μg)和Lip2000(μg)的比例为1∶1.5时转染效率最高.本研究成功筛选出一种有效的鸡巨噬细胞HD11转染方法,为鸡巨噬细胞的转染及其相关研究提供了实验依据.
  • 【期刊】 转移因子对SPF鸡巨噬细胞吞噬指数的影响

    刊名:福建畜牧兽医 作者:叶建良 关键词:转移因子 ; 饮用 ; 肌肉注射 ; SPF鸡 ; 巨噬细胞吞噬指数 机构:[1]福建省周宁县动物卫生监督所 ; [1]福建省周宁县动物卫生监督所 年份:2018
    摘要:为了解转移因子(TF)对SPF鸡巨噬细胞吞噬指数的影响,采用饮用(第1组)和肌肉注射(第2组)两种途径接种SPF鸡,TF使用剂量均为0.02 mL/羽,同时设立空白对照组(第3组),分别于接种TF后第7 d和第21 d检测巨噬细胞吞噬指数。结果显示,第1组和第2组巨噬细胞吞噬指数差异不明显,且比第3组提高了2.78~4.08。结果表明,饮用或肌肉注射TF均可提高鸡巨噬细胞吞噬指数。
  • 【会议】 鸡巨噬细胞移动抑制因子MIF抗体的制备

    作者:赵泽华 ; 韩丽娟 ; 王彦美 ; 李浩运 ; 何函 ; 李媛 ; 王文魁 机构:山西农业大学 ; 山西农业大学 年份:2014
    摘要:巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是动物界发现较早且最为保守的细胞因子之一,具有调节免疫机能、参与炎症反应、参与物质代谢调节等功能。MIF具有"多效(pleiotropic)"性,通过多种机制介导先天性和获得性免疫,诱导多种细胞因子、趋化因子(chemokines)和粘附因子的分泌及聚集,并与糖皮质激素和下丘脑-垂体-肾上腺皮轴相互作用,
  • 【期刊】 低聚果糖-菊糖可提高鸡巨噬细胞灭菌能力

    刊名:中国家禽 关键词: ; 巨噬细胞 ; 低聚果糖 ; 菊糖 ; 能力 ; 灭菌 ; 吞噬作用 ; 化学因子 年份:2012
    摘要:美国食品和药物管理局的研究人员测定低聚果糖(FOS)-菊糖处理对鸡巨噬细胞系(HD11细胞)吞噬和杀灭肠炎沙门菌(SE)及在体外模型中表达选择性细胞因子和化学因子的能力。研究结果表明,添加FOS-菊糖后鸡HD11细胞中有活力的内源性SE显著少于未添加组;然而,对SE的吞噬作用、NO表达量或产量没有影响。
  • 【期刊】 甘草酸对体外鸡巨噬细胞免疫和杀菌功能的影响(英文)

    刊名:Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 作者:Bai-kui WANG ; Yu-long MAO ; Li GONG ; Xin XU ; Shou-qun JIANG ; Yi-bing WANG ; Wei-fen LI 关键词:鸡巨噬细胞 ; 甘草酸 ; 巨噬细胞活化 ; 鼠伤寒沙门氏菌 ; 核因子κB(NF-κB) ; c-Jun氨基端激酶(JNK) 机构:Laboratory ; Laboratory ; Animal ; Molecular ; Nutrition ; Education ; Ministry ; Laboratory ; Animal ; Nutrition ; Zhejiang ; Province ; College ; Animal ; Sciences ; Zhejiang ; University ; Institute ; Animal ; Science ; Guangdong ; Academy ; Agricultural ; Sciences ; State ; Laboratory ; Livestock ; Poultry ; Breeding ; Laboratory ; Animal ; Nutrition ; Science ; South ; China ; Ministry ; Agriculture ; Guangdong ; Public ; Laboratory ; Animal ; Breeding ; Nutrition ; Guangdong ; Laboratory ; Animal ; Breeding ; Nutrition 年份:2018
    摘要:目的:探究甘草酸能否激活体外鸡巨噬细胞并增强其免疫和吞噬杀菌功能。创新点:甘草酸通过核因子κB(NF-κB)和c-Jun氨基端激酶(JNK)信号通路提高一氧化氮(NO)和过氧化氢(H2O2)产生量,增强了其吞噬和杀菌的功能。方法:以不同浓度的甘草酸(0、12.5、25、50、100、200、400和800μg/ml)处理鸡巨噬细胞系HD11,采用荧光定量聚合酶链式反应(qP CR)和一氧化氮及过氧化氢测定试剂盒评价甘草酸对鸡巨噬细胞活化和免疫的影响,采用流式细胞技术和涂板计数法测定鸡巨噬细胞吞噬和杀菌能力。结论:甘草酸通过NF-κB和JNK信号通路激活鸡巨噬细胞,提高免疫细胞因子等基因的表达水平和NO及H_2O_2的产生量,从而增强了鸡巨噬细胞吞噬和清除胞内沙门氏菌的能力。
  • 【会议】 雌马酚对鸡巨噬细胞抗氧化保护和免疫调控作用的研究

