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  • 【期刊】 混合基质上长枝木霉GF-10固体发酵条件的优化

    刊名:山地农业生物学报 作者:葛永怡 ; 王成吕 ; 杨鲁栋 ; 王天鹏 ; 杨正军 ; 代园凤 关键词:混合基质 ; 长枝木霉GF-10 ; 固体发酵 ; 正交实验 机构:贵州大学生命科学学院 ; 贵州大学生命科学学院 ; 贵州烟草公司毕节市公司 年份:2018
    摘要:长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum) GF-10是一株具有较好生防潜力的菌株,为提高其产孢量,本研究通过单因子筛选、正交实验,对该菌在混合基质的产孢条件及培养成分进行了优化。结果表明:当培养基基质净重为8 g,麦麸∶竹炭质量比为16∶1、添加5%葡萄糖、1. 5‰(NH4)2SO4、1. 5‰MgSO4、0. 6%KH2PO4和0. 5%混合矿质元素,p H=7,接种200μL (1×107个/m L)菌悬液,28℃,12 h/d光照,48 h后搅拌,培养7 d时,其最大产孢量为1. 25×1010个/g,比以麸皮为基质的培养条件提高了110. 79%。本研究的开展较好的提升了长枝木霉GF-10的产孢量,为该菌的工业生产奠定了基础。
  • 【期刊】 碳氮比对猪粪堆肥腐熟度的影响

    刊名:贵州农业科学 作者:葛永怡 ; 周思 ; 刘永霞 关键词:猪粪 ; 堆肥 ; 腐熟度 机构:贵州省环境科学研究设计院 ; 贵州省环境科学研究设计院 ; 贵州省水污染控制重点实验室 ; 贵州大学 年份:2017
    摘要:为提高畜禽粪便堆肥的效果,以猪粪为基质,锯末与秸秆为调理辅料,研究堆肥材料初始C/N为19~33∶1时不同堆制时间与腐熟度有关的温度、pH、种子发芽率和堆体C/N变化等指标.结果表明:堆肥温度以锯末为调理辅料的效果优于秸秆,但均符合《粪便无害化卫生标准》(GB 7959-2012)要求;堆料较为适宜的C/N为(23~27)∶1.堆肥过程结束时(22 d)pH均维持在8.0~9.0,培养的种子发芽率锯末组高于秸秆组,锯末堆肥初始C/N为(24~28)∶1时的腐熟度比较高,种子发芽率≥90%;秸秆堆肥以初始C/N为25∶1时发芽率最高,达88%.以猪粪为基质添加锯末初始C/N不宜超过30∶1,添加秸秆初始C/N不宜超过29∶1.
  • 【期刊】 多种农药对长枝木霉GF-10的毒性效应

    刊名:农药 作者:葛永怡 ; 杨正军 ; 陈雪 ; 代园凤 ; 向婷 ; 康俊 关键词:长枝木霉GF-10 ; 农药 ; 毒性效应 机构:贵州大学生命科学学院 ; 贵州大学生命科学学院 ; 贵州烟草公司毕节市公司 年份:2019
    摘要:[目的]研究3种类型16种农药对生防菌长枝木霉GF-10的毒性效应,以期为该菌的应用研究奠定基础。[方法]通过平板计数法计算孢子的萌发数和抑制率,并采用EC50值对毒性效应进行评估。[结果]杀虫剂对GF-10菌株的抑制效果为啶虫脒>高氯·甲维盐>高效氯氟菊酯>吡虫啉>甲氨基阿维菌>溴氰菊酯;除草剂的抑制效果为敌草胺>二甲戊灵>异丙甲草胺>砜嘧磺隆>仲灵·异松;杀菌剂的抑制效果为多菌灵>百菌清>代森锰锌>醚菊酯>霉·稻瘟灵,其中当异丙甲草胺质量浓度为7.2、72μg/L、二甲戊灵质量浓度小于45μg/L、砜嘧磺隆质量浓度小于25μg/L时对GF-10具有促进作用。[结论]田间应用木霉菌GF-10时,可与7.2、72μg/L的异丙甲草胺、质量浓度小于45μg/L二甲戊灵和质量浓度小于25μg/L的砜嘧磺隆混合使用,而应避免与本研究提到的其他农药共同使用。
  • 【期刊】 冠突曲霉AN1类锌指蛋白zfpA基因的克隆及表达分析

