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  • 【期刊】 逆转录-聚合酶链反应的发展和应用

    刊名:检验医学与临床 作者:张静文 关键词:逆转录-聚合酶链反应 ; 基因 ; 肿瘤 ; 病毒 机构:重庆医药高等专科学校 ; 重庆医药高等专科学校 年份:2008
    摘要:
  • 【期刊】 多重逆转录聚合酶链反应检测常见呼吸道病毒

    刊名:重庆医学 作者:帅维正 ; 李琦 ; 王长征 ; 戢福云 ; 陈华萍 ; 魏征华 ; 李瑾 关键词:多重RT-PCR ; 流感病毒 ; 人鼻病毒 ; 甲型H1N1流感病毒 机构:第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所 ; 第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所 年份:2010
    摘要:目的建立一种可同时快速检测引起人呼吸道感染的重要病毒病原的检测方法。方法通过对PCR反应条件的优化,建立同时检测季节性甲型流感病毒(INFA)、乙型流感病毒(INFB)、人鼻病毒(HRV)和甲型H1N1流感病毒(H1N1)的多重RT-PCR方法。结果该法可同时或分别扩增INFA 212 bpI、NFB 489 bp、HRV 380 bp和H1N1 153 bp的基因片段。检测的敏感性分别为104、104、103、104copies/mL。采用相同的反应体系和条件,分别对其他6种常见病原体(包括肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和粪肠球菌核酸)进行扩增,均未检测出扩增产物。结论此种多重RT-PCR法适用于4种重要呼吸道病毒的快速甄别。
  • 【期刊】 逆转录聚合酶链反应检测疟原虫混合感染的研究

    刊名:中国国境卫生检疫杂志 作者:师永霞 ; 幸芦琴 ; 洪烨 ; 李小波 ; 相大鹏 ; 黄吉城 ; 郑夔 ; 郭波旋 关键词:逆转录聚合酶链反应 ; 国境口岸 ; 疟原虫 ; 混合感染 机构:广东检验检疫技术中心卫生检疫实验室 ; 广东检验检疫技术中心卫生检疫实验室 ; 广东检验检疫技术中心卫生检疫实验室 ; 广东检验检疫技术中心卫生检疫实验室 ; 广东检验检疫技术中心卫生检疫实验室 ; 广东检验检疫技术中心卫生检疫实验室 ; 广东检验检疫技术中心卫生检疫实验室 ; 广东检验检疫技术中心卫生检疫实验室 ; 广东检验检疫技术中心卫生检疫实验室 年份:2008
    摘要:〔目的〕建立在同一反应体系中能同时检测和鉴定恶性疟、间日疟的一步逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法,并用于国境口岸归国劳务人员的疟疾检测。〔方法〕以疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段,设计恶性疟原虫和间日疟原虫的上游通用引物和各自的下游特异性引物,在同一反应体系中同时扩增恶性疟原虫和间日疟原虫的特异片段,对疟疾患者的PCR产物进行序列测定和分析。〔结果〕用建立的RT-PCR检测方法对广东口岸回国劳务人员中发现的2名疟疾患者的不同采样时间的全血进行检测,2006年10月和2007年1月采集的样本被分别扩增出预期大小为360bp和450bp特异扩增带,推测2名患者为恶性疟原虫和间日疟原虫的混合感染,其在入境时处于恶性疟的发作期和间日疟的潜伏期,均属于典型的集体输入性疟疾案例。〔结论〕RT-PCR检测疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点,对国境口岸疟疾诊断、镜检质量控制和流行病学研究具有较大的实用价值。
  • 【专利】 一种逆转录-聚合酶链反应用品消毒盒

    作者:张磊 ; 费舟 ; 程光 ; 王成果 ; 董飞 ; 李娟 年份:2009
    摘要:本实用新型公开了一种逆转录-聚合酶链反应用品消毒盒,包括盒体,盒体上有密封的盒盖,在盒体的底部中央设有转子,盒体上留有出水口,盒体的内周边至少有一道用于放置插板的卡槽,插板上均匀分布有插孔,插板6的中央有提手孔,盒体内还配置有钩状提手。本实用新型的逆转录-聚合酶链反应用品消毒盒,具有搅拌、器具的摆放、消毒和DEPC水的溶解功能,经申请人所作的文献检索,还未见同类相似装置。
  • 【期刊】 改良巢式逆转录聚合酶链反应检测大肠癌血中微转移

