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  • 【期刊】 高迁移率族蛋白1及其受体在系统性红斑狼疮中的作用

    刊名:医学综述 作者:赵跃然 ; 李鸿昌 关键词:高迁移率族蛋白1 ; 警报素 ; Toll样受体 ; 高度聚糖化作用终产物受体 ; 系统性红斑狼疮 机构:山东省医学科学院基础医学研究所 ; 山东省医学科学院基础医学研究所 ; 山东大学附属省立医院中心实验室 年份:2012
    摘要:高迁移率族蛋白1(HMGB1)是存在于真核细胞的一种非组蛋白核蛋白,在胞外HMGB1可作为警报素在固有与适应性免疫反应中起"预警作用"。系统性红斑狼疮(SLE)是影响多个器官功能的典型的自身免疫病,SLE患者的血清HMGB1水平提高,并且狼疮患者的皮损组织中也检测到HMGB1的表达增加。现就HMGB1的基本特征、胞外的生物学活性及在SLE免疫病理机制中的作用予以综述。
  • 【期刊】 RNA干扰抑制高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响

    刊名:现代妇产科进展 作者:赵跃然 ; 张捷 ; 陈洁 关键词:HMGB1 ; 卵巢肿瘤 ; 侵袭转移 机构:山东大学附属省立医院中心实验室 ; 山东大学附属省立医院中心实验室 ; 山东大学公共卫生学院少儿卫生妇幼保健教研室 年份:2012
    摘要:目的:研究RNA干扰抑制HMGB1的表达对高侵袭转移能力的卵巢癌细胞亚系S1,A1和HO8910PM增殖和侵袭能力的影响。方法:构建靶向HMGB1基因的慢病毒vshRNA载体,转染具有高侵袭转移能力的S1,A1和HO8910PM,同时利用细胞爬片、real-time RT-PCR、Western blot等方法检测RNA干扰抑制HMGB1表达的效果。绘制生长曲线,软琼脂培养克隆形成实验和Boyden chamber侵袭移动实验检测RNA干扰抑制HMGB1基因表达对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响。结果:细胞爬片、real-time RT-PCR和Western blot均证实慢病毒HMGB1 shRNA载体成功抑制HMGB1在S1,A1和HO8910PM中的mRNA和蛋白表达。生长曲线,软琼脂培养克隆形成实验和Boydenchamber侵袭移动试验结果显示HMGB1的表达下调抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力。结论:HMGB1的表达下调可明显抑制卵巢癌细胞的体外增殖和侵袭能力,为卵巢癌治疗提供了新思路。
  • 【期刊】 ERAP1基因与山东汉族人群强直性脊柱炎的相关性

    刊名:山东大学学报(医学版) 作者:赵跃然 ; 夏羽 ; 王来城 ; 孙慧 ; 唐宏伟 ; 马春燕 ; 崔彬 关键词:强直性脊柱炎 ; ERAP1基因 ; 关联分析 ; 汉族人群 机构:山东省立医院中心实验室 ; 山东省立医院中心实验室 ; 聊城市人民医院眼科 年份:2011
    摘要:目的利用基于群体的病例对照关联分析方法,探讨ERAP1基因是否为北方汉族人群的易感基因。方法从山东省立医院收集了311例临床确诊的强直性脊柱炎病例及320例正常对照资料,利用Taqman探针法对ERAP1基因内的两个单核苷酸多态性位点rs7711564和rs27434分型,利用PLINK软件行Hardy-Weinberg遗传平衡检验、等位基因及基因型频率分布分析。样本统计学效能采用CaTS软件计算。结果两个位点在病例组及对照组中均达到遗传平衡,其中rs7711564位点罕见等位基因频率在病例组及对照组分别为0.430 9和0.489 1(OR=1.26,P=0.04),rs27434位点罕见等位基因频率在病例组和对照组分别为0.483 9与0.421 9(OR=0.78,P=0.03)。结论 ERAP1基因内的遗传变异与北方汉族人群强直性脊柱炎相关,进一步证实了该基因是强直性脊柱炎的易感基因。
  • 【期刊】 人sBAFF-DT388融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性研究

