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  • 【期刊】 组织块法分离培养小鼠脾脏间充质干细胞

    刊名:中国比较医学杂志 作者:丁丽[1] 朱恒[2] 张海宏[3] 杨洋[1] 韩冬梅[1] 王志东[1] 郑晓丽[1] 董磊[1] 闫洪敏[1] 刘静[1] 朱玲[1] 薛梅[1] 郭子宽[4] 王恒湘[1] 关键词:组织 细胞培养 脾脏 间充质干细胞 机构:中国人民解放军空军总医院血液科 ; 中国人民解放军空军总医院血液科 年份:2016
    摘要:目的通过组织块培养法,建立一种高效可靠的小鼠脾脏间充质干细胞分离扩增策略。方法无菌条件下取小鼠脾脏组织充分碾碎,使用胶原酶消化获得的脾脏基质组织,将消化后的组织块种于培养瓶中,观察从组织块中迁移出的细胞形态,采用流式细胞术分析其表型,并将其做成骨和成脂肪诱导分化。结果消化后的脾脏组织块中迁移迁移出大量梭形纤维样细胞,流式细胞术检测结果表明,该种细胞高表达CD29、CD44、Sca-1和CD105,低表达CD11b、CD34、CD45和Ia。多向分化实验结果表明:小鼠脾脏基质组织中迁移出的细胞具有较好的成脂肪和成骨分化能力。结论组织块法可以分离培养出小鼠脾脏间充质干细胞,所获得的细胞纯度高,分化能力强,为开展相关研究提供了良好的细胞模型。
  • 【期刊】 小鼠脾脏间充质干细胞调节T淋巴细胞的增殖与活化

    刊名:中国比较医学杂志 作者:丁丽 ; 朱恒 ; 张海宏 ; 杨洋 ; 韩冬梅 ; 王志东 ; 郑晓丽 ; 董磊 ; 闫洪敏 关键词:脾脏间充质干细胞 ; 增殖 ; 活化 ; 炎性细胞因子 机构:中国人民解放军空军总医院血液科 ; 中国人民解放军空军总医院血液科 ; 军事医学科学院基础医学研究所 ; 中国人民解放军空军总医院普外科 年份:2017
    摘要:目的 研究小鼠脾脏间充质干细胞(Sp?MSCs)对T淋巴细胞增殖与活化的调节作用.方法 采用组织块法从小鼠脾脏中分离培养出Sp?MSCs,并做多向诱导分化实验.分离小鼠T淋巴细胞,开展淋巴细胞转化试验和混合淋巴细胞反应,分别检测Sp?MSCs对于非特异抗原和同种异体抗原活化的T淋巴细胞的影响.以CFSE流式法检测Sp?MSCs对活化的T淋巴细胞增殖的影响.采用定量PCR分析Sp?MSCs对T淋巴细胞表达的炎性细胞因子的影响.结果 流式检测结果显示Sp?MSsC可以抑制非特异抗原和同种异体抗原引起的T淋巴细胞增殖.Sp?MSCs能够有效抑制淋巴细胞转化试验和混合淋巴细胞反应引起的细胞活化.进一步分析发现,Sp?MSCs抑制T淋巴细胞表达干扰素γ,肿瘤坏死因子α和白细胞介素17A.结论 Sp?MSCs能够抑制T淋巴细胞增殖与活化,抑制T淋巴细胞表达多种炎性细胞因子.
  • 【专利】 一种具有免疫调节功能的脾脏间充质干细胞及其制备方法与应用

    作者:王恒湘 ; 丁丽 ; 郭子宽 ; 朱恒 年份:2016
    摘要:本发明公开了一种具有免疫调节功能的脾脏间充质干细胞及其制备方法与应用。本发明采用了去除造血细胞‑消化基质组织‑获得Sp‑MSCs‑传代纯化的策略,建立了一种从脾脏分离培养MSCs的方法,并分离获得了大量细胞纯净度较高的Sp‑MSCs,进一步发现该群Sp‑MSCs具有强大的免疫调节能力,能够抑制非特异抗原和同种异体抗原活化的T淋巴细胞增殖和活化,并抑制T淋巴细胞分泌炎性细胞因子。
  • 【会议】 脂肪间充质干细胞对MRL/lpr小鼠脾脏CD4~+T细胞IL-17、IFN-γ的影响

