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  • 【专利】 一种用于检测胶基型嚼烟细胞毒性的方法

    作者:陆舍铭 ; 管莹 ; 夭建华 ; 李雪梅 ; 高茜 ; 米其利 ; 朱洲海 ; 徐玉琼 年份:2017
    摘要:本发明涉及一种用于检测胶基型嚼烟细胞毒性的方法,属于烟草及烟草制品安全性生物学评价技术领域。该方法包括样品前处理、单细胞悬液的制备、单细胞悬浮液的细胞浓度计算、受试物暴露、孵育受试物、染料孵育、测定吸光值、计算细胞抑制率等步骤。本发明综合考察胶基型嚼烟的溶出方式、暴露途径,建立了胶基型嚼烟样品前处理方法,根据胶基型嚼烟作用靶细胞选取了人口腔角质细胞HOK作为胶基型嚼烟细胞毒性试验检测用细胞,并确定了样品检测剂量,形成了适合胶基型嚼烟的细胞毒性试验检测方法,具有良好的应用前景。
  • 【专利】 一种用于检测胶基型嚼烟对细胞DNA损伤的方法

    作者:陆舍铭 ; 管莹 ; 夭建华 ; 李雪梅 ; 高茜 ; 朱洲海 ; 米其利 ; 徐玉琼 ; 唐萍 年份:2017
    摘要:本发明涉及一种用于检测胶基型嚼烟对细胞DNA损伤的方法,烟草及烟草制品的安全性生物学评价技术领域。该方法包括样品前处理、单细胞悬浮液制备、细胞浓度计算、细胞接种、受试物暴露、收集细胞、细胞固定、封闭、细胞破膜、细胞染色和流式检测与分析等步骤。本发明综合考察了胶基型嚼烟的使用特点和作用方式,建立了全新的样品前处理方法,选取人口腔角质细胞HOK作为试验检测用细胞,并确定了样品检测剂量。样品的有效处理、检测剂量的优化设定以及靶细胞的正确选择,使得本发明方法能够准确有效地检测胶基型嚼烟对细胞DNA损伤的真实影响。
  • 【专利】 一种卷烟烟气对细胞水渗透性影响的检测方法

    作者:陆舍铭 ; 高茜 ; 管莹 ; 曾婉俐 ; 米其利 ; 夭建华 ; 张涛 ; 朱洲海 ; 徐玉琼 年份:2017
    摘要:本发明涉一种卷烟烟气对细胞水渗透性影响的检测方法,属于生物应用技术领域。本发明采用生物化学及细胞学方法,利用BMP6处理细胞,模拟了干燥综合症发生时的细胞微环境,从而研究卷烟烟气对水渗透性的影响,相较于动物实验而言更为简单、高效;在卷烟烟气的捕集上采用了口腔仿生模拟装置,更贴合实际的人抽吸状态;同时采用了高内涵系统,可在不同时间点同时检测多个样品对细胞水渗透性的影响,可快速准确可视的进行多样品检测,为卷烟烟气的功效性评价提供了一个新的快速手段。
  • 【专利】 一种针对电子烟气溶胶水提物的细菌回复突变试验

    摘要:本发明公开了一种针对电子烟气溶胶水提物的细菌回复突变试验。包括样品前处理、受试菌培养、受试菌浓度的确定、S9混合液的配制、受试物的分组、受试物的培养、结果判定等步骤。本发明综合考察了电子烟制品的使用特点和作用方式,建立了全新的电子烟烟雾样品前处理方法(捕集瓶捕集法),并确定了样品检测剂量,形成了适合电子烟气溶胶水提物的细菌回复突变试验方法。样品的有效处理、检测剂量的优化设定,使得本发明方法能够准确有效的检测电子烟气溶胶水提物的遗传毒性。
  • 【专利】 一种针对电子烟气溶胶水提物的体外微核检测方法