    刊名:江西医学院学报 作者:胡庆宏 ; 易诚予 ; 彭燕 ; 刘明圭 ; 熊建萍 关键词:大肠癌 ; 细胞角蛋白20 ; 巢式逆转录聚合酶链反应 机构:南昌大学第一附属医院细胞基因室 ; 南昌大学第一附属医院细胞基因室 ; 南昌大学第一附属医院肿瘤科 年份:2009
    摘要:目的探讨改良巢式RT-PCR法检测大肠癌患者外周血中CK20mRNA的表达情况,并分析其与微转移的关系,建立一种简便、快速的检测血中癌细胞微转移的方法。方法采用改良的巢式RT-PCR技术检测大肠癌患者及正常对照组外周血CK20mRNA的表达。结果CK20mRNA在正常对照组中均无表达,在大肠癌患者中阳性表达率为55.4%(62/112)。不同细胞分化程度大肠癌患者其外周血中CK20mRNA阳性表达率无显著性差异(P>0.05);而不同Dukes分期大肠癌患者其外周血中CK20mRNA阳性表达率有显著性差异(P<0.05)。结论改良的巢式RT-PCR技术检测血中微转移大肠癌细胞的CK20mRNA具有简便、快速、灵敏的优点,有助于癌细胞微转移的早期诊断,有助于指导辅助化疗和监测疗效。
  • 【期刊】 逆转录聚合酶链反应检测小鼠MN/CA9基因的表达

    刊名:吉林大学学报(医学版) 作者:王银萍 ; 王贵民 ; 薛世泉 ; 邹亚斌 关键词:逆转录聚合酶链反应 ; MN/CA9基因 ; 小鼠 ; 近交ICR 机构:吉林大学第一医院病理科 ; 吉林大学第一医院病理科 ; 吉林大学第一医院普外科 ; 吉林大学第一医院病理科 ; 吉林大学第一医院病理科 年份:2006
    摘要:目的:克隆、分析ICR小鼠MN/CA9基因序列,并检测MN/CA9基因在ICR小鼠各组织中的表达。方法:分别取ICR小鼠小肠、肝、肾、脾、胃、胸腺、心脏、卵巢、肺、胰腺、肌肉、皮肤、子宫和膀胱新鲜组织,采用胍尼啶异硫氢酸呱酚氯仿提取法(GIT)提取总RNA。合成cDNA的第1链和第2链,连接EcoRⅠ载体,EcoRⅠ末端磷酸化,XhoⅠ消化,将cDNA构建到ZAPexpressvector进行包装、种植培养,筛选、切取噬菌体,使用引物扩增后进行DNA序列分析。用逆转录聚合酶链反应检测小鼠MN/CA9基因在上述组织中的表达。结果:使用人类MN/CA9基因片段做探针,用放射性同位素32P标记探针,筛选1·47×103大肠埃希菌落,杂交后发现一阳性cDNA信号,序列测定确定其含1671bp核苷酸序列(已在GenBank登录,登录号AB086322),这个序列与人类的MN/CA9(基因序列号Z54349)有69·1%的同源性。在引物P521-P1193区间,MN/CA9基因在小鼠小肠、子宫、肌肉、胰腺、心脏、肺、胸腺、脾、肾、卵巢、胃和膀胱组织表达均较强,在皮肤和肝脏不表达。结论:MN/CA9基因在ICR小鼠组织中的表达与人类基本相同,可以用ICR小鼠进行MN/CA9基因的研究。
  • 【期刊】 风疹病毒荧光逆转录-聚合酶链反应快速检测方法的建立

    刊名:中国疫苗和免疫 作者:吴华森 ; 高筱萍 ; 徐昌平 ; 卢亦愚 ; 冯燕 关键词:风疹病毒 ; 荧光逆转录-聚合酶链反应 ; 检测 ; TaqMan探针 机构:浙江中医药大学 ; 浙江中医药大学 ; 浙江省疾病预防控制中心浙江省公共卫生应急检测关键技术重点实验室 年份:2010
    摘要:目的建立快速、灵敏的TaqMan探针荧光逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)用于风疹病毒核酸的特异性检测。方法在风疹病毒非结构蛋白P150基因保守区域,设计特异性引物和TaqMan探针,优化荧光RT-PCR反应体系与反应条件,以提高方法的特异性和灵敏度,并应用于风疹疑似患者的临床样本检测。结果建立的荧光RT-PCR对风疹病毒检测具有高度特异性,对麻疹、流行性腮腺炎、流行性感冒等其他病毒均无交叉反应,且检测的灵敏度达0.01TCID5(050%组织培养感染剂量)/管。采用该方法从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右,且操作简便、重复性好、准确率高。结论建立的风疹病毒荧光RT-PCR高效、特异、敏感,为风疹病毒感染的早期快速检测提供了一种新的方法。
  • 【期刊】 介绍一种改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术

    刊名:实用临床医学 作者:胡庆宏 ; 刘明 ; 栾树清 ; 易诚予 ; 彭燕 关键词:逆转录聚合酶链反应 ; 改良技术 机构:江西医学院第一附属医院细胞中心 ; 江西医学院第一附属医院细胞中心 ; 江西医学院第一附属医院细胞中心 ; 江西医学院第一附属医院细胞中心 ; 江西医学院第一附属医院细胞中心 ; 江西医学院第一附属医院细胞中心 年份:2005
    摘要:
  • 【期刊】 实时逆转录聚合酶链反应定量检测人 TNF-αmRNA的表达