    刊名:山东大学学报(医学版) 作者:赵跃然 ; 朱月婷 ; 焦玉莲 ; 崔彬 ; 张捷 ; 游力 关键词:B淋巴细胞刺激因子 ; 白喉类毒素 ; 重组融合蛋白质类 ; 大肠杆菌 机构:山东省医学科学院基础医学研究所 ; 山东省医学科学院基础医学研究所 ; 山东大学附属省立医院中心实验室 年份:2011
    摘要:目的制备人B淋巴细胞刺激因子-白喉毒素融合蛋白(hsBAFF-DT388),探讨其靶向B细胞活性。方法根据优化合成的hsBAFF-DT388基因序列设计引物,PCR扩增目的基因并插入克隆载体pMD19-T,采用菌落PCR、酶谱分析及DNA测序鉴定阳性克隆,重组克隆载体经双酶切后插入表达载体pColdⅡ,并鉴定重组表达载体。重组菌株经ITPG诱导,SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,经Ni2+-NTA层析柱纯化,检测重组蛋白的生物学活性。结果获得hsBAFF-DT388高效表达菌株,目的蛋白占菌体总蛋白的40%左右。重组蛋白与BAFF受体阳性细胞特异性结合并对人B细胞系Hmy2.CIR具有靶向细胞毒作用。结论成功构建hsBAFF-DT388表达载体,获得具有靶向B细胞活性的重组蛋白,为其在B细胞恶性肿瘤及自身免疫性疾病治疗中的应用研究奠定基础。
  • 【专利】 与多囊卵巢综合征相关的SNP、包含SNP的芯片及其应用

    作者:赵跃然 ; 陈子江 ; 贺林 ; 师咏勇 ; 马金龙 ; 赵涵 ; 石玉华 ; 耿玲 ; 游力 年份:2010
    摘要:本发明提供了与多囊卵巢综合征(PCOS)相关的SNP,这些SNP在数以千计的中国PCOS病例中被发现。本发明还提供了具有所述SNP的探针和包括一个或多个这些探针的芯片。所述探针和芯片可以用于筛选、预测或诊断PCOS。
  • 【期刊】 免疫复合物对单核巨噬细胞的调节作用

    刊名:山东大学学报(医学版) 作者:赵跃然 ; 曲芸芸 ; 马春燕 ; 朱敏 ; 刘晓雯 ; 孙新平 ; 徐洁 关键词:红斑狼疮 ; 免疫复合物 ; 单核巨噬细胞 ; 增殖 ; 分泌 ; 吞噬功能 机构:山东大学附属省立医院中心实验室 ; 山东大学附属省立医院中心实验室 年份:2010
    摘要:目的研究免疫复合物对单核巨噬细胞的增殖、细胞因子的分泌及吞噬功能的调节作用。方法免疫复合物组:细胞坏死上清+系统性红斑狼疮(SLE)患者血清;对照组有5组:坏死上清+正常人血清组、坏死上清组、SLE血清组、正常人血清组和培养基组,以上分别作用于U937细胞和U937细胞诱导产生的巨噬细胞。24h后,用CCK-8法检测U937细胞的增殖,RT-PCR法检测U937细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和B细胞活化因子(BAFF)的变化,中性红比色法检测诱导产生的巨噬细胞的吞噬功能。结果与对照组相比,免疫复合物能明显促进U937细胞的增殖(P<0.05),TNF-α和BAFF的mRNA表达水平明显增加(P<0.05),并明显抑制巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。结论在免疫复合物作用下,单核巨噬细胞系统(MPS)处于异常活化状态,使免疫复合物的形成增多而清除减少,从而参与了SLE的发生发展。
  • 【期刊】 shRNA沉默RAGE基因表达对前列腺癌细胞增殖的抑制作用

    刊名:肿瘤 作者:赵跃然 ; 孙新平 ; 马春燕 ; 焦玉莲 ; 曲芸芸 ; 朱敏 ; 刘晓雯 ; 徐洁 关键词:前列腺肿瘤 ; 糖基化终产物 ; 高级 ; RNA ; 小分子干扰 ; 细胞 ; DU145 机构:山东大学附属省立医院中心实验室 ; 山东大学附属省立医院中心实验室 年份:2010
    摘要:目的:构建针对人晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)基因的特异性短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体,探讨其对前列腺癌细胞DU145增殖的抑制作用。方法:设计并合成4种针对RAGE基因的特异性短链寡核苷酸,构建含shRNA RAGE的表达载体,转染高表达RAGE的亚克隆细胞株sub DU145-2C1。荧光显微镜下观察细胞转染后的情况,实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测转染shRNA后对RAGE mRNA表达的影响,Western印迹法检测对RAGE蛋白表达的影响,CCK-8法检测对细胞增殖的影响,划痕实验观察对细胞迁移能力的影响。结果:构建获得的shRNA RAGE表达载体能够有效抑制RAGE基因的表达(P<0.05),其中以shRNA RAGE-1(R1)的抑制作用最强,其对RAGE mRNA表达的抑制率为84%,对蛋白表达的抑制率为27%。细胞增殖结果显示,转染shRNA RAGE后细胞增殖能力明显降低;而细胞迁移能力则无明显变化。结论:shRNARAGE能有效下调RAGE基因的表达水平,抑制细胞增殖。
  • 【期刊】 人HMGB1基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达和纯化

