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  • 【专利】 一种基于核酸适配体的定量检测溶藻弧菌的方法

    作者:鄢庆枇 ; 郑江 ; 张庆庆 ; 刘慧敏 年份:2017
    摘要:本发明公开了一种基于核酸适配体的定量检测溶藻弧菌的方法,具体步骤如下:合成核酸适配体并标记荧光素;将要检测的溶藻弧菌、已知浓度的溶藻弧菌分别与核酸适配体混合;混合均匀后,将溶藻弧菌和检测试剂结合;结合完毕后,离心并弃去上清液,用洗涤缓冲液洗涤菌沉淀;重复上述步骤;用洗涤缓冲液重悬菌沉淀,将缓冲液转移至新管中;荧光法测定新管中溶液的荧光值;根据荧光值进行线性拟合,得出相应的标准曲线及拟合方程,再根据标准曲线计算出要检测的溶藻弧菌浓度。本发明提供一种具有简便快速、识别性强、重复性好和准确度高等优点的对溶藻弧菌及其灭活菌的定量检测方法。
  • 【专利】 一种刺激隐核虫趋化性的测定方法

    作者:鄢庆枇 ; 邹峰 ; 苏永全 ; 覃映雪 ; 马英 ; 徐晓津 年份:2013
    摘要:本发明公开了一种刺激隐核虫趋化性的测定方法,它包括以下步骤:(1)用干净载玻片为载体,在载玻片的一侧滴加40-60μl含有刺激隐核虫幼虫的海水液滴,在另一侧滴加相同体积的测试溶液,海水液滴与测试溶液之间距离为1-2cm;(2)从海水液滴向测试溶液方向用干净牙签轻轻地划线,使两侧的液滴连通;(3)在温度25-28℃的环境下,静置20—40分钟后,在显微镜下观察运动到测试溶液中刺激隐核虫幼虫的数量并计算趋化率。由于本发明应用载玻片来检测刺激隐核虫的趋化性,比国外习用的平皿打孔法、96孔板法操作简便。采用载玻片检测刺激隐核虫趋化性技术,节约了大量的时间以及试剂、耗材。
  • 【会议】 溶藻弧菌胁迫培养对粘附大黄鱼表皮粘液的影响

    作者:鄢庆枇 ; 孔文迪 ; 覃映雪 ; 王军 ; 苏永全 关键词:溶藻弧菌 ; 大黄鱼 ; 胁迫培养 ; 粘附 机构:集美大学水产学院福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室 ; 集美大学水产学院福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室 ; 厦门大学海洋与地球学院 年份:2013
    摘要:从集美海湾采集海水,分离、纯化并质谱鉴定到5株溶藻弧菌株ND1001-1005,通过攻毒实验筛选到强毒株ND1001。为了解胁迫培养条件下溶藻弧菌对大黄鱼表皮粘液的粘附特性,对ND1001进行不同理化条件下的胁迫培养并玻片粘附检测,结果表明初次胁迫培养后的溶藻弧菌粘附量无显著下降;二次胁迫培养后,pH5.0,C(Na+)2‰、5‰,C(Na+)60‰,C(Cu2+)50.0 mg/L,C(Pb2+)100.0 mg/L培养下,溶藻弧菌粘附量显著降低(P<0.05),且在C(Na+)2‰条件下,溶藻弧菌转入休眠;三次胁迫培养后除pH 9、高温条件下溶藻弧菌粘附量无显著变化外,其余处理组粘附量都显著降低。结果表明胁迫培养能显著降低溶藻弧菌对大黄鱼表皮粘液的粘附作用。
  • 【期刊】 市售三种食用贝类可培养细菌多样性研究

    刊名:集美大学学报(自然科学版) 作者:鄢庆枇 ; 张媛 ; 徐晓津 ; 黄力行 ; 赵玲敏 关键词:牡蛎 ; 缢蛏 ; 疣荔枝螺 ; 细菌多样性 ; 致病性 机构:集美大学水产学院农业部东海海水健康养殖重点实验室 ; 集美大学水产学院农业部东海海水健康养殖重点实验室 ; 福建省天马科技股份有限公司福建省特种水产饲料重点实验室 年份:2018
    摘要:为了解厦门市售三种食用贝类中可培养细菌的多样性,用自制培养基培养牡蛎、缢蛏、疣荔枝螺样品中的细菌,并根据16S rDNA测序结果,对所分离的细菌进行鉴定并进行系统发育分析。研究结果显示:从牡蛎中分离得到的35株细菌分属14个种,从缢蛏中分离得到的32株细菌分属16个种,从疣荔枝螺中分离得到的31株细菌分属7个种。结果表明市售牡蛎、缢蛏、疣荔枝螺体内含有较为丰富的细菌种类,而且分离得到的细菌(如解鸟氨酸拉乌尔菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等)大多数具有致病性,对食用人群具有潜在威胁,不建议直接生食或食用加工不当的贝类产品。
  • 【期刊】 德氏乳杆菌保加利亚亚种培养基及培养条件的优化

