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  • 【期刊】 神经干细胞提取及培养方法的体会

    刊名:天津医药 作者:高维娟 ; 吴增 ; 董贤慧 ; 李媛 ; 靳晓飞 ; 周晓红 关键词:干细胞 ; 神经元 ; 培养基 ; 连续传代 ; 细胞提取 ; 悬浮培养法 机构:承德医学院病理生理学教研室 ; 承德医学院病理生理学教研室 ; 河北中医学院 ; 河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 年份:2018
    摘要:神经干细胞提取及体外培养的方法有多种,但采用不同方法所得到的神经干细胞的活力与稳定性均不同。通过对提取和体外培养SD胎鼠大脑皮质神经干细胞的过程进行思考,总结出神经干细胞的提取步骤、提取要点、培养基的选择依据、接种密度的选择、培养方法、换液方法、传代时机、传代方法,最终获得大量活力和稳定性均较高的神经干细胞,并将其应用于相关方面的基础研究。
  • 【期刊】 缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞损伤的动态观察

    刊名:解剖学报 作者:高维娟 ; 张怡 ; 周晓红 ; 靳晓飞 ; 张颖 关键词:缺氧缺糖/复氧复糖 ; 细胞损伤 ; 动态观察 ; 免疫荧光 ; HT22细胞 机构:河北中医学院河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 ; 河北中医学院河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 年份:2019
    摘要:目的探讨缺氧缺糖/复氧复糖不同时间点小鼠海马神经元细胞系HT22细胞损伤情况。方法取对数生长期的HT22细胞,随机分为6组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R) 0 h组(OGD/R 0 h)、缺氧缺糖/复氧复糖12 h组(OGD/R 12 h)、缺氧缺糖/复氧复糖24 h组(OGD/R 24 h)、缺氧缺糖/复氧复糖48 h组(OGD/R 48 h)、缺氧缺糖/复氧复糖72 h组(OGD/R 72 h)。除正常对照组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6 h后进行复氧复糖。倒置显微镜下观察细胞形态,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤情况,Bax、Bcl-2免疫荧光染色检测细胞凋亡情况。结果正常组HT22细胞呈两极或多极,突起明显,突起之间相互交织成网状,细胞膜光滑且完整,胞体折光性强,OGD/R各组细胞胞体轴突减少,细胞皱缩,胞质凝聚。与正常组比较,OGD/R各组细胞存活率均显著降低(P<0.05),OGD/R 12 h至OGD/R 24 h达到最低(P<0.05);OGD/R 12 h及OGD/R 24 h组LDH显著升高(P<0.05),OGD/R 0 h、48 h、72 h组均有升高趋势。除OGD/R 0 h组和OGD/R 72 h组外,OGD/R各组Bax/Bcl-2比值均较正常组显著升高(P<0.05),峰值出现于OGD/R 24 h。结论缺氧缺糖/复氧复糖细胞损伤是一个复杂的动态过程,随着复氧复糖时间的延长,细胞损伤不断加重,24 h达到顶峰,随后细胞损伤情况逐渐缓解。
  • 【期刊】 补肾活血方对血管性痴呆大鼠海马BDNF mRNA及受体TrkB mRNA表达的影响

    刊名:中国中西医结合杂志 作者:高维娟 ; 于文涛 ; 方朝义 ; 张一昕 ; 吴中秋 关键词:补肾活血方 ; 血管性痴呆 ; 脑源性神经生长因子 ; 酪氨酸蛋白激酶B ; 超微结构 机构:河北中医学院基础医学院中医诊断学教研室 ; 河北中医学院基础医学院中医诊断学教研室 ; 河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 ; 河北中医学院基础医学院病理学教研室 ; 河北中医学院药学院临床中药学教研室 ; 河北中医学院科技处 年份:2017
    摘要:目的探讨补肾活血方对血管性痴呆(VD)大鼠脑海马神经元保护机制。方法 70只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾活血高剂量组、补肾活血低剂量组、尼莫地平对照组,每组14只,采用两血管阻断法制备大鼠VD模型,补肾活血高剂量组、低剂量组分别以10.14、5.07 g生药/kg灌服补肾活血方,尼莫地平对照组以11.06 mg/kg灌服尼莫地平,给药30天后,检测各组大鼠水迷宫法行为学、脑海马神经元超微结构及海马组织BDNF mRNA和Trk B mRNA蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠空间学习记忆能力与探索能力下降,表现为逃避潜伏期明显延长,穿越原平台次数及在原平台停留时间均明显减少(P<0.01),海马神经元BDNF mRNA和Tr KB mRNA及蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01),脑海马神经元超微结构明显受损;与模型组比较,补肾活血高、低剂量组大鼠空间学习记忆能力与探索能力明显改善,表现为逃避潜伏期明显缩短,穿越原平台次数及在原平台停留时间均明显增加(P<0.05,P<0.01),海马神经元BDNF mRNA及受体Trk B mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),改善脑海马神经元超微结构。结论补肾活血方可提高脑海马神经元BDNF及受体Trk B表达,保护脑海马神经元,改善VD大鼠学习与记忆能力。
  • 【期刊】 淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默病转基因模型小鼠大脑皮质DMT1表达的影响