    作者:张伟 ; 白力 ; 王永福 关键词:脂肪间充质干细胞 ; MRL/1pr小鼠 ; 白介素-17 ; 干扰素-γ 机构:包头医学院第一附属医院风湿免疫科 ; 包头医学院第一附属医院风湿免疫科 年份:2014
    摘要:研究背景:间充质干细胞(MSC)是一类起源于中胚层的多能干细胞,因免疫原性低并能调控多数免疫细胞活性,显示出治疗自身免疫性疾病的应用前景。近些年研究发现脂肪组织也是多能干细胞的来源之一,由脂肪组织分离得到的脂肪间充质干细胞(Adipose-derived stem cell,ADSC)同样具有免疫调节能力。目的:研究ADSCs对系统性红斑狼疮小鼠脾脏CD4~+T细胞IL-17、IFN-γ的影响,为ADSCs应用于系统性红斑狼疮的临床治疗提供科学依据。方法:利用酶消化法分离培养小鼠脂肪间充质干细胞,取P3代细胞进行表面抗原和分化能力的鉴定。10周龄MRL/lpr小鼠适应性饲养至14周龄时,无菌分离脾脏细胞,在植物血凝素刺激下,将脾脏细胞与脂肪间充质干细胞分别以不同比例(5∶1,50∶1)共培养48h,并设立对照组。MTT法检测脾脏细胞增值,流式细胞仪检测CD4~+IL-17~+、CD4~+IFN-γ~+双阳细胞比例的变化。结果:1.原代培养的ADSCs是一种形态类似成纤维样的梭形细胞,FCM结果显示,第三代ADSCs表达CD90,CD44,但不表达CD34和CD45,具有成骨、成脂分化能力。2.在体外小鼠脂肪间充质干细胞能抑制MRL/lpr小鼠脾脏细胞的增殖,且呈剂量依赖性(P<0.05)。3.对照组脾细胞中CD4~+IL-17~+细胞比例为17.3%;CD4~+IFN-γ~+细胞比例为22.5%,脾细胞与脂肪间充质干细胞比例为5∶1和50∶1共培养后,CD4~+IL-17~+细胞比例分别为1.5%和0.8%;CD4~+IFN-γ~+细胞比例分别为1.2%和0.5%,共培养组较对照组均有明显下降。结论:脂肪间充质干细胞可以下调MRL/lpr小鼠脾细胞CD4~+IL-17~+、CD4~+IFN-γ~+双阳细胞的比例,这可能是其发挥免疫调控能力的基础。
  • 【会议】 Sca-1~+间充质干细胞通过Caspase-3信号分子调控脾脏MZB细胞的发育

    作者:胡兴斌 ; 陈要臻 ; 张辉洁 ; 安宁 ; 尹文 关键词:间充质干细胞 ; Sca-1+MSCs ; 边缘带B细胞 ; 造血微环境 机构:第四军医大学第一附属医院西京医院输血科 ; 第四军医大学第一附属医院西京医院输血科 年份:2015
    摘要:目的 :研究骨相关Sca-1+间充质干细胞(Sca-1+MSCs)对脾脏边缘带B细胞(MZB)发育的调控。方法 :取C57/BL6小鼠股骨和胫骨,经胶原酶消化获得MSCs,免疫磁珠分选获得Sca-1+MSCs;Sca-1+MSCs与骨髓细胞共培养后检测MZB的发育;q RT-PCR分析Caspase-3基因表达水平;Caspase-3基因敲除小鼠验证Caspase-3基因对脾脏MZB发育的影响。结果 :体外Sca-1+MSCs抑制骨髓细胞向MZB发育,该过程伴随Caspase-3基因水平降低;Caspase-3基因敲除小鼠脾脏MZB减少;骨髓移植和体外交互培养证实,Caspase-3基因Sca-1+MSCs是导致脾脏MZB细胞减少的原因。结论 :Sca-1+间充质干细胞抑制脾脏边缘带B细胞的发育,且该过程受Caspase-3信号分子调控。
  • 【期刊】 人胚胎骨髓间充质干细胞大鼠脾脏移植后向肝脏的迁移与分化