    刊名:集美大学学报(自然科学版) 作者:鄢庆枇 ; 姜庆玲 ; 丛美楠 ; 陈海生 ; 黄颖渟 关键词:德氏乳杆菌保加利亚亚种 ; 培养基 ; 培养条件 ; 优化 ; 响应面法 机构:集美大学水产学院 ; 集美大学水产学院 ; 农业部东海海水健康养殖重点实验室 年份:2016
    摘要:为了降低德氏乳杆菌保加利亚亚种的工业生产成本和提高发酵液的菌浓度,通过单因素试验和旋转中心组合设计(central composite design,CCD)相结合的方法优化培养基的组分和培养条件.优化后的培养基成分为:葡萄糖30 g/L、豆粕28 g/L、玉米粉14 g/L、乳清粉28 g/L、K2 HPO4 3.0 g/L、柠檬酸三铵2.5 g/L、乙酸钠5g/L、吐温-80 1.25 mL/L、MgSO4·7H2O 0.2g/L、MnSO4·4H2O 0.0625 g/L;培养条件为:初始pH值7.1,温度37℃,接种量4%(体积分数),静置培养.经优化后活菌数达到6.07×109CFU/mL,明显高于原MRS培养基(5.8×108 CFU/mL),且其成本较原MRS培养基的成本降低了4000元/t.
  • 【期刊】 氟苯尼考在花鲈体内的代谢及残留消除规律

    刊名:《中国渔业质量与标准》 作者:鄢庆枇 ; 黄聚杰 ; 林茂 ; 李忠琴 ; 李江森 关键词:氟苯尼考 ; 花鲈 ; 药代动力学 ; 残留 ; 休药期 机构:集美大学水产学院 ; 集美大学水产学院 ; 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心 年份:2016
    摘要:为了解氟苯尼考在花鲈(Lateolabrax japonicus)体内的代谢动力学特征和残留消除规律,利用高效液相色谱法检测氟苯尼考混饲口灌给药后在花鲈血浆、肌肉、肝和肾等样品中的时间-浓度变化。在代谢动力学研究中,将20 mg/kg氟苯尼考单次混饲口灌给药于花鲈后,获得48 h内的药时数据,利用DAS和Win Nonlin软件进行比较分析。结果表明,不同药代动力学分析软件或者不同权重系数所获得的房室参数值有较大差异,特别是消除相半衰期(T_(1/2β));而非房室参数值则比较接近。其中DAS软件非房室模型分析氟苯尼考在花鲈血浆中的药代动力学参数显示,药时曲线下面积(AUC_(0—∞))为257.591 mg/(L·h),表观分布容积(Vz/F)为1.401 L/kg,平均滞留时间(MRT_(0—∞))和消除半衰期(T_(1/2z))分别为18.505和12.508 h,达峰浓度(C_(max))和达峰时间(T_(max))分别为18.356μg/mL和3 h。在残留消除研究中,氟苯尼考以60 mg/kg的高剂量单次给药后,采集30 d内的药时数据,利用WT程序计算的结果显示,氟苯尼考在花鲈肌肉、肝、肾和血浆中的理论休药期分别为6.54、8.69、8.30和5.89 d。研究结果为氟苯尼考在花鲈养殖中的用药方案和休药期的制定提供理论依据。
  • 【会议】 病原性嗜水气单胞菌黏附特性及黏附分子机制的研究

    作者:鄢庆枇 ; 林桂芳 ; 覃映雪 关键词:嗜水气单胞菌 ; 黏附 ; 转座突变 ; Tail-PCR ; 分子机制 机构:集美大学水产学院,农业部东海海水健康养殖重点实验室(集美大学) ; 集美大学水产学院,农业部东海海水健康养殖重点实验室(集美大学) 年份:2013
    摘要:本文采用改良后的间接ELISA技术研究嗜水气单胞菌黏附鳗鲡表皮黏液的黏附特性,并采用转座突变技术研究了嗜水气单胞菌黏附的分子机制。研究结果表明菌浓度、孵育时间、温度、pH值、阳离子及碳源等因子对嗜水气单胞菌的黏附均有较大影响。在此基础上,采用转座子标签技术,构建了嗜水气单胞菌黏附特性突变库,并从中筛选到3株成黏附特性突变的菌株。采用Tail-PCR技术获取突变株中转座子插入位点侧翼的序列,结果发现嗜水气单胞菌鞭毛蛋白基因FlgC、FlgN及CobQ/CobB/MinD/ParA蛋白家族基因突变后该菌的黏附能力均显著降低,说明嗜水气单胞菌黏附的分子机制可能与这些基因密切相关。
  • 【期刊】 大黄鱼冰鲜杂鱼饲料中细菌多样性研究