    刊名:《重庆医学》 作者:高维娟 ; 董贤慧 ; 贺小平 ; 崔志超 ; 柴锡庆 ; 赵家晴 关键词:阿尔茨海默病 ; 转基因动物模型 ; 小鼠 ; 淫羊藿 ; 黄芪 ; 葛根 ; 二价金属离子转运蛋白1 机构:承德医学院解剖教研室 ; 承德医学院解剖教研室 ; 河北化工医药职业技术学院制药工程系 ; 河北中医学院心脑血管病中医药防治重点实验室 ; 中国人民解放军第266医院骨科 年份:2016
    摘要:目的 探讨淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默症(AD)APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠模型大脑皮质二价金属离子转运蛋白1(DMT1)表达的影响。方法 将APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠60只,分为模型组、淫羊藿组、黄芪组、葛根组、复方组、去铁胺(DFO)组,C57BL/6J小鼠作为健康对照组。用药结束后,取各组小鼠脑组织,分别采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠大脑皮质DMT1的表达情况。结果 免疫组织化学结果显示:阴性对照未见DMT1阳性细胞。与健康对照组相比,模型组DMT1的表达增高;与模型组相比,复方组和DFO组DMT1的表达降低(P〈0.05);DFO组与复方组DMT1的表达无明显差异。RT-PCR结果、Western blot结果与免疫组织化学结果相一致。结论淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方可以下调AD模型小鼠大脑皮质DMT1的表达,从而抑制小鼠脑铁超载,缓解铁超载带来的中枢神经系统功能衰退。
  • 【期刊】 升麻苷H-1利用鼻腔嗅觉区鼻-脑通道进行鼻脑靶向给药的可行性

    刊名:中国组织工程研究 作者:高维娟 ; 武密山 ; 赵素芝 ; 王茹 ; 韩红伟 ; 师旭亮 关键词:升麻属 ; 投药,鼻内 ; 药代动力学 ; 组织工程 ; 实验动物 ; 心肺损伤与修复动物模型 ; 升麻苷H-1 ; 鼻腔给药 ; 脑靶向归经 ; 示踪剂 ; 定量分布 ; 国家自然科学基金 机构:河北中医学院基础医学院方剂学教研室 ; 河北中医学院基础医学院方剂学教研室 ; 石家庄市长安区胜北社区卫生服务中心 ; 河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 年份:2016
    摘要:背景:近些年研究表明,鼻腔给药作为脑靶向给药的途径之一,可有效使通过其他给药途径不易透过血脑屏障的药物绕过血脑屏障,靶向递送到脑部,为治疗中枢神经系统疾病提供一种极有发展前景的给药途径。目的:研究大鼠鼻腔给药及静脉注射升麻苷H-1的药代动力学和脑靶向性归经的组织分布特性,探索升麻苷H-1利用鼻腔嗅觉区的鼻-脑通道进行鼻脑靶向给药的可行性。方法:鼻腔给药及静脉注射给予升麻苷H-1后,检测各时间点血浆和主要的归经组织器官(肺、脾、胃、大肠、肝、肾、脑、大脑、小脑、脑脊液、嗅球、嗅区等)药物浓度,绘制药-时曲线,用DAS程序拟合房室模型并计算药代动力学参数。结果与结论:1升麻苷H-1吸收迅速,分布广泛。在主要的归经器官中,肺、脑药物浓度分布均远高于其他脏器组织。2升麻苷H-1鼻腔给药后经以下吸收通路直接转运入脑:鼻腔嗅黏膜吸收进入蛛网膜下腔的嗅球,然后相继进入嗅区、脑脊液大脑、小脑等部位,嗅球是药物分子经鼻腔入脑的必经之路。3与静脉注射给药相比,升麻苷H-1鼻腔给药具有明显的肺、脑靶向性。
  • 【期刊】 升麻苷H-1对脑缺血大鼠纹状体氨基酸类神经递质含量的影响

