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  • 【论文】 白藜芦醇在体外及体内对皮肤鳞状细胞癌的抗肿瘤效应及机制研究

    作者:胡蕴绮 关键词:白藜芦醇 ; 鳞状细胞癌 ; DMBA ; TPA ; 细胞周期 ; 细胞凋亡 机构:第二军医大学 ; 第二军医大学 年份:2017
    摘要:一、研究背景与目的皮肤鳞状上皮细胞癌(Squamous cell carcinoma,SCC)是一种在我国高发的皮肤系统恶性肿瘤,一经确诊其首选治疗策略是手术切除,但因为它在患者身上发展缓慢、常无自觉症状,容易被忽视和发现不及时,导致增加疾病风险的同时,增大手术创面,影响患者美观。此外,SCC具有侵袭生长与转移等特性,若发现较晚,需结合辅助的化疗和放射治疗。但是长期的放疗与化疗会使患者产生各种相关并发症,同时化疗药物的使用也会使肿瘤细胞产生耐药性。因此,近几年来,研究者们致力于发现日常饮食中高效低毒的天然产物的抗癌潜力,希望预防皮肤鳞状上皮癌的发生和降低化放疗药物的使用。白藜芦醇(Resveratrol,RES)属于具有广泛的药理学作用的多酚类天然产物,其药理作用包括抗肿瘤、抗病毒、预防阿奇霉素引发的心脏毒性、预防心脑血管疾病、抗帕金森病等。同时,基于细胞系与实验动物的体内外肿瘤模型研究和基于不同人群的临床试验均发现白藜芦醇及其低聚物也是实体肿瘤与血液系统肿瘤的有效化学预防剂。虽然白藜芦醇被证明具有广谱的抗肿瘤作用,然而缺乏对白藜芦醇在皮肤肿瘤中的系统研究,尤其是基于动物模型的体内研究。因此,本研究首先在体外水平上利用两种SCC代表细胞系详尽研究白藜芦醇抗肿瘤效应的浓度梯度与时间梯度的关系,并初步探索其抗肿瘤效用的细胞机制和分子机制;然后构建皮肤SCC的化学诱导大鼠模型,在体内水平进一步验证白藜芦醇对SCC的抗肿瘤作用及其作用机理。论文将在白藜芦醇抗SCC的体内外系统研究中,探索其药理活性与作用剂量和作用时间的依赖性,并揭示白藜芦醇发挥抗SCC效应与周期及凋亡调节的关系,以期为白藜芦醇在SCC的预防与治疗研发中提供新的方向,为白藜芦醇在SCC预防与治疗的剂量选择上提供切实的数据基础。二、研究方法1、基于鳞状细胞癌细胞系的白藜芦醇体外抗肿瘤活性研究Ⅰ:在SCC细胞系SCC1与Colo-16中,采用CCK-8法探索白藜芦醇抑制肿瘤细胞增殖活力的浓度依赖性与时间依赖性;Ⅱ:在对白藜芦醇给药更加敏感的细胞系SCC1中,采用Annexin-V/PI双染联合流式细胞术的方式考察白藜芦醇是否具有诱导SCC细胞凋亡的能力;Ⅲ:在SCC细胞系中,通过Western blotting、半定量PCR与实时荧光定量PCR考察白藜芦醇对细胞凋亡与细胞周期通路关键基因m RNA与表达水平的影响,初步探索白藜芦醇发挥体外细胞杀伤活性的信号传导途径。2、基于DMBA/TPA刺激的大鼠皮肤SCC模型的白藜芦醇体内抗肿瘤活性研究Ⅰ:本研究中的大鼠皮肤SCC模型使用经典的二阶段DMBA/TPA化学诱导方法建立。将Wistar实验大鼠分为四组:丙酮空白对照组(Control)、化学诱导模型组(DMBA)、低剂量白藜芦醇处理组(DMBA+RES-1)与高剂量白藜芦醇处理组(DMBA+RES-2)。通过测量四组大鼠体重、肿瘤发生率、肿瘤抑制率、肿瘤体积与肿瘤重量等指标考察两个剂量的白藜芦醇的体内抗肿瘤活性;Ⅱ:通过流式细胞术周期分布分析、Ki-67免疫组化增殖染色、Annexin-V/PI双染联合流式细胞术凋亡分析以及TUNEL凋亡组织化学染色共同考察白藜芦醇在SCC动物模型中是否具有周期阻滞与凋亡诱导的作用;Ⅲ:最后在该SCC动物模型中通过Western blotting检测白藜芦醇对细胞周期与凋亡通路关键基因的调节作用。与其在体外的信号通路调节作用相对应,在体内验证白藜芦醇抗SCC的信号传导通路,为白藜芦醇抗SCC分子机制的深入探索提供方向。三、研究结果1、基于鳞状细胞癌细胞系的白藜芦醇体外抗肿瘤活性研究Ⅰ:白藜芦醇对SCC1细胞可以发挥明显的细胞毒作用。