    摘要:本发明公开了一种针对电子烟气溶胶水提物的体外微核检测方法。包括样品前处理、单细胞悬浮液制备、细胞浓度计算、细胞接种、加样和受试物分组、孵育受试物、收获细胞、低渗、滴片、染色、微核观察、结果判定等步骤。本发明综合考察了电子烟制品的使用特点和作用方式,建立了全新的样品前处理方法,选取人肺成纤维细胞HPF作为试验检测用细胞,并确定了样品检测剂量。样品的有效处理、检测剂量的优化设定以及靶细胞的正确选择,使得本发明方法能够准确有效的检测电子烟气溶胶水提物对细胞微核率的影响程度,进而确定电子烟制品的遗传毒性。
  • 【专利】 一种用于检测胶基型嚼烟对细胞微核率影响的方法

    作者:陆舍铭 ; 管莹 ; 夭建华 ; 李雪梅 ; 徐玉琼 ; 高茜 ; 米其利 ; 朱洲海 年份:2017
    摘要:本发明涉及一种用于检测胶基型嚼烟对细胞微核率影响的方法,属于烟草及烟草制品安全性生物学评价技术领域。该方法包括样品前处理、单细胞悬液的制备、单细胞悬浮液的细胞浓度计算、细胞接种、加入受试物、收获细胞、低渗、滴片、染色、微核计数、结果判定等步骤。本发明综合考察胶基型嚼烟细的溶出方式、暴露途径和作用方式,建立了胶基型嚼烟样品前处理方法,且根据胶基型嚼烟样品作用靶细胞选取了人口腔角质细胞HOK作为胶基型嚼烟体外微核试验检测用细胞,并确定了样品检测剂量,形成了适合胶基型嚼烟的体外微核试验检测方法,具有良好的应用前景。
  • 【专利】 一种口含型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法

    作者:陆舍铭 ; 高茜 ; 米其利 ; 朱洲海 ; 管莹 ; 徐玉琼 ; 李雪梅 ; 夭建华 年份:2017
    摘要:本发明涉及一种口含型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法,属于生物检测技术领域。该方法首先首先采集志愿者的唾液,并针对口含型产品的使用特点,模拟口含型烟草制品的使用过程,并对唾液总细菌含量进行荧光定量PCR分析,从而考察在使用口含型烟草制品前后唾液总细菌含量的变化,为口含型烟草制品的口腔健康提供参考,对于了解口含型烟草制品对口腔健康的影响有一定的指导意义,可根据检测结果提供抑制有害细菌的产品,起到健康保护的作用。
  • 【专利】 一种胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法

    作者:陆舍铭 ; 高茜 ; 李雪梅 ; 米其利 ; 朱洲海 ; 管莹 ; 徐玉琼 ; 夭建华 年份:2017
    摘要:本发明涉及一种胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法,属于生物检测技术领域。该方法首先采集志愿者的唾液,并针对胶基型产品的使用特点,采用全仿真模拟咀嚼机来模拟胶基型烟草制品的咀嚼过程,不仅考虑了制品溶出物与唾液中细菌的相互作用,还充分模拟了咀嚼过程胶基型制品对细菌的粘附作用,从而使整个变化过程更接近于人的咀嚼,之后对咀嚼过程中唾液中总细菌含量进行荧光定量PCR分析,从而考察在使用胶基型烟草制品前后唾液中的总细菌含量的变化,为胶基型烟草制品的口腔健康提供参考。
  • 【专利】 一种胶基型烟草制品对变形链球菌影响的检测方法

    作者:陆舍铭 ; 夭建华 ; 高茜 ; 徐玉琼 ; 管莹 ; 朱洲海 ; 米其利 ; 李雪梅 年份:2017
    摘要:本发明涉及一种胶基型烟草制品对变形链球菌影响的检测方法,属于生物检测技术领域。该方法首先配制含有变形链球菌的人工唾液,并针对胶基型产品的使用特点,采用全仿真模拟咀嚼机来模拟胶基型烟草制品的咀嚼过程,不仅考虑了制品溶出物与唾液中变形链球菌的相互作用,还充分模拟了咀嚼过程胶基型制品对细菌的粘附作用,从而使整个变化过程更接近于人的咀嚼,之后对咀嚼过程中唾液的变形链球菌含量进行荧光定量PCR分析,从而考察在使用胶基型烟草制品前后唾液中的变形链球菌含量的变化,为胶基型烟草制品的口腔健康提供参考。
  • 【专利】 一种口含型烟草制品对变形链球菌影响的检测方法