    刊名:南方水产科学 作者:鄢庆枇 ; 王勇忠 ; 徐晓津 ; 熊何健 ; 邓霏 ; 马英 关键词:大黄鱼 ; 养殖饲料 ; 细菌 ; 16S rRNA基因 ; RFLP 机构:集美大学水产学院 ; 集美大学水产学院 ; 农业部东海海水健康养殖重点实验室 ; 集美大学生物工程学院 年份:2014
    摘要:为研究大黄鱼(Larimichthys crocea)冰鲜杂鱼饲料中细菌的多样性,用细菌通用引物构建了细菌16S rRNA基因克隆文库。从文库中随机挑选125个克隆子进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,得到82个不同的RFLP带型。对部分代表性克隆子进行测序,得到23条有效序列。序列同源性分析和系统进化分析结果表明,大黄鱼冰鲜杂鱼饲料中细菌主要分为3大类群,其中γ-变形菌纲(γ-Proteobacteria)细菌占据明显地优势地位,约占所分析克隆子数的84.4%;其次是黄杆菌纲(Flavobacteria)细菌,约占10.9%;还有少量的梭杆菌纲(Fusobacteria)细菌,约占4.7%。γ-变形菌纲细菌中以嗜冷杆菌(Psychrobacter sp.)最多,其次是发光杆菌(Photobacterium)。
  • 【期刊】 中国沿海光裸方格星虫6个地理群体遗传多样性分析

    刊名:水产学报 作者:鄢庆枇 ; 宋素霞 ; 丁少雄 ; 覃映雪 关键词:光裸方格星虫 ; 遗传多样性 ; 群体结构 ; 系统发育 机构:集美大学水产学院 ; 集美大学水产学院 ; 农业部东海海水健康养殖重点实验室 ; 厦门大学海洋环境科学国家重点实验室 年份:2017
    摘要:为科学保护和开发我国光裸方格星虫自然资源,本研究以cytb基因全长为分子标记分析了山东烟台、福建古雷、香港、海南儋州、海南陵水、广西东兴6个光裸方格星虫群体的遗传多样性.结果显示,203个个体共检出128个单倍型,299个多态位点,核苷酸多样性和单倍型多样性分别为0.0488和0.9773,且变异主要来自群体间(88.4%).6个光裸方格星虫群体间遗传分化指数(Fst)分析结果显示,南方5个群体间Fst<0.15,基本无分化或呈低度分化;而烟台与南方5个群体间的固定指数都很大,Fst>0.15,群体间呈高度分化.中性检验(Fu"s Fs、Tajima"s D)结果为负值,北方群体和南方群体的核苷酸错配分布图为单峰,单倍型网络分布图为以主单倍型为中心的放射状结构.用203条cytb序列构建的系统发育树显示,烟台群体聚为一个进化支,南方群体聚为一个进化支.研究表明,中国沿海的光裸方格星虫群体在历史上经历过大规模群体扩张,但目前遗传多样性较低,说明光裸方格星虫对环境变化的适应能力较差,应加强野生资源的保护,在进化关系上,烟台群体与其他5个群体之间存在较大的遗传分化,但是否已经形成隐秘种仍需进一步的研究.
  • 【期刊】 水产养殖环境耐药细菌中复合1型整合子的流行特征

