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  • 【期刊】 随机突变的两阶段退化系统视情维修建模

    刊名:哈尔滨工业大学学报 作者:周炳海 ; 陶红玉 ; 綦法群 关键词:随机突变 ; 视情维护 ; gamma过程 ; Poisson过程 ; 随机退化 ; 两阶段退化 机构:同济大学机械与能源工程学院 ; 同济大学机械与能源工程学院 年份:2016
    摘要:为深入研究系统两阶段随机退化及环境变化对退化过程的影响,构建两阶段退化模型.将系统的退化过程分为退化点的产生与退化点的生长两个阶段,分别采用非齐次Poisson过程和非定态Gamma过程进行建模.引入环境影响因子,研究环境变化对系统退化过程的影响,建立带随机突变的两阶段退化模型,对视情维修进行建模研究.实验分析单阶段与两阶段退化模型在不同环境影响因子下,系统期望成本与检测间隔时间之间的关系以及寿命分布.结果表明,提出的建模方法对解决随机退化系统维修决策问题有效、实用.
  • 【期刊】 鸭疫里氏杆菌转座子随机突变库的构建

    刊名:中国兽医科学 作者:倪欣涛 ; 卢凤英 ; 苗双 ; 朱寅玉 ; 邢林林 ; 俞慧 ; 祁晶晶 ; 王桂军 ; 胡青海 关键词:鸭疫里氏杆菌 ; 转座子随机突变库 ; 接合转导 机构:安徽农业大学动物科技学院 ; 安徽农业大学动物科技学院 ; 中国农业科学院上海兽医研究所 年份:2014
    摘要:通过接合转导的方法构建鸭疫里氏杆菌Yb2和CH3株的Tn4351转座子突变库,以便筛选和鉴定鸭疫里氏杆菌的功能基因。先将携带质粒pEP4351(含Tn4351转座子序列)的大肠杆菌BW19851(pEP4351)作为供体,与受体菌鸭疫里氏杆菌强毒株Yb2或CH3株进行接合转导,使质粒pEP4351导入Yb2或CH3株细菌内,进而转座子Tn4351随机插入鸭疫里氏杆菌的基因组中,然后用含红霉素和卡那霉素的胰酶大豆琼脂平板进行阳性接合子的筛选。用PCR扩增鸭疫里氏杆菌16S rRNA基因和红霉素抗性基因EmF进行转座子插入突变株的鉴定,最终成功地构建了鸭疫里氏杆菌Yb2株和CH3株各包含3 100株和2 520株突变株的Tn4351转座子随机突变库,接合转导效率分别为1.7×10-6和3.9×10-6。转座子随机突变库的构建为下一步根据突变株表型的变异来筛选和鉴定鸭疫里氏杆菌的毒力相关等基因奠定了基础。
  • 【期刊】 基于随机突变的员工反生产行为定性模拟研究

    刊名:管理科学学报 作者:赵旭 ; 胡斌 关键词:反生产行为 ; 随机突变理论 ; 定性模拟 ; 决策支持 机构:华中科技大学管理学院 ; 华中科技大学管理学院 ; 三峡大学经济与管理学院 年份:2016
    摘要:反生产行为作为影响员工行为绩效和组织稳定性的关键因素,已成为当前企业最为关切的现实问题之一.结合以往员工反生产行为的相关研究以及在管理现实中凸显的突变特征,在考虑人的心理行为扰动的基础上,从随机突变理论的全新视角构建了员工反生产行为随机尖点突变模型,并分析了反生产行为的非线性演化过程.在运用Cuspfit方法验证突变模型的合理性并进行参数估计后,引入定性模拟理论,将静态严格的随机突变模型转化为能解决模糊的、不确定性的问题的半定性突变模拟模型.最后在Matlab平台上实现该模拟系统,通过虚拟实验对中国某OEM企业面临的员工反生产行为困局进行动态分析.实验结果从企业科学管理模式、员工甄选及情绪管理、反生产行为的危害控制和补救措施等方面为组织反生产行为管理问题提供决策支持.
  • 【期刊】 抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇纳米抗体随机突变与筛选

