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  • 【专利】 一种高通量快速筛选罗氏沼虾免疫增强剂的方法

    作者:郝贵杰 ; 林锋 ; 沈锦玉 ; 刘莉 ; 曹铮 ; 盛鹏程 年份:2014
    摘要:本发明公开了一种高通量快速筛选罗氏沼虾免疫增强剂的方法。本发明包括待筛选免疫增强剂的处理、罗氏沼虾血淋巴细胞的采集与培养以及罗氏沼虾非特异性免疫指标的检测与分析三大步骤。本发明能够在体外快速、高通量的进行罗氏沼虾免疫增强剂的筛选。
  • 【会议】 硫酸阿米卡星在鳗鲡体内的药动学和残留研究

    作者:郝贵杰 ; 尹文林 ; 何平 ; 姚嘉赟 ; 沈锦玉 ; 徐洋 ; 潘晓艺 关键词:硫酸阿米卡星 ; 鳗鲡 ; 药代动力学 ; 残留 ; 柱前衍生 ; 固相萃取 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省三门县食品检验检测中心 年份:2014
    摘要:[目的]研究硫酸阿米卡星在鳗鲡体内的药物代谢动力学及其在组织中的残留。[方法]利用高氯酸提取、固相萃取净化组织,2,4,6-三硝基苯磺酸、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、三氟乙酸柱前衍生后,高效液相紫外检测法测定了硫酸阿米卡星在鳗鲡体内药代动力学和残留。色谱条件为流动相为:45%0.02M磷酸二氢钾:41%乙腈:14%甲醇,50%氢氧化钾溶液调节p H为7.7;流速:1.5 ml/min;检测波长为340nm。[结果]利用衍生法所得药物在0.05-50μg/ml浓度范围内线性关系良好(R=0.9995),最低检测限为0.05μg/ml(μg/g)。血液和肌肉中的平均回收率分别为75.9±2.9%和76.9±4.6%。鳗鲡在(26±1)℃时,以50mg/kg单剂量肌肉注射给药物后,鳗鲡血液中的药-时浓度符合一级吸收二室模型,其主要的药动学参数为:达峰时间(Tpeak)0.597h,分布半衰期(T1/2α)3.52h,表明硫酸阿米卡星在鳗鲡体内吸收分布迅速。峰浓度(Cmax)为22.229μg/ml,消除半衰期(T1/2β)为46.945h,推测该药物可能残留时间比较长。鳗鲡在26±1℃时,50mg/kg单剂量肌肉注射硫酸阿米卡星后,5d后在肌肉组织中未检出,19d后血液中未检出。[结论]肌肉注射阿米卡星后,停药期为475-513度日。
  • 【专利】 一种舒伯特气单胞菌快速检测试剂盒及其检测方法

    作者:郝贵杰 ; 沈锦玉 ; 潘晓艺 ; 尹文林 ; 姚嘉赟 ; 徐洋 ; 蔺凌云 ; 袁雪梅 年份:2013
    摘要:一种舒伯特气单胞菌快速检测试剂盒,组成:(1)DNA提取试剂:5-15mMTris、0.5-1.5mM EDTA的TE缓冲液;蛋白酶K,浓度15-20mg/mL;100%的氯仿;100%的异丙醇;乙醇,浓度70%;双蒸水;(2)PCR反应试剂,每个PCR反应管中含有10×PCR反应缓冲液2.5μL,浓度为10μM的dNTPs0.5μL,浓度为5U/μL的Taq DNA聚合酶0.3μL,10μM的特异性寡核苷酸引物A0.5μL,10μM的特异性寡核苷酸引物B0.5μL,灭菌去离子水19.2μL,引物A:5’-CAGCGAGGAGGAAAGGTTGGTGGT-3’,引物B:5’-AAGCCACGCCTCAAGGGCACAA-3’。本发明用于检测舒伯特气单胞菌。
  • 【会议】 湖州地区黄颡鱼常见细菌性疾病的病原检测及分析