    刊名:实用医学杂志 作者:陈焱 ; 张丰深 ; 陈耀凯 ; 王宇明 ; 夏杰 关键词:间质干细胞 ; 骨髓 ; 迁移 ; 分化 机构:解放军324医院肝胆外科 ; 解放军324医院肝胆外科 ; 第三军医大学西南医院感染科 年份:2010
    摘要:目的:研究人胚胎骨髓间充质干细胞在大鼠体内移植后向肝脏迁移和在肝内的分化。方法:将人胚胎骨髓间充质干细胞移植到肝损伤合并自身肝细胞再生抑制大鼠的脾脏,术后分时段取肝脏进行免疫组化染色,了解人白蛋白(ALB)、人角蛋白8(CK8)、CK18、CK19的表达情况。结果:人胚胎骨髓间充质干细胞移植后10d大鼠肝脏可见人CK8、CK18、CK19阳性细胞,移植后15d大鼠肝脏组织内可见人ALB阳性细胞。移植后90d仍有阳性细胞检出。结论:人胚胎骨髓间充质干细胞大鼠脾脏移植后能够向肝脏迁移并分化为人肝细胞
  • 【期刊】 脂肪间充质干细胞对MRL/lpr小鼠的治疗效果及对脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响

    刊名:北京大学学报:医学版 作者:张伟 ; 庞春艳 ; 王永福 关键词:脂肪组织 ; 间质干细胞移植 ; 红斑狼疮 系统性 ; 疾病模型 动物 ; 小鼠 近交MRL ; lpr 机构:包头医学院第一附属医院中心实验室包头医学院风湿免疫研究所(内蒙古自治区自体免疫学重点实验室) ; 包头医学院第一附属医院中心实验室包头医学院风湿免疫研究所(内蒙古自治区自体免疫学重点实验室) 年份:2017
    摘要:目的:探讨移植脂肪间充质干细胞(adipose tissue derived stem cells,ADSCs)对MRL/lpr小鼠的治疗作用及对MRL/lpr小鼠脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:15只12周龄的雌性MRL/lpr小鼠采用随机数字表法分为ADSCs治疗组(ADSCs组)、对照组(control组)和环磷酰胺治疗组(cyclophosphamide,CTX组),每组5只。ADSCs组经尾静脉注射ADSCs,每次注射的细胞数为1×106/150μL,每周1次,共注射8次;control组经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液,每周1次,共注射8次;CTX组经尾静脉注射环磷酰胺,剂量为15 mg/kg(体重),每周1次,连用2次,休息2周后重复,共注射4次。留取治疗前和治疗后尿液检测24 h尿蛋白浓度。治疗8周后,处死MRL/Ipr小鼠,以流式细胞仪分析脾细胞Th17/Treg细胞比例变化。结果:(1)24 h尿蛋白浓度变化:治疗前,3组小鼠的24 h尿蛋白浓度差异无统计学意义(P〉0.05);治疗4周后,ADSCs组和CTX组24 h尿蛋白浓度显著低于control组,差异有统计学意义[(5.02±1.61)g/L vs.(7.10±1.63)g/L、(4.90±0.71)g/L vs.(7.10±1.63)g/L,P0.05)。(2)脾脏Treg细胞占CD4+T细胞的百分率:ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Treg细胞占CD4+T细胞的百分率高于control组,3组分别为13.62%±1.87%、14.14%±1.29%、0.71%±1.23%,但组间差异无统计学意义(P〉0.05)。(3)脾脏Th17细胞占CD4+T细胞的百分率:ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Th17细胞占CD4+T细胞的百分率显著低于control组,3组分别为1.43%±0.20%、1.63%±0.65%、6.37%±1.64%,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论:移植ADSCs能够减少MRL/lpr小鼠尿蛋白浓度,治疗时间越长,效果越显著。ADSCs能够降低MRL/lpr小鼠脾脏Th17细胞水平,提高Treg细胞水平,负向调节Th17/Treg细胞平衡,进而发挥抗炎和免疫调节的作用。
  • 【期刊】 骨髓间充质干细胞下调类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8及TLR9的表达