31.25μM的白藜芦醇孵育72h可以将SCC1的细胞活力抑制到20%。白藜芦醇在7.81μM-31.25μM的中等浓度范围内,其细胞活力抑制效果与作用浓度和作用时间呈明显正相关;而只有高浓度的白藜芦醇才对Colo-16具有较弱的抑制活性,仅能将Colo-16的细胞活力抑制到80%;Ⅱ:白藜芦醇能显著的促进SCC1细胞的凋亡,且具有明显的浓度依赖性;Ⅲ:白藜芦醇能显著的且不具浓度依赖性的上调SCC1细胞凋亡通路基因p53、p21、Bax与caspase-3的m RNA水平与蛋白水平,同时还能抑制SCC1细胞G2/M周期检查点基因cyclin B与cdc2的转录与表达水平。2、基于DMBA/TPA刺激的大鼠皮肤SCC模型的白藜芦醇体内抗肿瘤活性研究Ⅰ:与对照组相比,模型组大鼠均产生肉眼可见的肿瘤团块,且该团块中有明显角化异常细胞,说明DMBA/TPA诱导的二阶段皮肤SCC模型成功;Ⅱ:DMBA组荷瘤大鼠体重在实验周期内几乎持平没有增长,而Control组体重则是按照正常趋势增长。而与模型组相比,白藜芦醇处理组的荷瘤大鼠体重则保持增长,尤其是高剂量白藜芦醇处理组大鼠的体重增长趋势与对照组类似。同时,两个剂量的白藜芦醇均能减少肿瘤发生率、肿瘤体积与肿瘤重量;并且高剂量白藜芦醇处理组比低剂量组表现出更良好的肿瘤生长抑制效果;Ⅲ:与DMBA组相比,高剂量与低剂量白藜芦醇处理组细胞处于G1期的比例减少而处于G2/M期的比例明显增多;处于早期凋亡与晚期凋亡期的比例也显著升高,同时Ki-67阳性处于增殖周期的细胞比例减少,说明在DMBA/TPA刺激的皮肤SCC模型中白藜芦醇同时具有G2/M期阻滞与凋亡诱导的作用;IV:与Control相比,两个白藜芦醇处理组DMBA+RES-1与DMBA+RES-2的凋亡基因p53、p21、Bax与caspase-3表达被上调,凋亡抑制基因survivin表达被下调,G2/M细胞周期检查点基因cyclin B与cdc2表达被下调,说明白藜芦醇具有周期阻滞与凋亡诱导的体内活性。四、结论1、基于鳞状细胞癌细胞系的白藜芦醇体外抗肿瘤活性研究Ⅰ:对比白藜芦醇对SCC1与Colo-16细胞系的细胞毒作用浓度与时间趋势图,发现白藜芦醇的细胞杀伤作用具有明显的选择性。白藜芦醇对Colo-16仅在高浓度表现出较弱的细胞抑制活性,也没有明显的浓度依赖性;而在7.81μM-31.25μM范围内的白藜芦醇对SCC1的细胞毒作用具有明显的时间梯度与浓度梯度依赖性;Ⅱ:白藜芦醇可以浓度依赖的诱导SCC1细胞进入凋亡程序,其对SCC1细胞展现出来的细胞毒作用可能依赖于诱导细胞凋亡;Ⅲ:白藜芦醇可能通过调控p53-p21-Bax-caspase-9途径的转录与表达水平诱导细胞凋亡发挥其细胞毒活性;另一方面,白藜芦醇也可以调节周期检查点中心调控蛋白cyclin B与cdc2的m RNA与蛋白水平,然而在该细胞系中白藜芦醇并没有对细胞周期分布产生影响,可能还有除G2/M期检查点之外的途径共同参与对细胞的周期调控。2、基于DMBA/TPA刺激的大鼠皮肤SCC模型的白藜芦醇体内抗肿瘤活性研究Ⅰ:低剂量(1mg/kg/qw)与高剂量(2mg/kg/qw)白藜芦醇处理均能够有效恢复荷瘤大鼠体重增长趋势;综合白藜芦醇对荷瘤大鼠体重、肿瘤发生率、肿瘤抑制率、肿瘤体积与肿瘤重量的影响,两个剂量的白藜芦醇均具有SCC肿瘤抑制作用,并且高剂量的白藜芦醇比低剂量抑制效果更加显著;Ⅱ:白藜芦醇可能通过抑制肿瘤细胞增殖、将肿瘤细胞周期阻滞在G2/M期及促进肿瘤细胞凋亡发挥上述抗肿瘤作用;Ⅲ:白藜芦醇可能通过p53-p21-Bax-caspase-9途径与survivin依赖的方式诱导细胞凋亡,并通过p53-cyclin B/cdc2途径将细胞周期阻滞在G2/M期。综上所述,白藜芦醇具有良好的体内外抗SCC活性,进一步探索其体内剂量范围、作用机制乃至联合用药策略将会加速白藜芦醇在预防与治疗SCC中的应用。
  • 【期刊】 社区老年人自我护理能力与自我效能感的相关性