    刊名:微生物学通报 作者:鄢庆枇 ; 马辰婕 ; 吴小梅 ; 林茂 ; 黄力行 ; 马英 关键词:复合1型整合子 ; 整合子 ; 耐药性 机构:集美大学水产学院 ; 集美大学水产学院 ; 集美大学水产学院 ; 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心 年份:2017
    摘要:[目的]了解复合1型整合子在水产养殖环境中的分布和流行特征.[方法]对108株分离自福建水产养殖场的耐药细菌,通过PCR和序列分析,检测其复合1型整合子上下游保守区和可变区的携带情况.[结果]有86株(79.6%)和47株(43.5%)分别携带1型整合子和ISCR1元件,这两种上下游保守区均携带的耐药细菌则有26株(24.1%),其中16株(14.8%)耐药细菌成功地扩增出上下游可变区,分布于8属9种.进一步对ISCR1上下游序列的拼接和分析,表明这16株细菌携带两种类型的复合1型整合子:(1) intI1-aac(6")-Ib-cr-arr-3-dfrA27-aadA16-qacE△1-sul1-ISCR1-sdr-qnrB6-qacE△1-sul1(15株);(2) intI1-aac(6")-Ib-cr-arr-3-dfrA27-aadA16-qacE△1-sul1-ISCR1-sapA-like-qnrB2-qacE△truncated)-sul1(1株,肺炎克雷伯菌C12),该阵列为新发现的复合1型整合子结构.[结论]复合1型整合子在水产养殖环境中并不少见,且存在于多种细菌中,但其基因阵列结构缺乏多样性.
  • 【期刊】 致病性溶藻弧菌生物膜形成特性研究

    刊名:水产科学 作者:鄢庆枇 ; 姚刚 ; 覃映雪 ; 邹文政 ; 徐晓津 ; 邢颜丽 ; 纪荣兴 ; 郑天凌 关键词:溶藻弧菌 ; 生物膜 ; 环境因子 机构:厦门大学生命科学学院 ; 厦门大学生命科学学院 ; 集美大学水产学院 年份:2012
    摘要:采用改良的微孔板法研究静置培养条件下致病性溶藻弧菌ND-01在酶标板上成膜情况。结果显示,溶藻弧菌的生物膜的OD590在16h达到峰值后,随培养时间延长出现下降;在102~108cfu/mL范围内,不同的初始菌密度对生物膜的OD590影响并不显著;NaCl质量分数为4.5%时,所形成生物膜的OD590最高;30℃,溶藻弧菌的生物膜OD590显著高于其他温度组(P<0.05);在胰蛋白胨大豆肉汤培养液中加入质量分数1.5%的CaCl2,能够显著促进生物膜形成,而加入MgCl2对于生物膜的影响则不显著;经过大黄鱼表皮黏液包被后,96孔板中生物膜的OD590显著高于其他部位组织提取液包被组(P<0.01)。致病性溶藻弧菌ND-01能够在聚苯乙烯材料的96孔酶标板表面形成稳定而明显的生物膜,且其生物膜的形成与多种环境因素有着密切关系。
  • 【期刊】 致病性嗜水气单胞菌生物膜的形成特性

    刊名:中国水产科学 作者:鄢庆枇 ; 毛秀秀 ; 覃映雪 ; 邹文政 ; 郭松林 ; 苏永全 ; 纪荣兴 关键词:嗜水气单胞菌 ; 生物膜 ; 形成特性 机构:集美大学水产学院福建省高校水产科技与食品安全重点实验室 ; 集美大学水产学院福建省高校水产科技与食品安全重点实验室 ; 厦门大学海洋与环境学院 年份:2011
    摘要:应用改良的微孔板法研究了致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)B11的生物膜形成特性。结果显示,嗜水气单胞菌B11能够在聚苯乙烯酶标板表面形成稳定而明显的生物膜,其生物膜的OD590值在6h即达到小高峰,于22h达到峰值,其后随着培养时间的延长而降低;随着初始菌液浓度的增加,生物膜的OD590值逐步降低;25℃的生物膜的OD590值显著高于其他温度的生物膜生成量(P<0.05);在起始pH值为3~4的营养肉汤中,嗜水气单胞菌几乎不能形成生物膜,OD590值接近空白对照,而在pH值为5~10的营养肉汤中,嗜水气单胞菌均能形成明显的生物膜,且差异性不显著(P>0.05);培养液中添加氯化镁达到1mmol/L时,生物膜的OD590值会显著性降低(P<0.05);培养液中添加氯化钙达到1mmol/L时,生物膜的OD590值显著性提高(P<0.05);嗜水气单胞菌在肌肉组织液包被的96孔酶标板上的生物膜形成量有所增加(P<0.05),而在其他黏液和组织提取液包被的酶标板上的生物膜形成量与对照组相比没有显著性差异(P>0.05)。研究结果表明,嗜水气单胞菌B11能在聚苯乙烯酶标板表面形成稳定而明显的生物膜;其生物膜的形成能力受温度、酸碱度、起始菌液浓度、钙、镁离子浓度等因素的影响;肌肉组织提取液也存在能影响生物膜形成的成分。本研究旨在为探讨嗜水气单胞菌生物膜形成机制和致病机理提供参考。
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