    刊名:食品科学 作者:吴红静 ; 曹冬梅 ; 许杨 ; 付金衡 ; 涂追 关键词:纳米抗体 ; 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 ; 易错聚合酶链式反应 ; 噬菌体展示 机构:南昌大学食品科学与技术国家重点实验室 ; 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室 ; 南昌大学科学技术学院 ; 南昌大学中德联合研究院 年份:2017
    摘要:采用易错聚合酶链式反应技术,对来源于天然纳米抗体文库的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)纳米抗体进行随机突变,通过优化和比较突变条件,构建了突变分布均匀的突变文库。噬菌体展示技术对突变文库进行了6轮筛选,获得了8种突变序列,其检测信号为野生型2.1倍。多序列比对及三维结构建模分析表明,突变序列的突变位点集中于互补决定区与框架区连接的区域,并且部分序列出现了可以形成二硫键的氨基酸残基。研究结果为抗DON纳米抗体进一步的深度突变和改造提供了线索,同时可为其他抗小分子纳米抗体的改造提供借鉴。
  • 【期刊】 采用随机突变方法对β-琼胶酶YM01-3活性位点的研究

    刊名:微生物学通报 作者:曲雯雯 ; 吴蕾蕾 ; 周顺 ; 史晓翀 ; 张晓华 关键词:随机突变 ; β-琼胶酶YM01-3 ; 定点突变 机构:中国海洋大学海洋生命学院 ; 中国海洋大学海洋生命学院 ; 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋生态与环境科学功能实验室 年份:2018
    摘要:【背景】琼胶酶是一种多糖水解酶,在保健食品、医药、科研及化妆品等行业极具价值。本实验室发现来源自嗜琼胶卵链菌(Catenovulumagarivorans)的β-琼胶酶YM01-3具有较高的酶活性,在最适条件下的比酶活可达到1.14×10~4U/mg。【目的】探讨不同位点的突变对β-琼胶酶YM01-3酶活力的作用,发现影响其酶活力的新位点。【方法】通过易错PCR在短芽孢杆菌(Bacillus brevis)表达系统中构建随机突变文库,从约10 000个克隆中筛选出227株有效突变体,从中选取80株进行测序。【结果】对突变体序列进行分析和定点突变验证发现,137位和237位氨基酸发生突变后酶活力丧失90%以上。【结论】位于催化腔内的137位和237位氨基酸,对于维持β-琼胶酶YM01-3酶活力具有重要作用。该研究结果为β-琼胶酶的催化机理研究及分子改造提供了借鉴。
  • 【期刊】 多细胞生物起源于一次随机突变

    刊名:《现代物理知识》 作者:高凌云 关键词:随机突变 ; 细胞生命 ; 有丝分裂纺锤体 ; 生物起源 ; 子细胞 ; 俄勒冈大学 ; Oregon ; 普瑞 ; 计算机模拟 ; 基因序列测定 年份:2016
    摘要:早期生命是单细胞的,6亿年前的一次随机突变改变了一个关键蛋白质的功能,使多细胞生物成为可能。在多细胞生命体中,邻近细胞需要相互协调,关键在于有丝分裂纺锤体的定向,使染色体进入子细胞。美国俄勒冈大学(University of Oregon)的普瑞何达(K.Prehoda)与同事利用一种称为先祖蛋白质重建的技术,基于基因序列测定和计算机模拟,跟踪基因的改变。更值得注意的是,单个突变产生如此巨大影响的原因是两个看似不相关的分子间却存在相似之处。
  • 【期刊】 产脂肪酶重组菌SRI-01随机突变及诱导表达条件的研究

    刊名:《中国酿造》 作者:尹金凤 ; 李泓全 ; 吴欣森 关键词:随机突变 ; 产脂肪酶重组菌 ; 诱导表达 ; 脂肪酶活力 ; 条件优化 机构:上海化工研究院有限公司 ; 上海化工研究院有限公司 年份:2018
    摘要:采用大引物全质粒法(MEGAWHOP)随机突变,快速有效地对研究室前期构建的一株脂肪酶重组菌株SRI-01进行分子改造,通过对易错聚合酶链反应(ep-PCR)获得的2300个突变株进行96孔板高通量筛选,得到一株优良突变株SRM08。通过单因素试验,优化诱导前的菌体生物量、诱导剂异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的浓度、CaCl2的浓度、诱导温度。通过比较3种不同破碎缓冲液浓度和缓冲液pH对脂肪酶活力的影响,选择最优的破碎缓冲液。确定突变株SRM08最佳诱导表达条件为菌液生物量OD600nm值为0.7,IPTG的浓度为0.1mmol/L,CaCl2浓度为4mmol/L,诱导温度为25℃,采用5mmol/L磷酸钠缓冲液为破碎缓冲液,pH值为7.0。在此优化条件下,脂肪酶活达到88508U/L,为原重组菌株SRI-01的2.84倍。
  • 【期刊】 甲基对硫磷水解酶的随机突变和分子对接模拟