    刊名:中国老年学杂志 作者:胡蕴绮 ; 潘菁 ; 万霞 ; 孔庆芳 ; 贺亚楠 ; 周兰姝 关键词:自我护理能力 ; 自我效能 机构:第二军医大学护理学院 ; 第二军医大学护理学院 年份:2015
    摘要:目的明确社区老年人的自我护理能力和自我效能感的相关性。方法采用自我护理能力测定量表(ESCA)和健康行为能力自评量表(SRAHP)调查兰州市城区524名老年人的自我护理能力和自我效能感水平,并分析其相关性。结果 1社区老年人自我护理能力受一般人口学特征影响无显著性(P>0.05)。2社区老年人自我护理能力与自我效能均不够理想;3社区老年人自我护理能力与自我效能显著相关(P<0.01)。结论在社区中应重视提高老年人自我效能,从而有效改善老年人的自我护理能力。
  • 【期刊】 兰州市城区老年人的自我护理能力及其影响因素

    刊名:中国老年学杂志 作者:胡蕴绮 ; 周兰姝 关键词:自我护理能力 ; 社区护理 机构:第二军医大学护理学院 ; 第二军医大学护理学院 年份:2015
    摘要:自我护理是个人为了维持生命、健康和完好状态等自身利益而主动采取和完成的实践活动〔1〕。在慢性疾病预防中,家庭支持被认为是有效的积极保护因素。本研究旨在探讨影响老年人自我护理能力的主要相关因素。1对象与方法1.1研究对象2011年2~5月抽取兰州市城关区、七里河区、安宁区、西固区、红固区五区524名60岁及以上老年人作为调查对象。男271名,女253名;年龄60~92〔平均(69±
  • 【期刊】 老年人自我感知老化的研究进展

    刊名:护理研究 作者:胡蕴绮 ; 付莉莉 ; 周兰姝 关键词:老年人 ; 自我感知老化 ; 研究 机构:中国人民解放军第二军医大学护理学院 ; 中国人民解放军第二军医大学护理学院 ; 卫生部人才交流服务中心 ; 中国人民解放军第二军医大学 年份:2013
    摘要:随着人口平均寿命的增长、医疗资源的日益匮乏,如何帮助老年人利用有限的医疗资源,保持身体健康、提高生活质量、延长寿命、降低病死率已成为老年护理领域专家关注的重要课题。在各种各样调查老年人生理功能、心脑血管病发生情况、躯体功能、生存时间、死亡率、健康行为生活方式等影响因素的研究中,专家们发现在控制年龄、性别、种族、文化程度、经济状况、身体功能等相关变量后,有一种心理因素对老年人的健康结局起到
  • 【期刊】 兰州市城市社区老年人生活状况调查