    作者:郝贵杰 ; 徐洋 ; 姚嘉赟 ; 蔺凌云 ; 袁雪梅 ; 潘晓艺 ; 尹文林 ; 沈锦玉 关键词:黄颡鱼 ; 细菌性疾病 ; 流行病学 ; 病原 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 年份:2013
    摘要:为了明确湖州地区黄颡鱼常见细菌性疾病病原的种类,寻找有效的防治措施。本研究在2012年6-12月对湖州地区6个镇15个村的黄颡鱼养殖场细菌性疾病的发生情况进行调查和研究。通过定点调查和随机抽样的方式,现已明确困扰湖州地区黄颡鱼养殖业的主要细菌性疾病为:裂头病和腹水病。病原鉴定结果显示裂头病病原为鲇鱼爱德华氏菌,腹水病病原为嗜水气单胞菌。这两种常见的细菌性疾病在7-8月暴发最为集中。根据药敏结果结合生产实际,为黄颡鱼常见细菌性疾病的合理用药提供了依据。
  • 【专利】 大黄酸在防治水产动物水霉病中的应用

    作者:郝贵杰 ; 姚嘉赟 ; 沈锦玉 ; 蔺凌云 ; 尹文林 ; 袁雪梅 ; 徐洋 ; 潘晓艺 年份:2015
    摘要:大黄酸在防治水产动物水霉病中的应用。本发明公开了一种防治水产动物水霉病的水霉防治剂,它是由下列重量百分比的原料组成:大黄酸5%~25%,表面活性剂5%~10%,溶解剂10~20%,其余为溶剂。该防治剂按以下步骤进行:1)称取大黄酸、表面活性剂、溶解剂、溶剂各原料,备用;2)将大黄酸和溶解剂二甲基亚砜或N,N-二甲基甲酰胺混合搅拌至完全溶解;3)将表面活性剂、溶剂加入步骤2)所得的混合溶液中搅拌均匀,即得水霉防治剂。本发明采用大黄酸,可以杀灭水霉菌,起到治本的效果;毒性小,对水产动物无毒害、残留少;防治剂的制备简单、使用方便、药效快、效果明显,生产成本低。
  • 【期刊】 影响南美白对虾苗种质量的关键因素研究

    刊名:《安徽农业科学》 作者:郝贵杰 ; 陈智慧 ; 杭小英 ; 黄小红 ; 李倩 ; 周志明 关键词:南美白对虾 ; 苗种质量 ; 育苗 ; 放苗 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 ; 农业部淡水渔业健康养殖重点实验室 年份:2016
    摘要:南美白对虾是我国虾类养殖的主导品种,由于对虾养殖是一项风险高、利润大的系统工程,在众多风险因子中苗种质量又是养殖南美白对虾成功与否的首要限制因素,因此有效选择优质对虾苗种对我国南美白对虾的持续健康养殖有着重要意义。从育苗和放苗环节综述了影响南美白对虾苗种质量的关键因素,以期为对虾养殖生产中进行优质苗种选择和放养提供必要的参考依据。
  • 【期刊】 链霉菌-XY52代谢产物对小瓜虫的体外杀灭活性研究

    刊名:安徽农业科学 作者:郝贵杰 ; 姚嘉赟 ; 袁雪梅 ; 徐洋 ; 蔺凌云 ; 尹文林 ; 潘晓艺 ; 沈锦玉 关键词:链霉菌 ; 小瓜虫 ; 活性部位 ; 急性毒性试验 机构:浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室 ; 浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室 年份:2015
    摘要:[目的]研究链霉菌发酵代谢产物对小瓜虫幼虫和包囊的杀灭活性。[方法]通过不同极性溶剂回流提取链霉菌发酵液,制备粗提物,进行杀灭小瓜虫幼虫和包囊的药效活性试验,并对活性部位进行安全性评价。[结果]链霉菌发酵液的乙酸乙酯和正丁醇提取物体外杀幼虫效果明显高于其他组别,其对小瓜虫幼虫的半数致死浓度分别为48.2和15.5 mg/L,正丁醇提取物浓度为30.0 mg/L时对小瓜虫包囊杀灭率为100%。急性毒性试验结果表明,正丁醇提取物对草鱼的48 h半致死浓度为(LC50)为195.0 mg/L,其安全浓度为48.7 mg/L。[结论]链霉菌-XY52代谢产物有望开发为一种比较安全的杀虫候选药物。
  • 【期刊】 嗜水气单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制

