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  • 【期刊】 WSSV单抗的制备及其在红螯螯虾病毒病检测中的应用

    刊名:集美大学学报(自然科学版) 作者:郝贵杰 ; 沈锦玉 ; 徐洋 ; 曹铮 ; 潘晓艺 关键词:白斑综合征病毒 ; 红螯螯虾 ; 单克隆抗体 ; 间接ELISA ; 中和试验 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 年份:2009
    摘要:将提纯的感染红螯螯虾的W SSV,免疫BALB/c小鼠,三次免疫后取其脾细胞与SP2/0融合.间接ELISA筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,共获得7株针对W SSV的特异性单抗,分别命名为E2、C2、E3、G3、C4、D5以及F10.细胞上清ELISA效价为1∶1 600~1∶6 400.抗体亚类鉴定结果表明:E2、G3、C4属于IgG1,C2、D5、F10属于IgG3,E3属于IgG2 a亚类;单抗热稳定性试验表明7株单抗均是热稳定的.选取单抗G3和F10进行病毒中和试验,结果表明:在适宜的抗原浓度下,两株单抗均有较好的中和能力.选取单抗G3作为一抗建立了间接ELISA方法,通过对人工感染红螯螯虾W SSV的测定,初步证实该单抗可用于W SSV的检测.
  • 【期刊】 抗哈维氏弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定

    刊名:细胞与分子免疫学杂志 作者:郝贵杰 ; 沈锦玉 ; 曹铮 ; 潘晓义 关键词:哈维氏弧菌 ; 间接ELISA ; 单克隆抗体 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 年份:2007
    摘要:目的:研制抗哈维氏弧菌特异性单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析。方法:以哈维氏弧菌GYC1108-1颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与Sp2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,并鉴定mAb特异性及敏感性。结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后,共获得5株抗GYC1108-1的mAb,其中1B7的细胞上清及腹水效价分别为1∶3 200和1∶32 000,交叉反应结果表明1B7除了与测试的多株哈维氏弧菌发生反应外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌等发生交叉反应。ELISA检测1B7腹水对GYC1108-1的敏感性达107/L。结论:制备的抗哈维氏弧菌mAb可为哈维氏弧菌的检测及防治等提供有用的试剂。
  • 【期刊】 草鱼呼肠孤病毒衣壳蛋白VP7真核重组质粒的构建及免疫效果评价

    刊名:水生生物学报 作者:郝贵杰 ; 袁雪梅 ; 潘晓艺 ; 徐洋 ; 姚嘉赟 ; 蔺凌云 ; 尹文林 ; 沈锦玉 关键词:草鱼呼肠孤病毒 ; 衣壳蛋白 ; 真核表达 ; 体液免疫 ; 细胞免疫 机构:浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室 ; 浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室 年份:2015
    摘要:为研究开发草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)基因疫苗,以编码其主要衣壳蛋白VP7的序列为靶基因,克隆构建了真核表达重组质粒p EGFP-N1-VP7。用脂质体法将其转染真核细胞COS-1和CIK进行瞬时表达,荧光显微镜观察及特异性RT-PCR检测结果表明,成功转染并得到了高效表达。大量扩增重组菌,提取并制备重组质粒p EGFP-N1-VP7,肌肉注射免疫(20±5)g的健康草鱼,重组质粒按0.5和5μg分为2组,同时设5μg空载体组及对照组。免疫草鱼22d后,检测草鱼肠、外周血、肾脏、脾脏的呼吸暴发活性及淋巴细胞的增殖反应;免疫草鱼21d、28d、35d、42d、56d、70d、84d和98d后,分别尾静脉采血并分离血清,用双抗体夹心ELISA方法进行抗体水平的测定。结果表明,构建的含VP7蛋白的核酸疫苗既可诱导草鱼的细胞免疫,又可诱导特异性体液免疫,具有明显的免疫应答作用。按照每尾0.5μg重组质粒的剂量免疫草鱼后35d进行攻毒,免疫保护率达到67%,此研究为GCRV基因疫苗的研制提供了实验资料。
  • 【期刊】 鸭源H10亚型禽流感病毒血凝素基因的序列分析及其致病特性

    刊名:中国畜牧兽医文摘 作者:郝贵杰 ; 张评浒 ; 唐应华 ; 薛峰 ; 刘晓文 ; 钱忠明 ; 刘秀梵 年份:2006
    摘要:采用血清学试验和RT PCR方法从华东地区家养水禽中分离鉴定出多株H10亚型禽流感病毒,对其中1株A/Duck/Yangzhou/502/2003(简称Dk/YZ/502/03)的血凝素(HA)基因进行了序列测定,并与GenBank中登录的其他序列进行了比较。结果显示,
  • 【期刊】 气单胞菌和嗜水气单胞菌双重PCR检测方法的建立