    刊名:社区医学杂志 作者:胡蕴绮 ; 胡再平 ; 周兰姝 关键词:老年人 ; 生活状况 ; 社区服务 ; 生活质量 机构:中科院兰州分院卫生所 ; 中科院兰州分院卫生所 ; 第二军医大学护理学院 年份:2013
    摘要:目的了解兰州市城市社区老年人生活状况,为社区医务指导者分配医疗资源,开展老年人工作提供理论依据。方法 2012年3—9月采用自行设计调查问卷,对兰州市城关区、七里河区等5个社区342名65岁以上老年人生活状况进行横断面调查。结果调查老年人以空巢老人为主,健康状况不佳,生活方式需要优化。其中79.8%的老人为空巢老人;20.8%患有高血压、16.1%患有心脑血管疾病、12.9%患有糖尿病、7.6%患有肾病、5.8%患有肝病、18.4%患有关节炎或风湿病;34.2%吸烟,14.0%吸烟每天超过15根;喝酒误事每月超过1次占28.7%;每周吃1~2次水果或者不吃占46.5%,每天吃蔬菜品种低于4种的接近80.0%。结论社区老年人亟需社会支持,社区卫生服务机构应加大服务力度,以提高老年人生活质量。
  • 【期刊】 社区老年人健康行为自我效能及其影响因素

    刊名:中国老年学杂志 作者:胡蕴绮 ; 周兰姝 关键词:社区 ; 自我效能 机构:上海第二军医大学护理学院 ; 上海第二军医大学护理学院 年份:2013
    摘要:目的调查分析老年人健康行为自我效能感状况及其影响因素。方法采用一般资料问卷和健康行为自我效能量表,以方便抽样法对社区524例≥60岁老年人进行调查。结果社区老年人健康行为自我效能总分为(76.9±17.8),其中488例(93.1%)表现为中高等水平自我效能;总自我效能与文化程度呈正相关(P<0.01),与婚姻状况(P<0.01)及经济状况相关(P<0.05)、与年龄呈负相关(P<0.01)。结论兰州市社区老年人健康行为自我效能较高;年龄、文化程度、婚姻状况、经济状况是影响社区老年人健康行为自我效能感的因素。
  • 【期刊】 中文版健康行为能力自评量表的信效度研究

    刊名:中华护理杂志 作者:胡蕴绮 ; 周兰姝 关键词:自我评价 ; 自我效验 机构:第二军医大学护理学院 ; 第二军医大学护理学院 年份:2012
    摘要:目的探讨健康行为能力自评量表(SRAHP)在老年人群健康行为自我效能评价中的信效度。方法对524例兰州老年人实行SRAHP的信度效度分析。结果总量表Cronbach'sα系数为0.95,4个维度的Cronbach'sα系数分别为0.86~0.89。总量表的分半系数为0.85,4个维度的分半系数为0.82~0.85。各分量表与总量表分值间的相关系数分别为0.84~0.87,均具有统计学意义。前4个公因子的方差贡献率共60.12%。结论中文版SRAHP简便、易测,具有很高的信度和较高的效度,具有一定的实用价值,适合在我国老年人群中推广使用。
  • 【期刊】 概念图在儿科护理学教学中的应用

    刊名:中华护理教育 作者:胡蕴绮 ; 钱嬿 ; 厉瑛 关键词:学生 ; 护理 ; 儿科护理学 ; 教学方法 ; 概念图 机构:第二军医大学附属长海医院 ; 第二军医大学附属长海医院 年份:2011
    摘要:目的探讨概念图在儿科护理学教学的应用方法及效果。方法在2006级45名护理本科生(试验组)儿科护理学教学中实施概念图教学策略,在2005级35名护理本科生(对照组)中采用传统教学方法,比较两组在理论考试中相关试题的得分,并通过问卷调查了解试验组对概念图教学的反馈情况。结果试验组理论考试中采用概念图教学的相关试题得分为(8.25±0.55)分,对照组得分为(7.68±0.47)分,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对试验组的调查结果显示,92.4%学生对概念图的使用较满意,88.4%学生认为概念图能促进护理专业课学习,82.1%学生认为做图有困难,55.6%学生建议改进绘图方式方法。结论将概念图用于儿科护理学教学可有效提高学生的成绩,促进其进行有意义的学习。
  • 【期刊】 护理本科生职业认同感研究现状

    刊名:解放军护理杂志 作者:胡蕴绮 ; 仇瑶琴 ; 胡再平 ; 杜世正 ; 沈园园 ; 郁晓路 ; 袁长蓉 关键词:护生 ; 职业认同感 ; 护理教育 机构:第二军医大学护理学院 ; 第二军医大学护理学院 ; 中国科学院兰州分院卫生所 年份:2009
    摘要: