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  • 【期刊】 噬菌体展示随机肽库技术的医学研究应用

    刊名:《华夏医学》 作者:史云龙 ; 刘永明 关键词:噬菌体展示随机肽库 ; 多肽筛选 ; 抗原表位 机构:桂林医学院生物化学与分子生物学教研室 ; 桂林医学院生物化学与分子生物学教研室 年份:2016
    摘要:噬菌体展示随机肽库是将编码外源性多肽的DNA序列插入噬菌体外壳蛋白基因,产生由数十亿种随机肽段与噬菌体外壳蛋白以融合形式呈现在噬菌体表面的重组噬菌体库。近年来,噬菌体展示随机肽库已成为筛选蛋白和多肽的重要生物技术,并被广泛应用于医学研究。笔者就其在肿瘤和自身免疫性疾病研究以及疫苗研制中的应用现状作一综述。
  • 【期刊】 定量PCR技术快速分析噬菌体展示肽库的应用

    刊名:标记免疫分析与临床 作者:邬兰 杜同信 俞杨 焦杰 王自正 关键词:噬菌体展示 实时荧光定量聚合酶链反应 文库筛选 机构:核医学科实验诊断部分子诊断室 ; 核医学科实验诊断部分子诊断室 ; 南京医科大学附属南京医院/南京市第一医院 年份:2016
    摘要:目的建立无需转染菌株的快速定量方法,用以分析噬菌体展示肽库筛选。方法选取Ph.D.-C7C噬菌体展示肽库,进行梯度稀释并提取基因组,在其载体序列上设计一对通用引物,运用SYBR Green的方法进行荧光定量PCR扩增,通过计算该方法的特异性、精密度和线性范围来确定该检测方法的可行性。结果 通过溶解曲线得知该对引物可特异性筛选噬菌体展示七肽库。通过计算每个浓度的Ct值及其偏差可发现,该体系在2× 10^4pfu/mL-2×10^10pfu/mL的浓度范围内线性关系良好,且在2×10^5pfu/mL-2×10^10pfu/mL的浓度范围内批间不精密度小于15%。结论 建立的荧光定量PCR体系可以避免转染菌株所带来的繁琐人工劳动,并可以特异、准确、快速的对噬菌体展示肽库进行定量分析。
  • 【期刊】 利用噬菌体多肽库筛选卵巢癌细胞特异性结合肽

    刊名:中国性科学 作者:王乐丹 ; 李文桔 ; 胡越 关键词:卵巢癌 ; 噬菌体展示技术 ; 噬菌体多肽库 ; 体外快速差减筛选技术 ; 多肽 机构:温州医科大学附属第二医院妇科 ; 温州医科大学附属第二医院妇科 年份:2016
    摘要:目的:利用噬菌体7肽库进行体外快速差减筛选(biopanning and rapid analysis of selective interactive ligands,BRASIL),从而获得卵巢癌细胞株HO-8910细胞表面特异性结合肽。方法:以中国仓鼠卵巢细胞株CHO为吸附细胞,卵巢癌细胞株HO-8910为靶细胞,利用噬菌体展示技术联合差减筛选策略,经过连续5轮生物淘洗,随机挑选13个噬菌体单克隆进行DNA测序,利用噬菌体竞争结合实验、ELISA实验、细胞免疫染色、细胞免疫荧光、合成多肽的竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体的亲和性及特异性。结果:筛选出的噬菌体NPMIRRQ与卵巢癌细胞株HO-8910有较高的亲和性及特异性。结论:阳性噬菌体表面展示的多肽NPMIRRQ可能为卵巢癌的早期诊断和转移复发监测提供新思路。
  • 【期刊】 噬菌体肽库技术筛选肿瘤靶向短肽的研究进展

    刊名:重庆医学 作者:张洋 ; 张小明 ; 刘刚 关键词:噬菌体肽库 ; 肿瘤 ; 靶向短肽 机构:四川省宜宾市第一人民医院放射科 ; 四川省宜宾市第一人民医院放射科 ; 医学影像四川省重点实验室 年份:2015
    摘要:噬菌体展示技术是一项特殊的基因重组表达技术,亦是一种强大的筛选工具。1985年,Smith等成功地创立了噬菌体展示技术;1990年,Scott等在噬菌体展示技术的基础上发展并构建了噬菌体展示随机肽库。噬菌体肽库技术是一种新兴的药物发现工具[1],通过噬菌体随机肽库筛选获得的肽可以作为分子载体运载药物,起到生物导弹的功能。筛选的肽也可以直接与药物靶点分子特异性结合,起到生物治疗的作用。近年
  • 【期刊】 M13噬菌体肽库扩增及兔抗血清制备