    刊名:基因组学与应用生物学 作者:葛永怡 ; 谭玉梅 ; 王亚萍 ; 任秀秀 ; 刘永翔 ; 刘作易 关键词:茯砖茶 ; 有性产孢 ; RACE技术 ; 相对定量 机构:贵州大学农学院 ; 贵州大学农学院 ; 贵州省生物技术研究所 ; 贵州省农业生物技术重点实验室 ; 贵州省农业科学院 年份:2017
    摘要:本研究采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)克隆出冠突曲霉中zfpA基因的cDNA全长序列并进行生物信息分析。该序列全长1 443 bp,开放阅读框长度为924 bp,从312~1 235 bp,没有内含子序列。推测编码的蛋白质含有307个氨基酸,同源性分析显示该基因与米曲霉的AN1锌指蛋白(XP_001826567)相似性达71%。利用荧光定量PCR技术分析了zfpA基因在营养菌丝体阶段、无性产孢阶段及有性产孢阶段的表达量差异。结果表明,这个基因在在无性产孢时期的表达量最低,有性产孢时期的表达量最高,相比无性产孢时期上调了4倍。本实验为深入研究zfpA基因对冠突曲霉的产孢调控机制奠定了基础。
  • 【会议】 冠突散囊菌的全基因组测序与交配型基因的功能研究

    作者:葛永怡 ; 谭玉梅 ; 王玉臣 ; 刘永翔 ; 刘作易 关键词:冠突散囊菌 ; 基因组测序 ; 交配型基因 ; 功能研究 机构:贵州大学生命科学学院 ; 贵州大学生命科学学院 ; 贵州省农业科学院生物技术重点实验室 年份:2014
    摘要:冠突散囊菌是茯砖茶发酵过程中的优势菌种,又名"金花菌"。茯砖茶是一个重要的黑茶品种,其生产已有近500年的历史,在其生产过程中"金花菌"的多少常作为判断夜砖茶品质好坏的标志,研究该菌对控制和监测茯砖茶品质具有重要的生产实际意义。在研究该菌的过程中,我们发现它可以在渗透压的调节下产生独立的无性世代和有性世代,是一种研究真菌产抱机制的良好材料,对研究真菌有性产孢具有重要的理论价值。因此为开展进一步的研究,我们对该菌进行了全基因组测序,结果显示:该菌的基因组全长约28.5Mb,scaffold 63条,GC含量为49.6%,基因总数约10344个。在此基础上我们分析了该菌交配型基因的进化模式,发现该菌的交配塑基因在进化模式上与已有的真菌交配型基因进化模式存在差异,推测是一种新的交配型基因进化模式,为弄清楚在该模式下交配型基因的功能,我们应用基因敲除技术证实了在该菌中交配型基因的功能是控制真菌有性产孢阶段中子囊和子囊孢子的形成、
  • 【期刊】 黑曲霉不同极性分离产物的抗真菌及抗氧化能力

    刊名:江苏农业科学 作者:葛永怡 ; 郭博恺 ; 李祝 ; 万科 ; 李玉环 ; 刘芳 ; 丛铭 ; 胡坤 ; 岳大历 关键词:黑曲霉 ; 白绢病 ; 生物防治 ; 抗氧化 机构:贵州大学药学院 ; 贵州大学药学院 ; 贵州大学生命科学学院 ; 毕节市家乡美农业开发有限公司 年份:2016
    摘要:进行了以从患有冠瘿病的葡萄树根际土壤中分离获得的1株黑曲霉XJ用于抑制齐整小核菌的试验。其中超临界萃取段、水提醇沉段以及正丁醇段表现出较好的抑制效果。抑制率分别达到了93.22%、74.11%、79.67%。被抑制的菌丝出现了膨大、畸形、原生质聚集等现象,菌落大小也随着平板含待测样品的不同而不同。在测定电导率时,发现其随着药量浓度增高而增大,表明黑曲霉对齐整小核菌的细胞膜有较强的影响。另外还分别用DPPH法和ABTS法考察了黑曲霉不同极性分离产物的抗氧化能力。
  • 【期刊】 冠突散囊菌不同生长阶段MAT基因的表达量变化