    刊名:微生物学报 作者:郝贵杰 ; 方一风 ; 潘晓艺 ; 蔺凌云 ; 沈锦玉 ; 尹文林 ; 姚嘉赟 ; 徐洋 关键词:嗜水气单胞菌 ; 耐药机制 ; 喹诺酮类药物 ; 耐药谱 机构:温州医科大学生命科学学院 ; 温州医科大学生命科学学院 ; 浙江省淡水水产研究所浙江省鱼类健康与营养重点实验室 年份:2014
    摘要:【目的】调查从浙、苏、皖等地水产动物中分离的23株致病性嗜水气单胞菌的耐药谱并探索喹诺酮类抗生素耐药菌株的耐药分子机制。【方法】根据美国临床实验室标准化协会药敏判断标准(2011版)测定23株嗜水气单胞菌耐药谱并筛选喹诺酮类抗生素耐药株;对筛选的耐药菌株和体外诱导耐药菌株的gyrA和parC基因耐药决定区进行分析;用二倍稀释法测定加入多重耐药外排泵抑制剂碳酰氰基-对-氯苯腙前后耐药菌株对恩诺沙星最小抑菌浓度的变化,同时检测喹诺酮类药物相关的外排泵基因qepA、oqxA和mdfA;并检测质粒介导的喹诺酮耐药的qnr家族基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD和qnrS。【结果】所有菌株都存在对5种以上药物的耐药性;39.1%(9/23)的嗜水气单胞菌对喹诺酮类药物耐药,其中55.6%(5/9)对恩诺沙星耐药。耐恩诺沙星的5株菌株均携带qnrS,而不携带qnrA、qnrB、qnrC、qnrD基因,也不携带外排泵基因qepA、oqxA和mdfA。其中耐药菌株AH19同时存在gyrA与parC基因双突变、质粒介导的耐药基因qnrS和主动外排泵三种耐药机制,菌株AH4、AH7和AH20存在gyrA与parC基因双突变和质粒介导的耐药基因qnrS两种耐药机制,AH6存在gyrA基因突变和质粒介导的耐药基因qnrS机制,体外诱导耐药菌株ATCC7966-QR相对于原始菌株ATCC7966发生了gyrA与parC基因双突变。【结论】喹诺酮类药物作用靶位的改变和质粒介导的耐药基因qnrS的存在是本研究中涉及的嗜水气单胞菌对喹诺酮类药物耐药的主要作用机制,主动外排泵机制是个别菌株存在的耐药机制。
  • 【期刊】 罗氏沼虾野田村病毒3种检测方法比较

    刊名:江苏农业科学 作者:郝贵杰 ; 林锋 ; 盛鹏程 ; 曹铮 ; 吴颖蕾 ; 刘莉 关键词:罗氏沼虾野田村病毒 ; 免疫胶体金技术 ; RT-PCR ; RT-LAMP ; 检测 年份:2014
    摘要:胶体金免疫层析技术、RT-PCR、RT-LAMP采用的抗体和特异性引物均针对罗氏沼虾野田村病毒的衣壳蛋白和编码基因RNA2。采用这3种方法分别检测罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV),结果表明,免疫胶体金检测试纸能快速检测感染罗氏沼虾野田村病毒的幼虾,但灵敏度较低,能用来检测具有疑似病症的样品;RT-PCR和RT-LAMP检测灵敏度都优于免疫胶体金检测试纸,但RT-PCR方法操作步骤繁琐,所耗时间较长,而RT-LAMP方法操作简便、用时短、不需要特殊仪器,在产物中加入核酸染料后检测结果可用肉眼直接判定。因此,RT-LAMP方法更适合基层和现场检测,其相关试剂盒的研发更具有应用前景。
  • 【期刊】 鳖源致病性嗜水气单胞菌的分离与鉴定