    刊名:华中农业大学学报 作者:郝贵杰 ; 潘晓艺 ; 沈锦玉 ; 姚嘉贇 ; 徐洋 ; 尹文林 ; 孙逢明 ; 吴颖蕾 关键词:气单胞菌 ; 嗜水气单胞菌 ; 16SrRNA ; GCAT基因 ; 双重PCR 机构:浙江省富阳市水产技术服务站 ; 浙江省富阳市水产技术服务站 年份:2011
    摘要:针对GenBank中登录的气单胞菌属(Aeromonas)的毒力基因甘油磷脂胆固醇酰基转移酶基因(GCAT)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的16SrRNA基因的保守区设计2对特异性引物。通过进行双重PCR反应体系优化,PCR产物的测序鉴定和特异性试验,建立了一种能同时检测气单胞菌(Aeromonasspp.)和嗜水气单胞菌的双重PCR检测方法。用此方法对5株嗜水气单胞菌、7株其他不同种的气单胞菌和5株非气单胞菌属菌株进行双重PCR检测。结果显示,气单胞菌和嗜水气单胞菌在GCAT基因的扩增区都能得到有效扩增,其中嗜水气单胞菌能同时在16SrRNA基因扩增区得到有效扩增,而非气单胞菌属的菌株,在此两扩增区都为阴性,表明此检测方法可靠且可行。
  • 【期刊】 鸭源H10亚型禽流感病毒血凝素基因的序列分析及其致病特性

    刊名:中国兽医科技 作者:郝贵杰 ; 张评浒 ; 唐应华 ; 薛峰 ; 刘晓文 ; 钱忠明 ; 刘秀梵 关键词:禽流感病毒 ; 测序 ; H10亚型 ; 血凝素 ; 致病性 ; 剪切位点 机构:扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室 ; 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室 ; 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室 ; 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室 ; 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室 ; 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室 ; 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室 ; 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室 年份:2005
    摘要:采用血清学试验和RT-PCR方法从华东地区家养水禽中分离鉴定出多株H10亚型禽流感病毒,对其中1株A/Duck/Yangzhou/502/2003(简称Dk/YZ/502/03)的血凝素(HA)基因进行了序列测定,并与GenBank中登录的其他序列进行了比较。结果显示,Dk/YZ/502/03株血凝素基因与哺乳动物水貂分离株A/Mink/Sweden/84(H10N4)的同源性最高;其推导的氨基酸剪切位点序列为P-E-I-M-Q-G-R,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,这与该毒株对SPF鸡和BALB/c小鼠的低致病特性相吻合。
  • 【期刊】 斑点叉尾(鱼回)病害防治研究进展

    刊名:水产科学 作者:郝贵杰 ; 王春瑞 ; 沈锦玉 ; 潘晓艺 ; 尹文林 ; 徐洋 ; 姚嘉赟 关键词:斑点叉尾(鱼回) ; 病原生物 ; 防治 ; 免疫学 机构:宁波大学 ; 宁波大学 ; 生命科学与生物工程学院 ; 浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 年份:2010
    摘要:斑点叉尾(鱼回)(Ictalurus punctatus)又称美洲鲶、沟鲇,属鲶形目、(鱼回)科,原产于美国,其商业化养殖占美国有鳍鱼类总养殖产量的50%~85%,我国湖北省水产科学研究所于1984年从美国引进后,因其具有生长速度比较快、肉质细嫩、销售价格较高的特点,受到了广大消费者和水产养殖业者的欢迎.2000年我国斑点叉尾(鱼回)开始出口美国,2005年1月就占美国市场6%,并且有逐年加大的趋势,更是加快了我国斑点叉尾(鱼回)养殖业的发展.
  • 【期刊】 草鱼呼肠孤病毒衣壳蛋白VP7基因真核表达载体pCI-VP7的构建及鉴定

    刊名:水产学报 作者:郝贵杰 ; 潘晓艺 ; 姚嘉赟 ; 徐洋 ; 尹文林 ; 沈锦玉 关键词:草鱼呼肠孤病毒 ; 衣壳蛋白 ; 转染 ; 真核表达 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 年份:2010
    摘要:将编码草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)主要衣壳蛋白VP70.9kb的基因片段连接至克隆载体pMD19-T中,筛选阳性克隆并测序,经检测为正确序列后,再将目的片段克隆入真核表达载体pCI,筛选得到阳性重组质粒pCI-VP7。然后构建pCI-VP-GFP重组表达质粒(即GFP基因与VP7的一段上游基因融合表达),用PCR及酶切方法鉴定克隆的正确性。并用脂质体法将其转染入真核细胞COS-1和CIK进行瞬时表达,荧光显微镜观察及RT-PCR特异性检测。结果表明,GFP基因与VP7的一段上游基因被成功转染到COS-1和CIK细胞,并得到了很好的表达。进而证明pCI-VP7可以成功的表达,为GCRV基因疫苗的研制提供了实验资料。
  • 【期刊】 罗氏沼虾主要病害研究概况