    刊名:西南农业学报 作者:葛永怡 ; 吴石平 ; 谭玉梅 ; 刘永翔 ; 刘作易 关键词:冠突散囊菌 ; MAT基因 ; 实时荧光定量PCR ; 基因表达量 机构:贵州大学农学院 ; 贵州大学农学院 ; 贵州省农业生物技术重点实验室 ; 贵州大学生命科学学院 ; 贵州省植物保护研究所 ; 贵州省生物技术研究所 ; 贵州省农业科学院 年份:2015
    摘要:冠突散囊菌(Eurotium cristatum)闭囊壳的产生和数量受各种与有性产孢相关的基因控制,而MAT基因(Mating type gene,MAT)是其中的关键基因之一,为调查MAT基因在冠突散囊菌不同发育阶段的表达量变化,应用实时荧光定量PCR技术对该菌的营养生长时期、无性产孢时期和有性产孢时期3个阶段的MAT基因表达量进行检测。结果显示:以营养生长时期为对照,在有性产孢时期MAT1-1-1基因上调31.12倍,MAT1-2-1基因上调5.87倍;在无性产孢时期MAT1-1-1基因上调4.25倍,MAT1-2-1基因仅为对照的0.03倍。表明,MAT基因与冠突散囊菌的有性产孢相关,其中MAT1-1-1基因还可能与无性产孢相关。
  • 【期刊】 拮抗菌L2代谢产物对烟草赤星病病原菌的抑制效果

    刊名:贵州农业科学 作者:葛永怡 ; 万科 ; 黄慧 ; 赵润 ; 丛铭 ; 陈雪 ; 李祝 关键词:烟草赤星病菌 ; 拮抗细菌 ; 生物防治 机构:贵州大学生命科学学院 ; 贵州大学生命科学学院 ; 贵州省烟草公司毕节市公司 年份:2014
    摘要:为探明拮抗菌L2对烟草赤星病的抑制效果,采用菌落直径法、凹玻片法和菌丝浸泡法测定了拮抗菌L2对烟草赤星病病原菌的菌丝生长、孢子萌发、产孢量的抑制作用。结果表明:拮抗菌L2粗代谢物含量在1.5%~20%时均能有效地抑制烟草赤星病菌菌丝生长,7d时的抑制率在25.3%~74.8%,被抑制的菌丝出现了膨大、畸形、原生质聚集等现象,菌落大小随着平板粗代谢产物含量的增加而减小;对病原菌孢子萌发的抑制率随L2粗代谢物浓度的增高而增高,24h时为11.4%~87.7%,孢子的芽管呈畸形萌发,部分产生液泡化并破裂;L2菌株粗代谢物滤液对烟草赤星病菌产孢的抑制率在18.4%~78.2%,浓度越高,抑制能力越强。
  • 【期刊】 运用双向电泳技术分离鉴定冠突散囊菌veA相关蛋白

    刊名:贵州农业科学 作者:葛永怡 ; 桑石磊 ; 谭玉梅 ; 任秀秀 ; 刘永翔 ; 刘作易 关键词:双向电泳 ; 质谱 ; 氧化还原 ; veA ; 差异蛋白 机构:贵州大学生命科学学院 ; 贵州大学生命科学学院 ; 贵州省农业生物技术重点实验室 ; 贵州省生物技术研究所 ; 贵州工程应用技术学院生态工程学院 ; 贵州大学农学院 ; 贵州省农业科学院 年份:2014
    摘要:为探究冠突散囊菌与veA基因相关的差异表达蛋白,利用双向电泳-质谱技术对冠突散囊菌野生型菌株只产生有性孢子时期、△veA缺失菌株只产生无性孢子时期、△veA缺失菌株既产生无性孢子又产生有性孢子时期的蛋白进行分离和鉴定。结果表明:经检测得到107个功能各异的蛋白点,其中,大多数蛋白与代谢相关,最多的是具有氧化还原功能的蛋白。3种蛋白与产孢和发育有关,包括α-微管蛋白、蛋白磷酸酶2A、真核细胞翻译起始因子3。说明,用双向电泳-质谱技术可以有效地分析冠突散囊菌与veA基因相关的差异蛋白,有助于认识冠突散囊菌的产孢机理。
  • 【期刊】 拮抗菌 L2代谢产物对烟草赤星病病原菌的抑制效果

