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  • 【专利】 预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒

    作者:董琼珠 ; 周闯 ; 钦伦秀 ; 叶青海 ; 贾户亮 ; 周海君 ; 王冠 ; 张晓飞 ; 郑燕 年份:2011
    摘要:本发明涉及一种预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒,其特征在于,包括IL6基因扩增引物及荧光标记探针、HLA_DRA基因扩增引物及荧光标记探针、CSF1基因扩增引物及荧光标记探针、SPP1基因扩增引物及荧光标记探针以及TNF基因扩增引物及荧光标记探针。本发明发现了IL6基因、HLA_DRA基因、CSF1基因、SPP1基因以及TNF基因可以作为标志物来预测肝癌术后生存率,并提供了相应的试剂盒,通过实时定量PCR微阵列芯片技术对原发性肝癌病人术后的组织mRNA水平的检测,具有高通量、高敏感性和高均一性等优点。
  • 【期刊】 肝细胞性肝癌组织浸润淋巴细胞表型与分布研究

    刊名:中国肿瘤临床 作者:董琼珠 ; 史炯 ; 钦伦秀 ; 孙海晶 ; 贾户亮 关键词:肿瘤浸润淋巴细胞 ; 肝癌 ; 表型 ; 预后 机构:南京大学附属鼓楼医院病理科 ; 南京大学附属鼓楼医院病理科 ; 复旦大学生物医学研究院 ; 复旦大学附属中山医院肝外科 年份:2015
    摘要:目的:肝细胞性肝癌组织浸润淋巴细胞与外周血T细胞表型可能与肿瘤进展及预后相关,本研究检测肝癌患者组织及外周血T细胞表型与分布,分析淋巴细胞表型变化与预后的关系。方法:分析2007年10月至12月中山医院147例肝癌及癌旁组织浸润淋巴细胞表型(T细胞或B细胞表面标志物:CD3、CD8、CD4、CD20、CD19、Foxp3),表型与临床病理特征及预后的关系;检测26例肝癌外周血CD3、CD8、CD4+T细胞数量并其比例变化。结果:癌巢内肿瘤浸润细胞明显少于癌周组织(P<0.01),癌周淋巴细胞主要分布于癌旁正常肝组织、汇管区,其与患者肝炎病史及肝硬化相关,表型以CD3+T细胞为主,其中又以CD8+细胞毒性T细胞为主;CD4染色在多数病例为阴性,Foxp3仅在个别病例(15/109)呈阳性。肿瘤浸润淋巴细胞B细胞标志CD20、CD19均为阴性。肿瘤组织内CD8+T细胞浸润数量与预后正相关,而癌周浸润淋巴细胞数目与患者转移及复发无显著关系。结论:肝癌肿瘤浸润细胞在癌巢内明显少于癌周组织,肿瘤及癌周浸润细胞以CD8+细胞毒性T细胞为主。肿瘤组织内CD8+T细胞浸润数量与预后相关,而癌周浸润淋巴细胞数量与患者转移及复发无显著关系。
  • 【期刊】 miRNA-769-5p在乙型肝炎相关肝细胞癌中的表达

    刊名:贵阳医学院学报 作者:董琼珠 ; 朱海涛 ; 贾户亮 ; 钦伦秀 关键词:微小RNA ; ; 肝细胞 ; 肝炎 ; 乙型 机构:贵阳医学院附院肝胆外科 ; 贵阳医学院附院肝胆外科 ; 复旦大学附属中山医院 年份:2012
    摘要:目的:研究乙型肝炎相关性肝细胞癌中异常表达的微小RNA(miRNAs)及其与肝细胞癌患者根治术预后的关系。方法:通过Taqman低密度芯片(TLDA)分析了显微切割福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本中的肝细胞癌组织及癌旁组织中miRNA的表达,并在48例样本中验证了其中1个差异表达的miRNA(miR-769-5p)及与肝细胞癌患者根治性切除术预后的关系。结果:miR-769-5p在癌组织较癌旁组织中高表达,在48例显微切割的有、无早期复发肝细胞癌样本中验证了该结果并分析了miR-769-5p与肝细胞癌患者根治术预后的关系,结果发现miR-769-5p在早期复发者的癌组织中表达高于无早期复发者。但是,肿瘤中miR-769-5p的表达水平与复发时间及总生存时间无关。进一步分析发现miR-769-5p的表达可能与肿瘤的数目相关,而与肿瘤大小、包膜及肿瘤的分期无关。结论:miR-769-5p在乙型肝炎相关肝细胞癌组织中较癌旁组织高表达,且其表达水平可能与肿瘤的数目相关。
  • 【期刊】 MicroRNA生物合成相关基因在肝癌中的表达及其意义