    刊名:生物学杂志 作者:郝贵杰 ; 徐洋 ; 沈锦玉 ; 姚嘉赟 ; 潘晓艺 ; 尹文林 关键词:罗氏沼虾 ; 病害 ; 诊断 ; 防治 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 年份:2012
    摘要:罗氏沼虾是一种重要的经济水产动物,目前在世界各地均有大规模的养殖,尤其集中于东南亚地区,随着养殖规模的扩大其病害发生也越来越多,给罗氏沼虾养殖行业带来了巨大的损失。总结了近年来国内外关于罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)主要疾病及防治方面的研究成果,按照病原的不同分为寄生虫疾病、细菌性疾病、病毒性疾病,主要围绕上述几类疾病的研究及防治的工作展开论述,为今后罗氏沼虾的病害防治提供依据。
  • 【期刊】 罗氏沼虾野田村病毒和双顺反子病毒双重RT-PCR检测方法与序列分析

    刊名:上海海洋大学学报 作者:郝贵杰 ; 潘晓艺 ; 刘杜鹃 ; 沈锦玉 ; 张宇飞 ; 蔺凌云 ; 王军毅 ; 姚嘉赟 ; 徐洋 ; 袁雪梅 关键词:罗氏沼虾 ; 双顺反子病毒 ; 野田村病毒 ; 双重RT-PCR 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 ; 温州医学院生命科学学院 年份:2012
    摘要:罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)和双顺反子病毒(M.rosenbergii dicistrovirus,MrDV)是已报道对罗氏沼虾易感的主要致病性病毒,该研究通过建立双重RT-PCR方法对MrDV和MrNV两种病毒同时进行检测。根据MrDV和MrNV基因组序列的保守区分别设计特异性引物,并对双重PCR的退火温度和引物浓度进行优化,在获得优化反应体系和反应条件后,对罗氏沼虾样品进行检测。结果表明,双重PCR最佳退火温度为60℃,反应体系最佳引物终浓度MrNV384为0.1μmol/L,MrDV472为0.05μmol/L,对病样总RNA的最低检测限为360fg。引物的特异性检测表明,该检测方法对TSV、WSSV、IHHNV和嗜水气单胞菌TPS-30基因组无交叉反应。对阳性样品的病毒扩增序列分析表明,MrDV RNA依赖性RNA聚合酶编码区序列无变异,MrNV-RNA2序列存在较多变异,进化树结果表明2011年长三角的MrNV病毒主要来自于中国基因型和东南亚基因型。该方法的建立为罗氏沼虾病毒性疾病的预防和种苗的繁育奠定了基础。
  • 【期刊】 复合硝化菌制剂的安全性研究

    刊名:水产养殖 作者:郝贵杰 ; 尹文林 ; 沈锦玉 ; 潘晓艺 ; 姚嘉赟 ; 徐洋 关键词:硝化菌 ; 亚硝化菌 ; 毒性 ; 安全性 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 年份:2010
    摘要:应用复合硝化菌制剂对鲫鱼、草鱼、淡水青虾进行了急性毒性试验。对小白鼠进行了30d喂养试验,进行血细胞和血液生化指标检测分析。结果显示,复合硝化菌制剂对鲫鱼和草鱼的96hLD50>1000mg/L,对淡水青虾的96hLD50>500mg/L。以每天500、250和50mg/只的剂量分别拌饵投喂小白鼠30d,小白鼠的体表外观,运动能力及内脏器官与对照组无差异,血细胞和血液生化指标与对照组无差异。
  • 【期刊】 罗非鱼链球菌病及其疫苗研究进展

    刊名:农业灾害研究 作者:郝贵杰 ; 徐洋 ; 沈锦玉 ; 茹红顺 ; 姚嘉赟 ; 潘晓艺 ; 尹文林 关键词:罗非鱼 ; 链球菌病 ; 疫苗 ; 研究进展 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 年份:2012
    摘要:对罗非鱼链球菌病的病原学、组织病理学、致病机理、诊断技术、药物敏感性和疫苗的研究进展进行了介绍,提出依靠免疫手段防治水生动物链球菌病将是未来的研究重点。
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