    作者:苟钟勇 ; 蒋守群 ; 郑春田 ; 林夏菁 机构:广东省农业科学院动物科学研究所,畜禽育种国家重点实验室,农业部动物营养与饲料(华南)重点实验室,广东省动物育种与营养公共实验室 ; 广东省农业科学院动物科学研究所,畜禽育种国家重点实验室,农业部动物营养与饲料(华南)重点实验室,广东省动物育种与营养公共实验室 年份:2014
    摘要:本试验旨在通过体外培养鸡巨噬细胞,用脂多糖(LPS)刺激后,再添加不同浓度的雌马酚处理,研究雌马酚对鸡巨噬细胞的抗氧化保护和免疫调控作用。试验设计分7个处理组,第1组为空白对照组,第2组添加100 ng/mL的LPS刺激,第3~7组在第2组基础上再分别添加10、20、40、80、160μmol/L的雌马酚处理,所有试剂处理细胞的时间均为24 h。试验结果为:用LPS刺激显著
  • 【期刊】 共轭亚油酸对免疫抑制肉仔鸡巨噬细胞分泌功能的影响

    刊名:今日畜牧兽医 关键词:共轭亚油酸 ; 巨噬细胞 ; 分泌功能 ; 免疫抑制 ; 肉仔鸡 ; 培养试验 ; 环磷酰胺 ; 异构体 年份:2011
    摘要:采用健康肉仔鸡和环磷酰胺免疫抑制肉仔鸡模型.通过体外细胞培养试验来研究2种共轭亚油酸异构体(c9,tll—CLA和t10,c12-CLA)肉鸡巨噬细胞分泌功能的影响。
  • 【论文】 鸡巨噬细胞在LPS和小鼠红细胞刺激下体外分化成熟的特征