    刊名:湖北农业科学 作者:郝贵杰 ; 林锋 ; 刘莉 ; 曹铮 ; 叶雪平 ; 盛鹏程 关键词: ; Pelodiscus sinensis ; 嗜水气单胞菌 ; Aeromonas hydrophila ; 16S rDNA ; 药敏试验 年份:2014
    摘要:从患病中华鳖(Pelodiscus sinensis)肺组织中分离到优势菌1株,进行了表型特征分析和16S r DNA序列测定。结果表明,该菌为气单胞菌属的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),通过对健康中华鳖进行人工感染,发现该菌具有致病性;选取20种常规药敏试纸进行药敏试验,结果表明,该嗜水气单胞菌对庆大霉素、头孢他啶、头孢西丁、链霉素、呋喃妥因敏感,对诺氟沙星、红霉素、阿米卡星、环丙沙星中敏,对其他11种抗生素具有耐药性。
  • 【期刊】 3种免疫增强剂对黄颡鱼非特异性免疫机能的影响

    刊名:安徽农业科学 作者:郝贵杰 ; 姚嘉赟 ; 徐洋 ; 盛鹏程 ; 尹文林 ; 蔺凌云 ; 袁雪梅 ; 潘晓艺 ; 沈锦玉 关键词:免疫增强剂 ; 黄颡鱼 ; 非特异性免疫 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 年份:2014
    摘要:[目的]研究酵母细胞壁、黄芪多糖、芪参散这3种免疫增强剂对黄颡鱼非特异性免疫功能的影响,为其在水产养殖中的推广和应用提供参考。[方法]制备含有不同剂量酵母细胞壁、黄芪多糖、芪参散药饵连续投喂42天,并在试验的0、7、14、28天检测黄颡鱼血清的非特异性免疫指标,分析其对黄颡鱼免疫功能的影响。[结果]酵母细胞壁、黄芪多糖、芪参散这3种免疫增强剂对黄颡鱼血清补体C3、SOD、溶菌酶、血清白蛋白均有不同程度提高。免疫攻毒试验表明3种免疫增强剂均有一定的免疫保护作用,其大小次序为:酵母细胞壁组>黄芪多糖组>芪参散组,其中2和4 g/kg的黄芪多糖和酵母细胞壁组保护率最高,为50%。[结论]饲料中添加酵母细胞壁、黄芪多糖和芪参散均对黄颡鱼的非特异性免疫功能具有一定的促进作用。
  • 【期刊】 团头鲂致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

    刊名:水产养殖 作者:郝贵杰 ; 蔺凌云 ; 潘晓艺 ; 袁雪梅 ; 姚嘉赟 ; 徐洋 ; 尹文林 ; 许婷 ; 沈锦玉 关键词:团头鲂 ; 维氏气单胞菌 ; 分离鉴定 ; 药敏试验 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 年份:2015
    摘要:本文分离鉴定引发团头鲂暴发性死亡的病原菌,并寻找病原菌的敏感性药物。从患病团头鲂体内分离菌株,通过人工感染试验,常规形态学观察、主要生理生化特征及16s r DNA序列分析。结果表明,分离菌株鉴定为维氏气单胞菌,对头孢曲松、四环素、强力霉素、磷霉素等具有较强的敏感性,而对青霉素G、壮观霉素、复方新诺明、氟哌酸、链霉素、万古霉素等表现出耐药性。该实验为气单胞菌的鉴定及团头鲂细菌性疾病防治提供科学依据。