    刊名:医学研究通讯 关键词:肿瘤坏死因子-α ; 实时PCR ; 逆转录 ; RNA ; 信使 年份:2006
    摘要:目的建立一种快速、灵敏、特异定量检测人外周血单个核细胞(PBMC)表达TNF-α mRNA的方法.方法根据Gene Bank中TNF-α mRNA序列和MGB探针荧光定量分析原理,设计合成特异的引物和探针,优化实验条件,建立定量检测人TNF-α mRNA的实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,并对10名健康体检者PBMC PHA刺激前后进行TNF-α表达检测.结果本法灵敏度为103拷贝/毫升、线性检测范围达6个数量级(103~109拷贝/毫升);特异性好,PCR产物电泳后无非特异性条带产生,非目的扩增产物用本法进行检测,均无荧光信号响应;以Ct值计算变异系数(CV值),批内批间CV值均小于5%;10名健康体检者PBMC PHA刺激前后TNF-α mRNA的平均含量分别为10 4.15±0.49 和105.19±0.43拷贝/毫升.结论Taqman-MGB实时荧光RT-PCR定量检测人TNF-α mRNA表达水平,结果快速、准确、特异、灵敏,具有临床推广价值.
  • 【期刊】 乙型脑炎病毒TaqMan逆转录聚合酶链反应检测方法的建立

    刊名:中国热带医学 作者:黄福新 ; 高世同 ; 张仁利 ; 钟木生 ; 耿艺介 ; 黄达娜 关键词:乙型脑炎病毒 ; 荧光RT-PCR ; TaqMan探针 ; 检测 机构:深圳市疾病预防控制中心 ; 深圳市疾病预防控制中心 ; 深圳市布吉坂田预防保健所 年份:2008
    摘要:目的采用TaqMan技术,研究建立实时荧光逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis,JEV)的效果。方法根据JEV非结构蛋白基因NS3基因序列(GenBank序列号,U15763),结合生物学软件序列比对分析,设计1对特异性引物和TaqMan寡核苷酸探针,优化荧光RT-PCR反应条件后,以模板梯度稀释法及相关毒株对比扩增检验测定方法的敏感度和特异性。结果引物和探针最佳浓度均为0.20μM,复性温度为55℃。方法至少检测出1copy/μl病毒RNA,与流感、麻疹、腮腺炎、风疹、水痘等病毒均无交叉反应。从病毒核酸提取至完成检测仅需3hr左右。结论所建立的JEV病毒TaqMan荧光RT-PCR方法敏感特异,有助于JEV感染的实验室早期快速诊断。
  • 【期刊】 双重实时逆转录聚合酶链反应检测甲型和乙型流感病毒

    刊名:中国卫生检验杂志 作者:俞骅 ; 叶榕 ; 闻洪根 ; 潘劲草 关键词:流行性感冒病毒 ; 实时逆转录PCR ; 逆转录PCR 机构:杭州市疾病预防控制中心微生物检验科 ; 杭州市疾病预防控制中心微生物检验科 ; 杭州市疾病预防控制中心微生物检验科 ; 杭州市疾病预防控制中心微生物检验科 ; 杭州市疾病预防控制中心微生物检验科 年份:2008
    摘要:目的:建立双重实时荧光RT-PCR方法(DqRT-PCR)以检测甲、乙型流感病毒。方法:设计甲、乙型流感病毒M基因的特异性引物及双标记探针,优化反应条件,建立双重实时荧光RT-PCR方法(DqRT-PCR)。设计甲型流感病毒HA1、HA3亚型的H1、H3、N1、N2基因的特异性引物,建立双重普通RT-PCR(DRT-PCR)方法。对HA1、HA3和B型细胞分离株进行DqRT-PCR和DRT-PCR检测。对80份发热病人咽拭子标本进行DqRT-PCR和DRT-PCR检测及细胞培养分离病毒。结果:DqRT-PCR检测甲型和乙型靶DNA片段(重组质粒)最低极限为1×103拷贝。DqRT-PCR和DRT-PCR对11株H1N1、16株H3N2和12株乙型细胞分离株检测,符合率100%。DqRT-PCR、DRT-PCR和细胞培养分离病毒对80份咽拭子标本的阳性率分别为:37.5%(30/80)、30.0%(24/80)和43.8%(35/80),检出率差异未见统计学意义(2χ=5.5,P>0.05)。与细胞培养分离病毒法比较,DqRT-PCR的阳性和阴性总符合率为73.7%(59/80),阳性预测值为62.9%(22/35),阴性预测值为88.9%(40/45);经配对2χ检验,差异无统计学意义(2χ=0.76,P>0.05)。结论:建立DqRT-PCR可应用于甲型和乙型流感的检测,以多种检测方法互补将有助于提高临床标本的病毒检出率。