    作者:金星 关键词:鸡巨噬细胞 ; LPS ; 小鼠红细胞 ; 极化 机构:安徽农业大学 ; 安徽农业大学 年份:2016
    摘要:巨噬细胞是一种重要的免疫细胞,它在杀灭病原体,递呈抗原和调节免疫应答的过程中发挥着重要作用。迄今为止,关于鸡巨噬细胞的体外分离培养鲜有报道。本次研究使用细胞系L929和HD-11细胞系的细胞上清液刺激骨髓来源和外周血来源的巨噬细胞,首先通过多组交叉实验,以前体细胞的浓度、刺激因子的终浓度、以及培养的时间作为变量,优化筛选出最优的巨噬细胞体外培养的条件。在最优条件下培养巨噬细胞,待其到达最优培养天数后,通过核染实验以及小鼠红细胞(mRC)吞噬实验观察它们的形态学特征和吞噬功能,通过普通PCR检测了表面标志CD11b的特异性基因,并将所得序列进行比对。最后,将活化的巨噬细胞分别与LPS和小鼠的红细胞继续培养,使用荧光定量PCR的方法检测特征性细胞因子(IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、iNOS、TGF-β、TNF-α)基因的转录水平以及免疫分子(MHCI-α、MHCII-β、Ii)基因的转录水平。结果显示巨噬细胞的最优培养条件为:前体细胞的初始浓度为6×105个/mL、刺激因子HD-11-CM和L929-CM的终浓度为30%,以及巨噬细胞的最优培养天数为5~8天。在最优条件下得到的活化的巨噬细胞呈现出梭形、细胞核增大、具有吞噬功能的特征。此外,这些细胞高水平转录特征性基因cd11b。结果显示,与对照组相比,在受到两种不同的刺激剂刺激而产生极化的巨噬细胞的Mhc和Ii基因的转录量显著降低(P<0.01)。在LPS的的刺激下体外培养所得的四组细胞均向M1方向进行极化,表现为巨噬细胞转录M1特征细胞因子IL-12、IL-6、IL-2和iNOS的水平升高显著(P<0.01),TNF-ɑ升高(P<0.01),但IL-1β表达量下降(P<0.05);同时M2型特征细胞因子IL-10转录水平显著下降(P<0.01),而TGF-β转录水平明显升高(P<0.01)。小鼠红细胞刺激极化的成熟骨髓源巨噬细胞转录M1型特征性细胞因子IL-12显著升高(P<0.01),IL-6、IL-2的升高(P<0.05),而IL-1β、iNOS、TNF-α转录水平则显著下降(P<0.01),M2型特征性细胞因子L-10和TGF-β转录水平也显著下降(P<0.01)。这些结果不仅提供了鸡巨噬细胞体外培养的生物学特征,而且表明了刺激剂影响巨噬细胞体外极化的作用。综上所述,本次研究建立了血液源和鸡骨髓源巨噬细胞体外分离培养极化的方法。通过在形态学、功能学以及分子水平的检测证明培养所得的四种细胞(L929-CM刺激的骨髓源巨噬细胞、L929-CM刺激的血液源巨噬细胞、均为功能性巨噬细胞、HD-11-CM刺激的骨髓源巨噬细胞、HD-11-CM刺激的血液源巨噬细胞)为巨噬细胞。分别使用LPS和mRC成功诱导成熟的巨噬细胞发生极化后,通过相对荧光定量PCR的方法检测结果显示极化后的巨噬细胞MhcI-α、MhcII-β和Ii基因的转录水平都显著下调,LPS诱导的巨噬细胞的和mRC诱导的巨噬细胞在M1/M2特征性细胞因子的转录水平上存在差异。
  • 【期刊】 共轭亚油酸对免疫抑制肉仔鸡巨噬细胞分泌功能的影响

    刊名:中国畜牧兽医 作者:陈艳红 ; 刘丹 ; 颜忠 ; 姚晶 ; 曹克军 关键词:肉仔鸡 ; 共轭亚油酸 ; 环磷酰胺 ; 巨噬细胞 ; 细胞因子 机构:中国农业大学动物医学院 ; 中国农业大学动物医学院 ; 中国农业大学动物科技学院 年份:2010
    摘要:本研究采用健康肉仔鸡和环磷酰胺免疫抑制肉仔鸡模型,通过体外细胞培养试验来研究2种共轭亚油酸异构体(c9,t11-CLA和t10,c12-CLA)对肉鸡巨噬细胞分泌功能的影响。选取24只1日龄爱拔益加(Arbor Acre)肉仔鸡随机分为免疫抑制处理组和健康肉仔鸡组,分别于14、15和16日龄进行环磷酰胺(CY,80 mg/kg体重)腿肌注射和等体积生理盐水腿肌注射。巨噬细胞体外培养试验采用含不同浓度(0、25、50和100μmol/L)c9,t11-CLAt、10,c12-CLA或1∶1的混合物(CLA混合物)。结果表明,体外添加t10,c12-CLA可对肉仔鸡腹腔巨噬细胞NO和IL-1的分泌起双向调节作用,即在肉仔鸡正常生理条件下,t10,c12-CLA可抑制LPS刺激后巨噬细胞细胞因子的分泌,降低炎性反应;而当巨噬细胞的免疫功能受抑制时,t10,c12-CLA可减缓CY对巨噬细胞的损伤和免疫抑制作用,维持巨噬细胞细胞因子的分泌功能。添加高剂量的t10,c12-CLA效果好于低剂量添加;c9,t11-CLA对巨噬细胞分泌细胞因子的功能均无明显影响。
  • 【论文】 新城疫病毒感染鸡巨噬细胞miRNA表达谱分析及gga-miRNA155的功能