    刊名:东北农业大学学报 作者:任晓峰 ; 马晓微 关键词:噬菌体肽库 ; 兔抗M13噬菌体血清 ; 间接ELISA 机构:东北农业大学动物医学学院 ; 东北农业大学动物医学学院 年份:2013
    摘要:为制备M13噬菌体多克隆抗体,将噬菌体十二肽原始文库进行大量扩增,作为免疫原制备兔抗M13的多克隆抗体血清并进行间接ELISA鉴定。结果表明,该多抗效价达1 1 048 576,说明此多抗可与扩增噬菌体文库发生很好的抗原抗体反应。将制备的噬菌体M13多克隆抗体与商业化M13抗体水平比较,制备多抗与商业化M13抗体效果相当。本研究成功制备兔抗M13噬菌体多克隆抗体,为深入研究噬菌体展示技术提供了材料。
  • 【期刊】 噬菌体展示肽库筛选VPAC1高亲和力结合多肽

    刊名:第三军医大学学报 作者:唐波 ; 黄定德 ; 郑磊 ; 任浩 ; 李前伟 关键词:VPAC1 ; 稳定转染 ; 噬菌体展示肽库 ; 十二肽 ; 分子探针 机构:第三军医大学西南医院核医学科 ; 第三军医大学西南医院核医学科 ; 北京师范大学化学学院放射性药物教育部重点实验室 年份:2013
    摘要:目的通过噬菌体展示肽库技术筛选VPAC1高亲和力结合十二肽配体,并进行特异性和亲和力鉴定。方法建立稳定表达VPAC1的真核细胞系;利用噬菌体肽库展示技术进行全细胞差减筛选,随机挑取40个噬菌体克隆进行测序,初步鉴定确定阳性克隆,明确外源十二肽序列,固相合成该十二肽;利用体外竞争结合ELISA及流式细胞分析,鉴定目标多肽与VPAC1受体结合的特异性及亲和力。结果成功构建稳定表达VPAC1细胞系;经过4轮差减筛选,回收噬菌体逐轮得到富集,随机挑取40个克隆测序,共得到15条序列不同的多肽,经ELISA鉴定有7个克隆与细胞有特异性高结合能力;阳性噬菌体克隆与细胞结合通过多肽VP1介导;VP1能特异高亲和地与VPAC1受体结合。结论通过噬菌体展示肽库技术成功筛选得到与VPAC1高亲和力特异结合十二肽。
  • 【期刊】 噬菌体肽库筛选隐丹参酮高亲和性结合肽

    刊名:中国药科大学学报 作者:龙军 ; 袁冬平 ; 陆茵 ; 林洁 关键词:隐丹参酮 ; 噬菌体肽库 ; 多肽 ; 生物信息学 机构:南京中医药大学药学院 ; 南京中医药大学药学院 ; 南京中医药大学药理学教研室 ; 南京中医药大学江苏省中药药效与安全性评价重点实验室 ; 云南大学生命科学学院 年份:2013
    摘要:通过噬菌体十二肽库,以隐丹参酮为靶分子,筛选与隐丹参酮具有高亲和性的结合短肽。经过噬菌体十二肽库的3轮淘选,获得阳性噬菌体克隆,挑选结合力强的克隆进行测序,得到隐丹参酮的高亲和性结合短肽序列,并进行生物信息学分析。本试验共筛选到10个隐丹参酮的高亲和性结合短肽序列,有614种蛋白质与其结构相匹配。多肽序列的核心序列为VILDFGEI。本研究获得了与隐丹参酮结合的高亲和性多肽,为深入研究隐丹参酮的作用靶点以及分子作用机制提供了实验依据和结构基础。
  • 【期刊】 噬菌体随机肽库筛选动脉粥样硬化相关多肽

    刊名:细胞与分子免疫学杂志 作者:肖智 ; 赵序雯 ; 赵明 ; 杨高红 关键词:噬菌体肽库 ; 动脉粥样硬化 ; 多肽合成 机构:南方医科大学病理生理学教研室 ; 南方医科大学病理生理学教研室 ; 广东省休克微循环重点实验室 ; 广东省功能蛋白质组学重点实验室 ; 广州市天河区林和街社区卫生服务中心 年份:2013
    摘要:目的利用噬菌体展示技术筛选动脉粥样硬化疾病相关多肽,并验证所筛选的阳性噬菌体以及合成蛋白片段结合活性。方法以动脉粥样硬化患者血清为靶分子,噬菌体12肽库亲和筛选与之结合的阳性噬菌体。经过3轮筛选,从滴度测定平板上随机挑取10个阳性克隆,ELISA鉴定其亲和性。提取阳性噬菌体单链DNA并测序得到12肽序列,通过生物信息学查找相似天然蛋白,合成24肽,最后鉴定其结合活性。结果 ELISA显示阳性噬菌体均与患者血清有较强的结合力,序列为GPRPPSAPNMPL,合成24肽也呈现出较高的结合活性。结论噬菌体展示可以获得动脉粥样硬化相关多肽序列,为该病的免疫研究奠定了基础。
  • 【期刊】 噬菌体肽库在宫颈癌血清肿瘤标志物筛选中的应用