    刊名:《贵州农业科学》 作者:葛永怡 ; 万科 ; 黄慧 ; 赵润 ; 丛铭 ; 陈雪 ; 李祝 关键词:烟草赤星病菌 ; 拮抗细菌 ; 生物防治 机构:贵州大学 ; 贵州大学 ; 生命科学学院 ; 贵州省烟草公司毕节市公司 年份:2014
    摘要:为探明拮抗菌L2对烟草赤星病的抑制效果,采用菌落直径法、凹玻片法和菌丝浸泡法测定了拮抗菌 L2对烟草赤星病病原菌的菌丝生长、孢子萌发、产孢量的抑制作用。结果表明:拮抗菌 L2粗代谢物含量在1.5%-20%时均能有效地抑制烟草赤星病菌菌丝生长,7 d 时的抑制率在25.3%-74.8%,被抑制的菌丝出现了膨大、畸形、原生质聚集等现象,菌落大小随着平板粗代谢产物含量的增加而减小;对病原菌孢子萌发的抑制率随 L2粗代谢物浓度的增高而增高,24 h 时为11.4%-87.7%,孢子的芽管呈畸形萌发,部分产生液泡化并破裂;L2菌株粗代谢物滤液对烟草赤星病菌产孢的抑制率在18.4%-78.2%,浓度越高,抑制能力越强。
  • 【期刊】 响应面法优化黑曲霉产纤维素酶的发酵条件

    刊名:食品科学 作者:葛永怡 ; 刘松 ; 李祝 ; 周礼红 ; 刘吴娟 ; 张传萍 关键词:纤维素酶 ; 液体发酵 ; 黑曲霉 ; 优化 ; 响应面法 机构:贵州大学生命科学院 ; 贵州大学生命科学院 年份:2013
    摘要:采用单因素试验和响应面法对黑曲霉(Aspergillus niger)xj产纤维素酶的液体发酵条件进行优化并以羧甲基纤维素酶活力作为响应值。首先通过单因素试验初步确定葡萄糖2g/100mL、酵母膏1g/100mL和聚乙二醇体积分数0.1%,初始pH7.0,250mL三角瓶装30mL液体培养基、接种种龄为24h、接种量10%。再利用PlackettBurman(PB)设计筛选出影响羧甲基纤维素酶(CMCase)活力的显著因素:接种量和碳源。通过最陡爬坡试验逼近最大酶活力区域。最后用中心复合设计及响应面分析确定产酶的最佳发酵条件为在PDA的基础上,葡萄糖2.7g/100mL、酵母膏1.25g/100mL和聚乙二醇0.1%、种龄30h、装液量37.5mL(250mL三角瓶)、接种量8%(3.3mL)、初始pH7.0、28℃、150r/min培养96h。经过优化,CMCase活力最高为(63.5±1.7)U/mL,比未优化的条件(在PDA的基础上,种龄24h、装液量30mL(250mL三角瓶)、接种量10%(3mL)、葡萄糖2g/100mL、初始pH7.0、28℃、150r/min培养96h)得到的酶活力最高值(49.0±1.7)U/mL提高了29.59%。
  • 【期刊】 两相法提高轮枝拟青霉中虫草菌素含量的研究

    刊名:广东农业科学 作者:葛永怡 ; 王嫱 ; 李祝 ; 任秀秀 ; 陈青 ; 周礼红 ; 肖洋 ; 刘吴娟 关键词:两相 ; 轮枝拟青霉 ; 虫草菌素 ; 油酸 ; 邻苯二甲酸二丁酯 机构:贵州大学生命科学学院 ; 贵州大学生命科学学院 ; 毕节学院环境与生命科学系 ; 贵州大学化学工程学院 ; 贵州省产品质量检验检测院 年份:2012
    摘要:以轮枝拟青霉(Paecilomyces verticillatus GZ)为材料,分别考察油酸和邻苯二甲酸二丁酯添加量以及添加时间对轮枝拟青霉产虫草菌素的影响。结果表明,接种GZ的同时添加6%(V/V)油酸,虫草菌素产量达到71.33(±2.61)mg/L,比对照组提高44%;接种GZ的同时添加6%(V/V)邻苯二甲酸二丁酯,虫草菌素产量达到59.21(±2.50)mg/L,比对照组提高20%。此法为简化虫草菌素的下游提取工艺提供了依据。
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