    作者:陈严玉 关键词:新城疫病毒 ; miRNA表达谱 ; 差异表达 ; miRNA155 机构:吉林大学 ; 吉林大学 年份:2018
    摘要:新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)强毒株引起的一种禽类急性高度接触性病毒性传染病,可感染大部分的非免疫鸟类,并可跨种传播哺乳动物。我国当前的优势型新城疫毒株为基因VII型强毒,其高致死率对全球养禽业的经济造成了严重危害。而现阶段对新城疫的防控措施主要依赖疫苗接种,在一定程度上控制了禽类感染新城疫病毒后的临床症状以及死亡现象,却无法完全控制病毒在禽类体内的复制以及机体向体外排毒的现象,因此单纯的依赖疫苗免疫存在着一定的局限性。microRNA(miRNA)是一类长度为18~25 nt的可以由动物、植物、病毒等多种生物体编码合成的非编码小RNA,参与组织发育、细胞分化、增殖凋亡,以及在调控病毒的基因表达、干扰病毒复制、组装、释放等环节都发挥着重要的作用。本文通过高通量技术分析了鸡巨噬细胞感染新城疫强、弱毒后的miRNA表达谱,对筛选后的众多差异miRNA的表达量进行了荧光定量鉴定,并利用软件对差异miRNA进行了功能性分析,为今后研究新城疫病毒与miRNA之间的相互作用奠定了一定的基础。根据相关的文献和实验结果以及这次的高通量数据,选取了miRNA155作为研究对象,研究其在新城疫病毒感染鸡巨噬细胞过程中对病毒在细胞中复制的作用,并利用相关软件对miRNA155的靶基因和功能进行了预测和分析。研究分为以下几个部分:1.新城疫病毒感染鸡巨噬细胞后的miRNA表达谱分析用MOI=2剂量的新城疫强(NA-1)、弱(La Sota)毒株分别感染鸡巨噬细胞(HD11),在感染后24 h、48 h分别收集细胞,并设立空白对照组。用Tripure提取总RNA,对总RNA进行质量检测评估,选取质量合格的样品进行高通量测序。对不同毒株在同一时间点以及同一毒株在不同时间点感染细胞后的mi RNA表达谱进行分析(p value<0.01,信号值>100,差异值|Log2|>2),为下一步鉴定差异miRNA做准备。结果显示NA-1毒株感染HD11细胞24 h后产生了2227种miRNA,感染48 h后产生了1954种miRNA。La Sota毒株感染HD11细胞24h后产生了1950种miRNA,感染48 h后产生了1914种miRNA。2.差异miRNA的表达量分析比对感染组样品与未感染组样品细胞内的mi RNA,对差异miRNA进行筛选和分析。发现与未感染组相比感染NA-1的细胞在24 h和48 h分别产生了233和263种差异miRNA,有122个miRNA是在24 h和48 h都持续产生的。而感染La sota后在24 h和48 h分别产生了158和153种差异miRNA,其中有35个miRNA是在感染后24 h和48 h都持续产生的。另外有18个mi RNA是在不同毒株以及不同时间点感染后都持续存在的。用Tripure提取感染了MOI=2的NA-1和La sota在24 h和48 h的HD11细胞的总RNA,并用miRNA反转录试剂盒对总RNA进行反转录获得cDNA,运用荧光定量染料法以cDNA为模板对筛选后的差异miRNA进行进一步的筛选鉴定。实验结果表明,Q-PCR后在17个差异miRNA中有2个miRNA的表达量在感染前后有显著差异,且表达量均上调,通过GO和KEGG分析对其生物学功能进行预测和分析。3.miRNA155对新城疫病毒在鸡巨噬细胞内复制水平的影响分别用不同剂量的NA-1毒株感染HD11细胞,并分别在24 h、48 h提取总RNA,并用miRNA反转录试剂盒对总RNA进行反转录获得cDNA,运用荧光定量以cDNA为模板分别检测HD11细胞感染不同剂量的NA-1毒株时在不同的时间点的细胞内miRNA155的表达量与病毒含量。对HD11细胞转染miRNA155的模拟物(mimic)、抑制剂(inhibitor)模拟miRNA155的过表达以及功能抑制现象,观察新城疫病毒感染后病变现象,并对miRNA155的表达量、病毒含量以及相关细胞因子进行检测。利用Targetscan和miRDB软件对miRNA155的靶基因进行预测并进行了相关验证和分析,进一步探索miRNA155对新城疫病毒在HD11细胞内复制水平的影响。实验结果显示,HD11细胞转染了miRNA155的模拟物和抑制剂后感染新城疫病毒不发生病变现象,但是病毒含量并没有发生变化,而某些相关细胞因子的表达量发生了显著变化。并且miRNA155能够引起TAB2靶基因的表达量的显著上升,而TAB2与p38MAPK通路有关。这说明miRNA155参与病毒感染引起的炎症反应,并且可能参与了TAB2所在的p38MAPK通路,并通过通过一系列的反应影响了细胞的病变现象或者病毒的组装和出芽,但是miRNA155不能直接影响新城疫病毒在HD11细胞内的复制。
  • 【期刊】 柔嫩艾美耳球虫诱导鸡巨噬细胞Toll样受体mRNA转录水平的变化