    刊名:国际消化病杂志 作者:董琼珠 ; 闫兆伟 ; 朱海涛 ; 周闯 ; 张晓飞 ; 任宁 ; 叶青海 ; 钦伦秀 关键词:肝细胞癌 ; MicroRNA ; Drosha ; DGCR8 ; Exportin 5 ; Dicer ; AGO2 ; GEMIN3 ; GEMIN4 ; DBR1 ; ADAR 机构:复旦大学生物医学研究院 ; 复旦大学生物医学研究院 ; 复旦大学附属中山医院肝肿瘤外科 年份:2013
    摘要:目的通过检测肝癌和癌旁组织中microRNA(miRNA)合成相关基因的mRNA表达,分析其与肝癌恶性行为的关系。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肝癌组织及其配对癌旁组织中miRNA生物合成相关基因的mRNA表达水平,比较分析其表达水平差异及其与肝癌预后的关系。结果 RT-PCR结果显示,与相应的癌旁组织相比,肝癌组织中细胞核内miRNA生物合成相关基因Drosha、DGCR8、DBR1、ADAR、Exportin 5的mRNA表达水平显著升高(P<0.0001),而细胞质内miRNA生物合成相关基因Dicer、AGO2、GEMIN3、GEMIN4的mRNA表达水平显著下降(P<0.0001)。肝癌组织中DBR1和Exportin 5 mRNA高表达患者的总生存率高于低表达患者(P<0.05),癌旁组织中DGCR8mRNA高表达患者的总生存率高于低表达患者(P<0.05)。结论 Dicer的表达可能在肝癌发生发展过程中起重要作用。DBR1、Exportin 5和DGCR8可以作为肝癌治疗的潜在干预靶点。
  • 【期刊】 肝细胞癌(HCC)对索拉非尼耐药相关机制的研究进展

    刊名:复旦学报(医学版) 作者:董琼珠 ; 胡倍源 ; 覃伟 ; 钦伦秀 关键词:细胞表型 ; 自噬 ; 上皮-间质转化(EMT) ; 铁死亡 ; 肿瘤起始细胞(T-IC) ; 外泌体 ; 血管选定 ; 索拉非尼 机构:复旦大学附属华山医院普外科 ; 复旦大学附属华山医院普外科 ; 复旦大学生物医学研究院 ; 复旦大学肿瘤转移研究所 年份:2018
    摘要:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的恶性肿瘤之一。分子靶向药物索拉非尼是不能手术切除的进展期HCC的一线疗法。但部分HCC对其耐药性的出现影响了总体疗效,耐药可分为原发性(HCC原本就对索拉非尼缺乏敏感性)和获得性(开始敏感,治疗过程中出现耐药)两类,其机制尚不清楚。HCC对索拉菲尼的耐药机制主要表现在肝癌细胞自身和肿瘤微环境两个方面:前者包括细胞自噬、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、铁死亡(ferroptosis)受抑制和肿瘤起始细胞(tumor-initiating cell,TIC)等;后者包括外泌体(exosome)和血管选定等。本文对其相关研究进展进行总结。
  • 【期刊】 肿瘤抑制基因HTPAP单体型构建及其与肝癌转移潜能的关系

    刊名:肝胆胰外科杂志 作者:董琼珠 ; 武金才 ; 陈虒 ; 贾户亮 ; 任宁 关键词:HTPAP ; ; 肝细胞 ; 单核苷酸多态性 ; 单体型 ; 转移 机构:海南省人民医院肝胆胰外科器官移植外科 ; 海南省人民医院肝胆胰外科器官移植外科 ; 复旦大学附属中山医院肝肿瘤外科肝癌研究所 年份:2013
    摘要:目的探讨肝细胞癌(HCC)患者肿瘤组织DNA的HTPAP基因单体型与肝癌转移潜能的关系。方法提取864例HCC手术样本DNA,应用焦磷酸测序行SNPs检测,并予单体型构建,分析其与肝癌转移潜能的关系。构建HTPAP启动子单体型pGL3质粒,并分别转染MHCC-97H、HepG2肝癌细胞和正常的肝Hela细胞,分析不同HTPAP启动子单体型对基因转录活性的影响。结果共发现6个SNPs位点[-1053A/G、+64G/C、+357C/G、+1648-/TAAG(无插入和插入TAAG等位基因分别以T/G示,后同)、+1838A/G、+3528C/T]。单体型构建发现HTPAP中共存在11个单体型,其中AGCTAC、GCGGGT、AGCTGC、GCGGAT四种单体型占94.75%。临床病理特征分析提示单体型GCGGGT与高转移潜能正相关(P=0.0003)。启动子序列中两个SNPs(-1053AG和+64GC)存在完全LD,故只有三种启动子单体型(-1053AA/+64GG、-1053AG/+64GC GC和-1053GG/+64CC);双荧光报告法发现三种单体型的HTPAP启动子都具有显著转录活性,其中-1053AA/+64GG单体型启动子转录活性较-1053GG/+64CC和-1053AG/+64GC单体型启动子强,差异具有统计意义(P=0.005,0.009)。结论肿瘤转移抑制基因HTPAP的GCGGGT单体型与HCC高转移潜能正相关。HTPAP启动子单体型对基因的转录活性有显著影响并与术后复发密切相关,提示HCC中HTPAP的不同SNP单体型可能是潜在侵袭转移和复发预后的预测指标。
  • 【期刊】 骨桥蛋白通过激活AKT信号通路促进肝癌细胞的侵袭转移