    刊名:现代肿瘤医学 作者:刘美红 ; 贺海平 关键词:宫颈癌 ; 噬菌体肽库 ; 肿瘤标志物 机构:广西医科大学附属肿瘤医院肿瘤内科 ; 广西医科大学附属肿瘤医院肿瘤内科 ; 广西医科大学附属肿瘤医院信息中心 年份:2015
    摘要:目的:用噬菌体随机12肽库对宫颈癌患者血清进行差异性筛选,筛选出能与宫颈癌患者血清特异性结合的肿瘤标志物。方法:应用噬菌体随机12肽库对宫颈癌患者和正常人血清进行三轮差异性筛选,用ELISA法检测噬菌体克隆对宫颈癌患者血清结合的特异性。结果:经过三轮筛选,噬菌体富集率逐轮提高,提高近100倍。用ELISA法对50例宫颈癌患者血清和50例健康者血清检测验证,其中获得一株与宫颈癌患者血清特异结合较好的噬菌体,对宫颈癌的早期诊断具有潜在价值。结论:筛选出能与早期宫颈癌患者血清高亲和力特异结合的短肽,为研究宫颈癌肿瘤标志物及宫颈癌的早期诊断奠定了基础。
  • 【期刊】 生物医药多肽库研发和生产基地项目

    刊名:乙醛醋酸化工 年份:2018
    摘要:<正>该项目位于湖南省株洲市云龙示范区,由湖南中晟全肽生化有限公司投资建设,拟建生物医药多肽库研发和生产基地项目,建设办公楼等配套设施。工艺流程:多肽药物--裂解--过滤、洗涤--浓缩--沉淀--离心、洗涤--真空干燥--溶解过滤--脱盐、纯化--液相纯化--浓缩--冻干--成品--入库。项目总投资6000万元。
  • 【期刊】 用噬菌体肽库筛选IBDV单克隆抗体的模拟表位

    刊名:中国免疫学杂志 作者:李向红 ; 陈芳芳 ; 黄成斌 ; 余为一 关键词:噬菌体肽库 ; 单克隆抗体 ; IBDV ; 模拟表位 机构:安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室 ; 安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室 年份:2012
    摘要:目的:筛选法氏囊病毒(IBDV)单克隆抗体所针对的模拟抗原表位。方法:以纯化的3株IBDV单克隆抗体为靶分子用噬菌体12肽库筛选相应抗原模拟表位;应用间接和竞争ELISA鉴定所筛选的阳性样品;最后对与抗体高亲和结合的噬菌体进行测序分析。结果:经过四轮淘洗,随机挑取30个克隆经间接ELISA鉴定,发现其中22个克隆结合活性较高。进一步应用竞争ELISA,获得14个噬菌体克隆,其抑制率高达50%以上。对这些噬菌体进行DNA测序,并分析比对了IBDV相应序列,确定了3个抗原模拟表位。结论:通过噬菌体随机肽库成功筛选出3个IBDV模拟表位,为进一步研究IBDV抗原性质奠定了基础。
  • 【期刊】 15种氨基酸随机肽库的小盒式DNA编码文库的构建

    刊名:中国生物工程杂志 作者:卢明锋 ; 康寿凯 ; 张月杰 ; 张红雨 关键词:随机肽库 ; 简化氨基酸 ; 小盒式文库 机构:山东师范大学生命科学学院 ; 山东师范大学生命科学学院 ; 山东理工大学生命科学学院 ; 华中农业大学生命科学学院 年份:2012
    摘要:采用小盒式DNA编码文库的构建策略,选取在进化上可能起源较早的15种氨基酸,按照其简并密码子合成了一个为10个随机氨基酸编码的小盒式DNA模板,经过连续3轮的PCR扩增、酶切及连接的小盒式文库组装过程,成功构建了一个文库容量达1.31×1012/ml,随机编码区长达97个氨基酸的小盒式DNA编码文库。
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