    刊名:中国生物制品学杂志 作者:张藜潇 ; 武斌 ; 宫鹏涛 ; 张西臣 ; 李建华 关键词:鸡巨噬细胞 ; 柔嫩艾美耳球虫 ; Toll样受体 机构:吉林大学动物医学学院 ; 吉林大学动物医学学院 年份:2016
    摘要:目的探讨柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)诱导鸡巨噬细胞Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)m RNA转录水平的变化。方法用有病毒和无病毒E.tenella分别刺激鸡巨噬细胞,于刺激后0、1、2、4、6、8 h收集鸡巨噬细胞,Trizol试剂提取总RNA,经q RT-PCR法检测鸡Toll样受体(chicken TLRs,Ch TLRs)表达的动态变化。结果有病毒E.tenella刺激鸡巨噬细胞的Ch TLR1和Ch TLR21 m RNA的转录水平于刺激4 h时达最高,Ch TLR4、Ch TLR7、Ch TLR15 m RNA的转录水平于刺激2 h时达最高,Ch TLR2、Ch TLR3、Ch TLR5 m RNA转录水平于刺激4 h后显著下调,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。无病毒E.tenella刺激鸡巨噬细胞各时间点的Ch TLR1、Ch TLR4、Ch TLR21 m RNA的转录水平与对照组差异均无统计学意义(P>0.05);Ch TLR15 m RNA的转录水平于刺激2 h时达最高,Ch TLR2、Ch TLR3、Ch TLR5、Ch TLR7 m RNA转录水平于刺激4 h后显著下调,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Ch TLR7和Ch TLR21可能与鸡的抗E.tenella病毒的先天性免疫应答有关,为E.tenella感染的天然免疫机制的研究及鸡E.tenella病的防控奠定了基础。
  • 【期刊】 鸡巨噬细胞炎性蛋白-1β基因cDNA的克隆及序列测定

    刊名:中国预防兽医学报 作者:王纯洁 ; 张丽 ; 马学恩 ; 哈斯阿古拉 ; 王彩云 ; 姚玉 关键词:鸡巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)基因 ; cDNA克隆 ; 核苷酸序列 机构:内蒙古农业大学动物科学与医学学院 ; 内蒙古农业大学动物科学与医学学院 ; 内蒙古大学生命科学学院生物工程中心 ; 内蒙古农业大学动物科学与医学学院 ; 内蒙古大学生命科学学院生物工程中心 ; 内蒙古农业大学动物科学与医学学院 ; 内蒙古呼和浩特市动物防疫监督所 年份:2004
    摘要:为进一步研究鸡巨噬细胞炎性蛋白_1β(MIP_1β)的生物学功能,用反转录_多聚酶链反应(RT_PCR)技术,以鸡的外周血单核细胞中提取的RNA为模板,进行反转录合成和PCR扩增,获得MIP_1β的cDNA克隆,并测得MIP_1β的cD NA序列为273bp。其核苷酸序列与OleksiPetrenko等报道的序列有98%的同源性,氨基酸同源性为95%。
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