    刊名:中国肿瘤外科杂志 作者:董琼珠 ; 赵越 ; 付丽云 ; 史炯 ; 戴春 ; 钦伦秀 关键词:骨桥蛋白 ; 肝癌细胞 ; AKT ; 转移 机构:复旦大学附属中山医院肝癌研究所 ; 复旦大学附属中山医院肝癌研究所 ; 复旦大学生物医学研究院 年份:2009
    摘要:目的观察骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)对AKT信号通路及肝癌细胞生物学行为的影响。方法人肝癌细胞系Hep G2细胞分别转染对照质粒pCDNA3.1和重组质粒pCDNA3.1-OPN,Western blot检测细胞中OPN、AKT、AKT-P、MMP2和uPA的表达水平,CyQUANT法和Matrigel侵袭实验观察OPN上调对细胞粘附和细胞侵袭的影响。结果 OPN激活AKT信号通路,与转染对照质粒的Hep G2细胞相比,转染OPN重组质粒的细胞MMP2和uPA表达增加,其细胞粘附百分比是56.08±2.0,大于对照组的49.93±1.74(P<0.05);穿过基底膜细胞数目是(25.2±2.08)个,大于对照组的(17.4±1.45)个(P<0.05)。结论 OPN可通过激活AKT信号通路,上调MMP2和uPA表达,促进Hep G2细胞侵袭转移。
  • 【期刊】 肿瘤转移抑制基因HTPAP的Haploview单体型构建分析

    刊名:中华实验外科杂志 作者:董琼珠 ; 武金才 ; 任宁 ; 李国才 ; 孙冰生 ; 刘道永 ; 史炯 ; 戴春 ; 孙海晶 ; 叶青海 ; 钦伦秀 关键词:癌,肝细胞 ; 单核苷酸多态性 ; 转移 ; 基因 机构:复旦大学肝癌研究所 ; 复旦大学肝癌研究所 ; 复旦大学附属中山医院 年份:2008
    摘要:目的 通过单核苷酸多态性(SNP)检测对肿瘤转移抑制基因HTPAP进行单体型构建和分析.方法 取100例肝细胞癌(HCC)新鲜标本,应用激光捕获组织显微切割获取纯肝癌细胞、提取DNA,对HTPAP基因上已登录的15个SNP位点进行检测,应用Haploview软件构建单体型.结果 15个SNP位点中,有8个表现为单态、5个呈多态性、2个未能检测出.对100例肝细胞癌的该5个多态位点进行单体型构建后发现11种单体型,其中3种单体型(C-A-T-C-A、C-G-T-C-A和T-A-G-G-G)最常见,占87%,另外8种单体型占13%.4个SNP(rs7007097、rs3830326、rs1149、rs3739252)表现为强连锁不平衡关系,尽管rs11539529出现重组现象,但从整体看还是属于同一个单体型块.结论 肿瘤转移抑制基因HTPAP在肝癌中常见C-A-T-C-A、C-G-T-C-A和T-A-G-G-G三种单体型,针对不同单体型研究分析可能为肝癌转移复发、预后预测提供新的途径和指标.
  • 【期刊】 转基因玉米的脉冲电泳技术检测及遗传分析

    刊名:安徽农业大学学报 作者:董琼珠 ; 程备久 ; 朱苏文 关键词:玉米种子 ; 脉冲电泳 ; 转基因 ; 遗传分析 机构:安徽农业大学生命科学学院 ; 安徽农业大学生命科学学院 ; 安徽农业大学生命科学学院 ; 安徽农业大学生命科学学院 ; 安徽医科大学基础医学院 年份:2006
    摘要:采用脉冲电泳技术将外源Bar基因和B.t基因转化玉米种胚并直接成苗,对T0代、T1代经除草剂筛选的抗性植株进行PCR检测。结果表明,T1代转基因植株频率明显低于T0代PCR阳性植株率,T0代植株的PCR阳性率与T1代转基因植株频率呈显著正相关(r=0.9874)。T1代表现为PCR阳性的植株Southern杂交结果显示脉冲电泳法介导的外源基因在受体中多为单拷贝,且能从T1代遗传到T2代,外源基因在T2代呈典型的孟德尔分离方式。
  • 【期刊】 利用脉冲电泳技术转化玉米获得转基因植株的研究