    刊名:《中国病理生理杂志》 作者:高维娟 ; 武密山 ; 赵素芝 ; 王茹 ; 韩红伟 ; 师旭亮 关键词:脑缺血 ; 升麻苷H-1 ; 微透析 ; 天门冬氨酸 ; 谷氨酸 ; 甘氨酸 ; γ-氨基丁酸 机构:河北中医学院基础医学院方剂学教研室 ; 河北中医学院基础医学院方剂学教研室 ; 石家庄市长安区胜北社区卫生服务中心 ; 河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 年份:2016
    摘要:目的:研究脑缺血大鼠脑纹状体区域细胞外液中氨基酸类神经递质的表达变化,以探讨升麻苷H-1神经保护作用的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组、升麻苷H-1高、中、低剂量组和金纳多组。用线栓法造成右侧大脑中动脉闭塞(MCAO),建立局灶脑缺血模型,假手术组和脑缺血组分别给予生理盐水腹腔注射,升麻苷H-1高、中、低剂量组和金纳多组分别给予不同剂量的药物腹腔注射,每天1次,连续7 d。采用脑微透析技术在大鼠脑纹状体区域内进行微透析活体采样,将微透析液注入高效液相-电化学检测器,检测样品中谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量。结果:与假手术组相比,脑缺血组的兴奋性氨基酸Glu和Asp在脑缺血后2 h浓度升高(P〈0.05)。升麻苷H-1高剂量组、金纳多组分别与脑缺血组相比,Glu和Asp在脑缺血后2 h显著降低(P〈0.05);升麻苷H-1低、中剂量组分别与脑缺血组相比,Glu和Asp在脑缺血后2 h没有显著降低(P〉0.05)。与假手术组相比,脑缺血组的抑制性氨基酸神经递质GABA和Gly在脑缺血后3 h浓度降低(P〈0.05)。升麻苷H-1高剂量组、金纳多组分别与脑缺血组相比,GABA和Gly在脑缺血后3 h显著升高(P〈0.05);升麻苷H-1低、中剂量组分别与脑缺血组相比,GABA和Gly在脑缺血后3 h没有显著升高。结论:升麻苷H-1可以抑制脑缺血时兴奋性氨基酸的过度释放,并增加抑制性氨基酸的浓度。升麻苷H-1不仅能透过血脑屏障,同时可调节脑缺血兴奋性氨基酸神经递质的功能紊乱,可能对缺血脑组织神经元有一定的保护作用。
  • 【期刊】 DDIT4对脑缺血再灌注损伤中自噬的调控作用

    刊名:中国病理生理杂志 作者:高维娟 ; 张怡 关键词:DNA损伤诱导转录物4 ; 脑缺血再灌注损伤 ; 自噬 机构:河北中医学院河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 ; 河北中医学院河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 年份:2018
    摘要:<正>脑卒中(stroke)是危害人类健康与生命的常见病和多发病,是造成我国居民死亡的首位原因~([1]),其中缺血性脑卒中(ischemia stroke)的发病率及致死致残率更是居高不下,约占全部脑血管病的60%~80%~([2])。脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)是缺血性脑卒中的重要病理生理
  • 【期刊】 从方剂配伍理论看河间学派传承脉络

    刊名:河北中医 作者:高维娟 ; 周雨慧 ; 李晓宁 ; 武博文 ; 武密山 ; 董尚朴 ; 郭金栋 ; 孟云辉 关键词:中医流派 ; 方剂 ; 中药配伍 机构:河北中医学院基础医学院方剂学教研室 ; 河北中医学院基础医学院方剂学教研室 ; 河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 年份:2018
    摘要:目的河间学派是形成于金元时期以刘完素为代表的中医学流派之一,经其门人后学的不断丰富发展,理论体系逐渐完善,成为中医学七大流派之一。河间学派虽传承久远,门人弟子众多,脉络庞大,但从方剂配伍理论出发研究其传承脉络的文献记载尚少。本研究旨在通过对河间学派方剂配伍理论进行梳理和分析,阐述其学术思想、用药配伍理论,进而解读河间学派的传承脉络、金元时期的医学争鸣,从而丰富方剂配伍理论,为河间学派传承研究提供更多的理论支撑。
  • 【期刊】 γ-分泌酶抑制剂对脑缺血大鼠神经干细胞移植后神经保护作用