    刊名:山东大学学报(医学版) 作者:赵跃然 ; 崔彬 ; 王来城 ; 朱敏 ; 焦玉莲 ; 辛玮 ; 马春燕 ; 张捷 关键词:高迁移率族蛋白质类 ; 大肠杆菌 ; 原核细胞 ; 纯化 机构:山东省医学科学院基础医学研究所 ; 山东省医学科学院基础医学研究所 ; 山东大学附属省立医院中心实验室 年份:2010
    摘要:目的构建人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因的原核表达载体,观察表达水平并纯化重组蛋白。方法根据GenBank中人HMGB1基因序列,用OptimumGeneTM行密码子优化并合成目的基因,经PCR扩增,NdeⅠ和XhoⅠ双酶切,插入原核表达载体pQE-T7-2的相应位点,构建原核表达质粒pQE-T7-2/HMGB1。经菌落PCR、酶谱分析及序列分析鉴定重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,采用SDS-PAGE和Westernblot印迹法鉴定重组蛋白,Ni-NTA树脂亲和纯化目的蛋白。结果成功构建人HMGB1克隆载体和表达载体;表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的20%以上,Westernblot法显示,重组蛋白能与抗HMGB1抗体和抗His抗体特异结合,亲和层析纯化后纯度达90%以上。结论成功构建高效稳定的重组人HMGB1原核表达载体,获得纯化人HMGB1蛋白,为进一步研究HMGB1的功能奠定基础。
  • 【期刊】 血清抵抗素、C-反应蛋白及IL-6与PCOS的相关性研究

    刊名:生殖与避孕 作者:赵跃然 ; 游力 ; 芦珂 ; 石玉华 ; 陈子江 关键词:多囊卵巢综合征 ; PCOS ; 抵抗素 ; C-反应蛋白 ; CRP ; IL-6 ; 肥胖 ; 胰岛素抵抗 ; IR 机构:山东大学附属省立医院生殖医学中心山东省生殖医学重点实验室 ; 山东大学附属省立医院生殖医学中心山东省生殖医学重点实验室 ; 山东大学附属省立医院检验科 年份:2010
    摘要:目的:探讨血清脂肪细胞因子抵抗素(resistin)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)水平与PCOS发生的相关性。方法:收集PCOS患者45例,再根据体质量指数(BMI)分为肥胖亚组(≥25kg/m2,22例)和非肥胖亚组(<25kg/m2,23例)。正常对照组45例,同样按BMI分为肥胖亚组(14例)和非肥胖亚组(31例)。空腹采集血清,采用酶联免疫分析法测定抵抗素、免疫比浊法测定CRP、放射免疫法测定IL-6,全自动生化分析仪测定血糖、血脂、化学发光法测定内分泌水平和血清胰岛素水平,同时测量身高、体质量、腰围、臀围,计算BMI和腰臀比值(WHR)。结果:与对照组非肥胖者相比,PCOS组肥胖、非肥胖者及对照组肥胖者抵抗素水平均显著增高(P<0.05);PCOS组和对照组肥胖者的CRP水平均高于对照组非肥胖者(P<0.05);PCOS组肥胖和非肥胖者的IL-6水平高于对照组非肥胖者(P<0.05)。抵抗素和CRP均与BMI、WHR、HOMA-IR呈显著正相关(P<0.05);IL-6与BMI、WHR有显著相关性,与HOMA-IR无相关性。结论:脂肪细胞因子抵抗素、CRP及IL-6参与PCOS患者肥胖和胰岛素抵抗的发生发展。
  • 【期刊】 HBV感染患者自身抗体特征的研究进展