    刊名:中国组织工程研究与临床康复 作者:毛飞 ; 钱晖 ; 朱伟 ; 严永敏 ; 高硕 ; 许文荣 关键词:类风湿性关节炎 ; 骨髓间充质干细胞 ; TLR8 ; TLR9 ; 小鼠 机构:江苏大学基础医学与医学技术学院 ; 江苏大学基础医学与医学技术学院 年份:2011
    摘要:背景:间充质干细胞能够缓解类风湿性关节炎小鼠的症状,但是其机制还不清楚。目的:观察骨髓间充质干细胞对类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9等的影响。方法:DBA/1J小鼠随机分3组,非造模组不造模,阳性对照组和实验组制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎模型。实验组尾静脉注射移植大鼠骨髓间充质干细胞。结果与结论:与阳性对照组比较,实验组小鼠关节直径明显减小,关节炎症细胞浸润程度明显降低,但比非造模组略高;小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8、TLR9和白细胞介素1β的水平较阳性对照组明显降低(P<0.01或P<0.05);阳性对照组与实验组中TLR8与TLR9的表达均无明显相关性(P>0.05)。说明骨髓间充质干细胞下调了类风湿关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9的水平,但TLR8与TLR9的表达无相关性。
  • 【期刊】 间充质干细胞与缺血性心脏病

    刊名:中国体外循环杂志 作者:倪清蓉[1] ; 洪环宇[1] ; 孔静[2] ; 侯慧媛[3] ; 梁宏亮[4] ; 金振晓[5] ; 刘金成[4] 关键词:缺血性心脏病 间充质干细胞 机构:第四军医大学学员一旅 ; 第四军医大学学员一旅 年份:2016
    摘要:缺血性心脏病是现代社会危害人类健康的重大疾病。心肌细胞是一种传统意义上的终末分化细胞,缺血坏死或凋亡后再生困难,因此,目前临床所有的再血管化治疗难以恢复已死亡的细胞干细胞疗法为缺血性心脏病提供了新的思路。其中骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)获取相对容易,免疫源性低,不涉及道德伦理学及法律问题,在体外培养容易大量扩增且仍然保留"干细胞"特性,而成为修复损伤心肌的最佳候选细胞
  • 【期刊】 间充质干细胞与缺血性心脏病

    刊名:《中国体外循环杂志》 作者:倪清蓉 ; 洪环宇 ; 孔静 ; 侯慧媛 ; 梁宏亮 ; 金振晓 ; 刘金成 关键词:缺血性心脏病 ; 间充质干细胞 机构:第四军医大学学员一旅 ; 第四军医大学学员一旅 ; 第四军医大学研究生管理大队 ; 第四军医大学第一附属医院眼科 ; 第四军医大学第一附属医院心血管外科 年份:2016
    摘要:缺血性心脏病是现代社会危害人类健康的重大疾病。心肌细胞是一种传统意义上的终末分化细胞,缺血坏死或凋亡后再生困难,因此,目前临床所有的再血管化治疗难以恢复已死亡的细胞干细胞疗法为缺血性心脏病提供了新的思路。其中骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)获取相对容易,免疫源性低,不涉及道德伦理学及法律问题,在体外培养容易大量扩增且仍然保留"干细胞"特性,而成为修复损伤心肌的最佳候选细胞
  • 【期刊】 间充质干细胞衰老

    刊名:《老年医学与保健》 作者:李保界 关键词:间充质干细胞 ; 细胞衰老 ; 表面标志 ; Cells ; CDl05 ; 成骨细胞 ; 脂肪细胞 ; 软骨细胞 机构:上海交通大学 ; 上海交通大学 年份:2015
    摘要:间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)是来源于中胚层的多潜能细胞,在体外能够贴壁增殖,并具有分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞的能力。MSCs的表面标志目前尚不能完全确定,通常认为表达的表面标志有CDl05、CD90和CD73,但是不表达CD34、CD45、CD19和CD14。
  • 【期刊】 骨髓间充质干细胞对肝脏的影响

    刊名:实用肝脏病杂志 作者:孙文静 ; 刘凯军 ; 文良志 ; 陈东风 关键词:骨髓间充质干细胞 ; 肝脏 ; 细胞再生 ; 细胞间相互作用 机构:第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化内科 ; 第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化内科 年份:2017
    摘要:骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是成体干细胞主要类型之一,能产生所有的间质谱系细胞,可修复受损的组织,具有干细胞的特性.近年来,随着BMSCs在治疗慢性肝病中的临床研究以及基础研究的不断深入,对肝- 骨轴双向调节模式、骨髓细胞及BMSCs对肝脏的影响也有了进一步的了解.
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