    刊名:解剖学报 作者:高维娟 ; 刘宗秀 ; 张紫微 ; 周晓红 ; 成媛 关键词:脑缺血 ; 神经干细胞移植 ; DAPT ; 神经保护 ; 免疫荧光 ; 大鼠 机构:承德医学院病理生理学教研室 ; 承德医学院病理生理学教研室 ; 河北中医学院河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室 年份:2019
    摘要:目的探讨γ-分泌酶抑制剂(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)对脑缺血大鼠神经干细胞(NSCs)移植后的神经保护作用。方法 SD大鼠33只,脑缺血模型制造成功后,随机平均分为3组:模型组、神经干细胞移植组(移植组)、DAPT+移植组。另假手术组11只仅在麻醉状态下分离暴露血管。NSCs移植后7 d观察各组大鼠神经行为学改变; TTC染色观察脑梗死体积;尼氏染色观察脑组织病理形态学变化;免疫荧光双标检测Brd U/神经元核抗原(Neu N)阳性细胞表达。结果假手术组神经功能学评分为零,无脑梗死灶,细胞形态完好,尼氏小体丰富,Brd U/Neu N阳性细胞表达阴性;与假手术组相比,模型组神经功能学评分增加,有明显神经功能缺损症状,可见明显脑梗死灶,神经细胞排列紊乱,可见核固缩,尼氏小体稀少,存活神经元数量显著减少(P<0. 05),有少量Brd U/Neu N阳性细胞表达(P<0. 05);与模型组比较,移植组和DAPT+移植组都有不同程度神经功能评分减低,脑梗死体积缩小,神经细胞存活数量增加(P<0. 05),Brd U/Neu N阳性细胞表达增多(P<0. 05),以DAPT+移植组各项指标恢复最为明显。结论 DAPT能够促进移植的NSCs向神经元分化,对脑缺血大鼠神经干细胞移植后有神经保护作用。
  • 【期刊】 黄芪甲苷通过激活自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡

    刊名:北京中医药大学学报 作者:高维娟 ; 靳晓飞 ; 周晓红 ; 武密山 ; 张颖 ; 赵艳萌 ; 李媛 ; 吴增 关键词:黄芪甲苷 ; 细胞自噬 ; 细胞凋亡 ; 缺氧缺糖/复氧复糖 机构:承德医学院病理生理学教研室 ; 承德医学院病理生理学教研室 ; 河北中医学院 ; 河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 ; 承德医学院病理生理学教研室 ; 河北中医学院 ; 河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 年份:2017
    摘要:目的 研究黄芪甲苷通过激活细胞自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导PC12细胞凋亡的作用.方法 取对数生长期的PC12细胞,随机分为7组:正常对照组、模型组、溶媒组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组、自噬激活剂组.除正常对照组外,其余各组剥夺氧、糖3 h后再复氧、复糖12 h,并于复氧、复糖的同时给予相应药物处理.用透射电镜观察自噬小体的变化,Western blot检测LC3-II、Beclin1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达,流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡.结果 与正常对照组相比,模型组出现典型的自噬小体,LC3-II、Beclin1表达均增多(P<0.05),同时Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数也升高(P<0.05).与模型组相比,黄芪甲苷组、自噬激活剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达均增多(P<0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数均下降(P<0.05);而自噬抑制剂组自噬小体数量、LC3-II 和Beclin1表达减少(P<0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数升高(P<0.05);溶媒组与模型组之间无显著差异(P>0.05).与黄芪甲苷组相比,黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组自噬小体数量、LC3-II 和Beclin1表达均减少(P<0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数均升高(P<0.05).结论 黄芪甲苷可通过激活细胞自噬而抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡,从而发挥神经保护作用.
  • 【期刊】 Bcl-2抑制剂对黄芪注射液降低缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的影响