    刊名:华中农业大学学报 作者:李亚楠 ; 张彦博 ; 胡美英 ; 陈少华 ; 胡振 ; 易欣 ; 林惠花 关键词:随机突变 ; 甲基对硫磷水解酶 ; 毒死蜱 ; 易错PCR ; 同源建模 ; 分子对接 年份:2012
    摘要:甲基对硫磷水解酶(MPH)能高效降解甲基对硫磷,并能够降解杀螟松、乙基对硫磷和毒死蜱,但降解效率依次降低。为提高MPH对毒死蜱的降解活性,采用易错PCR的方法对MPH进行随机突变,筛选到2株突变体A291V和K173R,并对其进行原核表达,结果表明K173R对毒死蜱的降解活性比MPH提高了41.55%。通过同源建模及与毒死蜱的分子对接对酶的结构和功能进行初步分析,结果发现氨基酸残基R72在酶与毒死蜱的结合中起着重要作用。结合口袋和关键氨基酸的变化可最终导致K173R酶活性的提高。
  • 【期刊】 战略联盟竞合行为的随机突变分析与仿真

    刊名:管理学报 作者:徐岩 ; 胡斌 关键词:战略联盟 ; 竞合 ; 演化博弈 ; 随机微分方程 ; 随机突变理论 机构:华中科技大学管理学院 ; 华中科技大学管理学院 年份:2012
    摘要:针对多成员战略联盟在不确定环境下策略的演化过程,借助演化博弈论建立了含有白噪声的随机动力学。利用随机突变理论来分析在不确定性条件下,联盟成员行为(竞争或合作)随着参数的连续变化在整体上发生突变的问题,给出了联盟发生突变的临界集,以此来解释和预测在不确定性环境下,战略联盟发生非计划性解体或者合作失败的突发性问题。对不同场景下的模型进行了数值仿真,结果表明,在临界集附近,联盟集体的行为发生了突变。
  • 【期刊】 团队知识共享行为的随机突变模型及仿真

    刊名:运筹与管理 作者:徐岩 ; 胡斌 ; 杨永清 关键词:团队 ; 知识共享 ; 演化博弈 ; 白噪声 ; 随机突变理论 ; 突变特征 机构:山东工商学院工商管理学院 ; 山东工商学院工商管理学院 ; 华中科技大学管理学院 年份:2013
    摘要:针对团队成员之间的知识共享行为建立一个演化博弈模型,模型中引入监督机制和奖罚机制,并引入白噪声反应博弈过程所受到的随机干扰。借助随机突变理论研究关于团队激励机制、成员自身素质和成员之间交互作用属性参数的连续变化对动力学演化的离散变化的影响即突变性,找到了团队行为发生突变的临界集合。指出演化过程中出现的双模态,反映了团队知识共享行为对外界扰动的敏感性,突跳反映了对参数连续变化的敏感性,而滞后现象反映了管理决策中保持共享行为比治理不共享行为的可靠性。
  • 【论文】 利用纳米抗体CDR3随机突变文库研究抗体结构和功能