    刊名:医学检验与临床 作者:赵跃然 ; 董振芳 ; 李钿 ; 赵万辉 机构:山东省医学科学院 ; 山东省医学科学院 ; 山东大学附属省立医院检验科 ; 山东大学附属省立医院检验科 ; 山东大学附属省立医院中心实验室 年份:2010
    摘要:乙型肝炎病毒(heptatitis B virus,HBV)属于嗜肝DNA病毒科,是引起乙型病毒性肝炎的病原体.肝脏是HBV的主要复制器官,但HBV并不直接引起肝细胞病变,而是机体对HBV产生的免疫应答所造成的肝细胞病理性免疫损伤,主要表现为血清中检出各种自身抗体[1].自身免疫性肝病是特异性或非特异性自身抗原刺激机体引起肝组织损伤的一组疾病,血清中常出现与之相关的自身抗体,这些自身抗体的致病机理尚不明确.乙型病毒性肝炎和自身免疫性肝病在诊断和治疗方面是完全不同的,探讨乙型病毒性肝炎患者血清中的自身抗体特征并与自身免疫性肝病相鉴别具有重要的临床意义.
  • 【期刊】 乙型肝炎病毒DNA含量与HBeAg、ALT相关分析及其临床意义

    刊名:医学检验与临床 作者:赵跃然 ; 朱运涛 ; 张艳红 关键词:肝炎病毒 ; 乙型 ; DNA ; HBeAg ; ALT ; FQ-PCR 机构:山东省医学科学院基础医学研究所 ; 山东省医学科学院基础医学研究所 ; 济宁医学院附属金乡医院 ; 济宁医学院附属金乡医院 ; 山东大学附属省立医院中心实验室 年份:2010
    摘要:目的 探讨乙型肝炎病毒HBV-DNA含量与血清标记物HBeAg、谷丙转氨酶(ALT)的相关性及其对肝病患者诊断、预后的意义.方法 采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测523例乙肝患者血清学标记物(HBV-M),其血清学模型包括以下四种组合,A组:HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)(大三阳);B组:HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)(小三阳);C组HBsAg(+)、HBcAb(+);D组:HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+);并选取65例HBsAg(-)、HBsAb(-)HBeAg(-)、HBeAb(-)、HBcAb(+)正常人(E组)作为对照.实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测血清中HBV-DNA含量,同时采用酶法测定血清ALT水平.结果 A组HBV-DNA阳性率为92.55%,明显高于B组78.97%(x2=189.60,P<0.001)和C组50.98%(x2=234.15,P<0.001),A、D、C三组ALT水平均高于对照组(P<0.001,P<0.001,P<0.001);Log HBV-DNA与HBeAg S/CO之间存在正相关性(r=0.418,P<0.001),而ALT与Log HBV-DNA及HBeAg S/CO之间均无相关性.结论 HBV-DNA含量与乙肝病毒e抗原具有显著相关性,HBV-M和HBV-DNA定量检测并联合ALT水平对于临床乙肝病毒感染、复制及临床治疗有重要意义.
  • 【期刊】 编码反义人端粒酶RNA组分重组逆转录病毒载体的构建

    刊名:中华肿瘤防治杂志 作者:赵跃然 ; 王丛笑 ; 刘吉勇 ; 叶远红 ; 郝菁华 关键词:RNA ; 端粒 ; 未端转移酶 ; 逆转录病毒 ; 基因治疗 ; 转染 机构:山东大学附属省立医院消化科 ; 山东大学附属省立医院消化科 ; 山东大学附属省立医院中心实验室 年份:2009
    摘要:目的:构建编码反义人端粒酶RNA组分的重组逆转录病毒载体,以用于肿瘤的基因治疗。方法:用PCR方法获得目的基因-人端粒酶RNA组分(hTERC),酶切分析及DNA测序进行鉴定,用T4连接酶连接酶切产物,PCR以及EcoR1和BamH1双酶切鉴定重组逆转录病毒载体。结果:hTERC大小为490bp。DNA测序表明,pMD-hTERC中插入的hTERC与NCBI上的序列进行比对,同源性达到99%。重组逆转录病毒载体PLXSN-hTERC经EcoR1和BamH1双酶切后,可见到大小分别为5900bp和500bp的两条带。结论:编码反义人端粒酶RNA组分的重组逆转录病毒载体已构建成功,是一个很有前景的抗肿瘤治疗策略。