    刊名:激光生物学报 作者:董琼珠 ; 蔡丽琼 ; 朱苏文 ; 李培金 ; 程备久 关键词:脉冲电泳 ; 转化 ; 玉米种子 ; B.t基因 ; Bar基因 机构:安徽农业大学生命科学学院 ; 安徽农业大学生命科学学院 ; 安徽农业大学生命科学学院 ; 安徽农业大学生命科学学院 ; 安徽农业大学生命科学学院 ; 安徽农业大学生命科学学院 ; 安徽医科大学基础医学院 ; 安徽医科大学基础医学院 年份:2004
    摘要:本研究采用脉冲电泳技术将外源Bar基因和B.t基因转化玉米种胚并直接成苗,通过除草剂抗性初步筛选,再进行PCR检测、Southern杂交验证,探讨了脉冲电泳介导外源基因直接转化玉米种胚的有效性,结果表明:脉冲电泳技术介导玉米转基因是有效可行的,其T0代植株PCR阳性率与T1代植株转化率分别为11.36%和1.04%。在外源基因的转化中,处于不同启动子下的B.t基因和Bar基因共转化频率为90.9%。T1代PCR表现为阳性的植株Southern杂交结果显示脉冲电泳法介导的外源基因在受体中多为单拷贝,且已遗传给后代,并获得稳定表达。
  • 【期刊】 肝细胞癌中A20基因的表达及其预后意义

    刊名:肿瘤 作者:董琼珠 ; 乔鹏 ; 高小妹 ; 郁新新 ; 张晓飞 ; 钦伦秀 关键词: ; 肝细胞 ; 基因表达 ; 预后 ; A20 机构:复旦大学附属华山医院普外科 ; 复旦大学附属华山医院普外科 ; 复旦大学附属中山医院肝癌研究所 ; 复旦大学生物医学研究院 年份:2015
    摘要:目的 :探讨A20基因[又称肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(tumor necrosis factor alpha-induced protein 3,TNFAIP 3)基因]在肝细胞癌组织中的表达及其与预后的关系。方法 :选取86例原发性肝癌患者的手术切除标本(包括癌及癌旁组织)及26例肝血管瘤患者的正常肝组织标本,采用实时荧光定量PCR法检测A20在肝癌组织及其配对的癌旁组织和正常肝组织中的m RNA表达水平,并分析A20 m RNA表达水平与肝癌患者临床病理特征及接受根治性切除术后预后的关系。结果 :肝癌组织中A20 m RNA的相对表达水平显著高于血管瘤正常肝组织(1.620±0.155 vs 0.410±0.043,P<0.001);对应癌旁组织中A20 m RNA的表达水平(1.215±0.134)也显著高于血管瘤正常肝组织(P=0.001),但与肝癌组织相比的差异无统计学意义(P=0.087)。肝癌组织中A20的表达水平与患者肿瘤分化程度明显相关(P<0.001)。肝癌组织中A20高表达的患者术后总生存(overall survival,OS)率显著低于A20低表达组(P=0.016),至复发时间(time to recurrence,TTR)显著短于A20低表达组(P=0.011)。单因素分析表明,A20表达水平与肝癌患者的预后密切相关(OS:P=0.012;TTR:P=0.013);多因素分析表明,A20表达是影响肝癌患者生存与复发的独立预后因素(OS:P=0.021;TTR:P=0.018)。结论 :肝癌组织中A20 m RNA的表达水平显著高于正常肝组织。A20表达可能成为肝癌患者生存与复发的独立预后因素。
  • 【专利】 miRNA在预测早期原发性肝癌病人术后复发的应用及其试剂盒

    作者:董琼珠 ; 赵越 ; 钦伦秀 ; 周海军 ; 贾户亮 年份:2008
    摘要:本发明提供了一种用于预测早期原发性肝癌病人术后肝癌复发的试剂盒,包括反转录 系统、扩增系统和引物探针系统,反转录系统由反转录酶、反转录体系缓冲液和RNA酶抑 制剂组成,扩增系统由含Taq酶的miRNA表达定量检测混合液组成,引物探针系统包含 has-miR-34a茎环结构引物、has-miR-34a扩增引物和荧光标记探针以及RNU6B茎环结构引 物、RNU6B扩增引物和荧光标记探针。本发明检测定量准确,简便、快速且经济实用,且 可进一步与其他分子指标相结合,为早期原发性肝癌复发诊断、预后预测提供综合性分子 标记试剂盒,方便于临床应用。
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