    刊名:《中国病理生理杂志》 作者:高维娟 ; 董雅洁 ; 钱涛 ; 卢锴锋 ; 朱炎杰 ; 谢亚芹 关键词:海马神经元 ; 黄芪注射液 ; Bcl-2抑制剂 ; 缺氧缺糖/复氧复糖 ; 细胞凋亡 ; Caspase-3 机构:承德医学院病理生理学教研室 ; 承德医学院病理生理学教研室 ; 河北中医学院 ; 河北省人民医院 年份:2016
    摘要:目的:观察Bcl-2抑制剂对黄芪注射液降低缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的影响。方法:取体外原代培养8 d的海马神经元,随机分为6组:正常对照组、模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、黄芪注射液组、黄芪注射液溶剂(无菌去离子水)对照组、Bcl-2抑制剂组和Bcl-2抑制剂+黄芪注射液组。除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5 h再复氧复糖,各组均于复氧复糖后24 h进行指标检测:采用细胞免疫化学染色法观察细胞形态和caspase-3阳性细胞率,Western blotting法检测海马神经元Bcl-2和cleaved caspase-3蛋白的表达,RTPCR法检测海马神经元caspase-3 mRNA的表达。结果:与正常对照组相比,模型组细胞caspase-3阳性率、Bcl-2、cleaved caspase-3蛋白及caspase-3 mRNA表达均明显增强(P〈0.05);与模型组相比,黄芪注射液组Bcl-2表达明显增加,细胞caspase-3阳性率、cleaved caspase-3蛋白及caspase-3 mRNA表达均明显降低(P〈0.05);而黄芪注射液溶剂对照组、Bcl-2抑制剂组及Bcl-2抑制剂+黄芪注射液组则无明显差异;黄芪注射液溶剂对照组Bcl-2表达较正常对照组无明显变化,而Bcl-2抑制剂组及Bcl-2抑制剂+黄芪注射液组显著下降(P〈0.05)。结论:Bcl-2抑制剂可对抗黄芪注射液降低缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的作用,黄芪注射液通过Bcl-2发挥对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的抑制作用。
  • 【期刊】 升麻苷H-1利用鼻腔嗅觉区鼻-脑通道进行鼻脑靶向给药的可行性  

    刊名:《中国组织工程研究》 作者:高维娟 ; 武密山 ; 赵素芝 ; 王茹 ; 韩红伟 ; 师旭亮 关键词:升麻属 ; 投药 ; 鼻内 ; 药代动力学 ; 组织工程 ; 实验动物 ; 心肺损伤与修复动物模型 ; 升麻苷H-1 ; 鼻腔给药 ; 脑靶向归经 ; 示踪剂 ; 定量分布 ; 国家自然科学基金 机构:河北中医学院基础医学院方剂学教研室 ; 河北中医学院基础医学院方剂学教研室 ; 石家庄市长安区胜北社区卫生服务中心 ; 河北省心脑血管病中医药防治重点实验室 年份:2016
    摘要:背景:近些年研究表明,鼻腔给药作为脑靶向给药的途径之一,可有效使通过其他给药途径不易透过血脑屏障的药物绕过血脑屏障,靶向递送到脑部,为治疗中枢神经系统疾病提供一种极有发展前景的给药途径。目的:研究大鼠鼻腔给药及静脉注射升麻苷H-1的药代动力学和脑靶向性归经的组织分布特性,探索升麻苷H-1利用鼻腔嗅觉区的鼻-脑通道进行鼻脑靶向给药的可行性。方法:鼻腔给药及静脉注射给予升麻苷H-1后,检测各时间点血浆和主要的归经组织器官(肺、脾、胃、大肠、肝、肾、脑、大脑、小脑、脑脊液、嗅球、嗅区等)药物浓度,绘制药-时曲线,用DAS程序拟合房室模型并计算药代动力学参数。结果与结论:①升麻苷H-1吸收迅速,分布广泛。在主要的归经器官中,肺、脑药物浓度分布均远高于其他脏器组织。②升麻苷H-1鼻腔给药后经以下吸收通路直接转运入脑:鼻腔嗅黏膜吸收进入蛛网膜下腔的嗅球,然后相继进入嗅区、脑脊液大脑、小脑等部位,嗅球是药物分子经鼻腔入脑的必经之路。③与静脉注射给药相比,升麻苷H-1鼻腔给药具有明显的肺、脑靶向性。