    作者:陆舍铭 ; 高茜 ; 管莹 ; 杨柳 ; 米其利 ; 朱洲海 ; 徐玉琼 ; 夭建华 年份:2017
    摘要:本发明涉及一种口含型烟草制品对变形链球菌影响的检测方法,属于生物检测技术领域。该方法首先配制含有变形链球菌的人工唾液,并针对口含型产品的使用特点,采用人工唾液模拟口含型烟草制品的使用过程,并对唾液的变形链球菌含量进行荧光定量PCR分析,从而考察在使用口含型烟草制品前后唾液中的变形链球菌含量的变化,为口含型烟草制品的口腔健康提供参考。本发明可以添加不同含量的变形链球菌,模拟不同人口腔中变形链球菌含量不同的实际情况,从而给予全方位的指导。
  • 【专利】 一种用于检测胶基型嚼烟对细胞脂质氧化影响的方法

    作者:陆舍铭 ; 管莹 ; 高茜 ; 李雪梅 ; 夭建华 ; 米其利 ; 朱洲海 ; 徐玉琼 ; 唐萍 年份:2017
    摘要:本发明涉及一种用于检测胶基型嚼烟对细胞脂质氧化影响的方法,属于烟草及烟草制品生物学效应评价技术领域。该方法包括样品前处理、单细胞悬液的制备、单细胞悬浮液的细胞浓度计算、受试物暴露、收集细胞、样品制备、标准品稀释、样品测定和MDA含量计算十大步骤。本发明综合考察胶基型嚼烟细的溶出方式、暴露途径、作用方式,建立了胶基型嚼烟样品前处理方法,样品的有效处理、检测剂量的优化设定以及靶细胞的正确选择,使得本方法能够准确有效的检测胶基型嚼烟对细胞脂质氧化的影响。
  • 【期刊】 电子烟烟液体外毒理学评价用细胞筛选研究

    刊名:中国烟草学报 作者:陆舍铭 ; 管莹 ; 高茜 ; 李雪梅 ; 徐玉琼 ; 米其利 ; 熊国行 ; 朱洲海 ; 夭建华 关键词:电子烟 ; 电子烟烟液 ; MTT ; Annexin V-FITC/PI ; 细胞毒性 ; 细胞凋亡 ; 细胞增殖 机构:云南中烟工业有限责任公司 ; 云南中烟工业有限责任公司 年份:2018
    摘要:【目的】目前,国内外尚无电子烟制品体外毒理学评价的统一方法,本研究旨在确定适合于电子烟制品体外毒理学评价用细胞。【方法】以人口腔角质细胞(HOK)、人鼻腔上皮细胞(RPMI 2650)、人支气管上皮细胞(Beas-2b)、人肺成纤维上皮细胞(HPF)、人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)为候选细胞,采用细胞毒性法和Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡试验作为评价方法,综合细胞的耐受性、细胞增殖特性及试验操作性选取适合于电子烟体外毒理学评价用细胞。【结果】细胞毒性和细胞凋亡试验结果均显示,不同的受试细胞对相同的样品测试结果定性结果一致,样品间相对定量趋势一致。候选检测用细胞的细胞倍增时间显示,在24 h的测试周期内,RPMI 2650细胞和HPF细胞的增殖较快。【结论】综合细胞的耐受性、细胞增殖特性及试验操作性,建议选取上呼吸道细胞RPMI 2650和下呼吸道细胞HPF为电子烟体外毒理学测试用细胞。
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