    作者:陈姣 关键词:CDR3突变文库 ; 纳米抗体 ; 原核表达 ; 抗原结合活性 ; CDR移植 ; 肽抗体 ; 抗体结构与功能 机构:新疆大学 ; 新疆大学 年份:2018
    摘要:单克隆抗体是治疗性蛋白质中数目最大且发展最快的一组。目前已经有70种抗体药物获得临床用药的批准,2017年抗体药物的市场规模突破了千亿美元。到目前为止,不完全统计结果显示有500种治疗性抗体及其衍生物正在临床试验中,主要集中在癌症治疗和自身免疫性疾病。抗体药物的问世为人类攻克一些重大疾病带来了希望,随着应用的深入,大分子的单克隆抗体由于其自身结构方面的问题,一定程度上限制了它们的应用。这个问题大大激发科学家对抗体改造的热情,尤其是抗体小型化的改造。NBL42为本研究组前期发现的一个仅具有CDR3和两侧框架区的纳米抗体。该抗体对溶菌酶具有较高的特异结合活性和显著的酶抑制活性。分析其序列,发现其CDR3长度为17个氨基酸,框架区的一些氨基酸残基与已知的骆驼源的VHH抗体存在差别。因此,设想将纳米抗体NBL42作为模型,用于抗体结构与功能间联系的研究。本研究的目的主要有两方面:首先,利用NBL42-ΔCDR3随机突变文库分析纳米抗体CDR3区氨基酸的分布情况;其次,采用定点突变和移植的方法验证NBL42框架区能否作为突变文库的通用骨架或者CDR移植的框架;为设计文库和抗体的小型化改造提供借鉴,对今后新型抗体的设计提供一定的实验基础。第一部分利用NBL42-ΔCDR3随机突变文库分析纳米抗体CDR3区氨基酸的分布首先采用重叠PCR技术保留NBL42纳米抗体的框架区(FR3-FR4),对其CDR3区的17个氨基酸按照NNY的突变法则进行随机突变。通过基因合成方法获得NBL42-ΔCDR3随机突变DNA片段。构建NBL42-ΔCDR3随机突变文库,库容为4.8×10~7。随后对突变文库采用两种抗原(溶菌酶和CD47重组蛋白)进行多轮筛选。筛选完成之后,采用多克隆Phage ELISA验证文库的富集良好;分别从筛选的最后两轮中随机挑选100个单克隆进行可溶性表达,最终获得3株抗溶菌酶的纳米抗体。将抗体序列亚克隆至表达载体pET22b(+)上,诱导表达纯化获得抗体蛋白,间接ELISA结果显示3株纳米抗体的亲和力较低。为进一步了解纳米抗体CDR3区氨基酸分布情况,我们对未免疫骆驼VHH的1209159条高通量测序的数据进行分析。CDR3区的长度范围为6-33个氨基酸,分别将不同长度的序列进行频数统计,同时统计每一个位点上氨基酸的种类和频数,计算相应的实际频率,再将实际频率与理论频率进行卡方分析,发现CDR3区中的一些位点具有保守性,这些位点多存在于CDR3区的两端,105和106位上多为丙氨酸、107位的氨基酸多为甘氨酸、天冬氨酸、赖氨酸;108位的氨基酸多为精氨酸、脯氨酸、丙氨酸;115和117位上的酪氨酸。对比NBL42-ΔCDR3随机突变文库的CDR3序列,发现突变文库在以上位点的氨基酸分布与天然文库相比具有较大差异,表明突变文库具有功能性的VHH多样性较低。第二部分采用移植和定点突变的方法分析NBL42的框架区首先将从免疫文库中筛选出来的纳米抗体NBL42的FR3和FR4区作为受体,将结合PD1的纳米抗体VHH H5的CDR3区作为供体,合成NBL42-H5 CDR3重组纳米抗体DNA片段,并连接到pET22b表达载体上,进行表达纯化,获得重组纳米抗体;ELISA方法检测其与PD1的结合特性。结果显示:NBL42-H5CDR3成功构建到pET22b(+),成功表达了NBL42-H5 CDR3重组纳米抗体。ELISA结果表明,移植后的抗体NBL42-H5 CDR3具备了VHH H5部分抗原结合活性。同样的方法选择一个短肽CERX(特异性结合SIRPα的多肽),将它的12氨基酸移植进入NBL42的框架中,组成重组肽抗体,并将目的基因构建于pET22b(+)表达载体上。ELISA结果表明,移植后的抗体NBL42-CERX仍然具有很强的抗原结合活性。我们采用定点突变的方法将NBL42纳米抗体第88位的氨基酸突变,基因由南京金斯瑞生物科技公司合成,将目的片段连接到pET22b(+)表达载体上,进行表达纯化,获得纳米抗体NBL42-C88Y。通过ELISA验证该纳米抗体与溶菌酶的结合活性,结果表明,纳米抗体NBL42-C88Y与溶菌酶的结合活性,结果表明,与NBL42相比,C88Y突变的纳米抗体与溶菌酶的结合能力显著降低。
  • 【期刊】 转座子随机突变芽孢杆菌的研究进展

    刊名:中国生物防治学报 作者:马欣 ; 高学文 关键词:转座子 ; Tn917 ; Tn10 ; mariner ; 芽孢杆菌 机构:运城职业技术学院 ; 运城职业技术学院 年份:2015
    摘要:近年来,随着功能基因组学的发展,转座子随机突变技术因操作简便易行而被广泛应用。某些具有随机转座特性的转座子及其衍生物,已成为发现新基因、克隆功能基因、发掘已知基因的新功能以及研究蛋白功能的有效工具,其中转座子Tn917、Tn10及mariner类家族转座元件已被改造并成功应用于芽孢杆菌突变体库的构建及基因功能的研究中。本文介绍上述3种转座子的结构、转座特点及在芽孢杆菌中的应用,并分析了mariner类家族转座元件的优势及应用前景。
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