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  • 【期刊】 罗氏沼虾野田村病毒3种检测方法比较

    刊名:江苏农业科学 作者:林锋 ; 郝贵杰 ; 盛鹏程 ; 曹铮 ; 吴颖蕾 ; 刘莉 关键词:罗氏沼虾野田村病毒 ; 免疫胶体金技术 ; RT-PCR ; RT-LAMP ; 检测 年份:2014
    摘要:胶体金免疫层析技术、RT-PCR、RT-LAMP采用的抗体和特异性引物均针对罗氏沼虾野田村病毒的衣壳蛋白和编码基因RNA2。采用这3种方法分别检测罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV),结果表明,免疫胶体金检测试纸能快速检测感染罗氏沼虾野田村病毒的幼虾,但灵敏度较低,能用来检测具有疑似病症的样品;RT-PCR和RT-LAMP检测灵敏度都优于免疫胶体金检测试纸,但RT-PCR方法操作步骤繁琐,所耗时间较长,而RT-LAMP方法操作简便、用时短、不需要特殊仪器,在产物中加入核酸染料后检测结果可用肉眼直接判定。因此,RT-LAMP方法更适合基层和现场检测,其相关试剂盒的研发更具有应用前景。
  • 【专利】 罗氏沼虾野田村病毒检测试剂盒及检测方法

    作者:石坚 ; 钱东 ; 林峰 ; 宋之琦 ; 徐锦余 年份:2012
    摘要:本发明公开了一种罗氏沼虾野田村病毒检测试剂盒及检测方法。本发明的试剂盒结合了等温扩增和核酸试纸条快速检测的特点,检测过程无需昂贵的仪器设备;采用核酸试纸条方法进行显色,提高了检测可靠性和结果易判断性。本试剂盒检测成本低、使用方便,对人和环境安全,可替代已有的相关检测方法。本发明的试剂盒可在野外生产现场和各级实验室使用,对加强罗氏沼虾野田村病毒监测,及时发现并控制感染病毒沼虾个体传播、尽早发现并预防疫病大规模暴发流行等,具有推广应用价值。
  • 【期刊】 罗氏沼虾野田村病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

    刊名:南方农业学报 作者:黄光华 ; 童桂香 ; 黎小正 ; 李旻 ; 黄国秋 ; 卢小花 ; 陈静 ; 吴明媛 ; 韦信贤 关键词:罗氏沼虾 ; 野田村病毒 ; 白尾病 ; 一步法实时荧光定量RT-PCR ; 检测 机构:广西水产科学研究院 ; 广西水产科学研究院 年份:2015
    摘要:【目的】建立一种检测罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)的实时荧光定量RT-PCR,为防控罗氏沼虾白尾病(White tail disease,WTD)提供技术支持。【方法】将MrNV衣壳蛋白基因片段(No.HQ287005)克隆到pGM-T载体,选取阳性重组质粒用SalⅠ酶切获得线性化转录模板DNA,经体外转录获得标准品RNA;在MrNV基因序列的保守区域设计1对扩增片段为119 bp的特异性引物,以标准品RNA为模板进行引物浓度筛选及标准曲线制定,并对建立的检测方法进行标准曲线和融解曲线分析及特异性、敏感性、重复性、临床样品检验试验。【结果】建立的一步法实时荧光定量RT-PCR定量范围宽,检测模板范围在1×10~1~1×10~8拷贝/μL时,其标准曲线呈良好的线性关系;融解曲线表现为单一波峰,T_m为81.17~81.25℃;扩增曲线呈明显的S形,以C_t值35.00为界限,灵敏度约为10个病毒粒子,是常规RT-PCR的1000倍。该方法仅对MrNV具有良好的特异性,其组内和组间试验的C_t值变异系数分别为0.15%~0.83%和0.56%~0.95%;对83份罗氏沼虾临床样品进行检测,其结果与套式RT-PCR的检测结果一致。【结论】针对MrNV检测建立的一步法实时荧光定量RT-PCR具有快速、便捷、灵敏、准确等优点,且对样品的检测范围宽,适用于MrNV隐性感染和发病诊断。
  • 【专利】 罗氏沼虾野田村病毒RT-LAMP-LFD检测方法及其检测试剂盒

    作者:林锋 ; 沈锦玉 ; 刘莉 ; 曹铮 ; 郝贵杰 ; 盛鹏程 ; 吴颖蕾 年份:2013
    摘要:本发明公开了一种罗氏沼虾野田村病毒RT-LAMP-LFD检测试剂盒及其检测方法。该检测方法是根据GenBank公布的罗氏沼虾野田村病毒(MrNV)序列的保守区域设计了MrNVRT-LAMP-LDF反应系统所需引物与探针;采用本发明人配制的病毒RNA提取试剂提取MrNV病毒RNA,使用本发明建立的MrNVRT-LAMP反应体系进行检测,依据反应体系中加入的检测探针,在反应结束后利用核酸快速检测试纸判定结果。同现在该病毒的常用检测技术相比,本发明具有简便快速、特异性好、灵敏度高的特点,而且可用于生产一线的技术人员和养殖户现场使用,有利于罗氏沼虾白体病的诊断与预防。
  • 【期刊】 罗氏沼虾野田村病毒中国株RT-LAMP-LFD快速检测方法的研究

    刊名:病毒学报 作者:林锋 ; 刘莉 ; 郝贵杰 ; 曹铮 ; 盛鹏程 ; 吴颖蕾 ; 沈锦玉 关键词:罗氏沼虾野田村病毒 ; 环介导等温扩增技术 ; 侧向流层析试纸 机构:浙江省淡水水产研究所农业部淡水健康养殖重点实验室 ; 浙江省淡水水产研究所农业部淡水健康养殖重点实验室 年份:2014
    摘要:罗氏沼虾白尾病(White tail disease,WTD)是流行于罗氏沼虾苗种阶段的重要疾病,该病病原被确定为罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV),为了建立罗氏沼虾野田村病毒中国分离株(MrNV-chin)的便捷、灵敏、特异的分子诊断方法,本研究根据罗氏沼虾野田村病毒RNA2基因保守序列的6个区域设计了4条特异性引物和1条检测探针,将环介导等温扩增技术与侧向流层析试纸(Lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立了MrNV的RT-LAMP-LFD检测方法。结果表明,该方法的灵敏度是常规琼脂糖凝胶电泳的10倍;从核酸提取到检测结果判定仅需45min;反应特异性强,对其他虾类病毒WSSV、IHHNV、IMNV、TSV和YHV扩增结果均为阴性;操作简单,不需要复杂的仪器,在61℃水浴反应即可;利用LFD试纸显示结果,肉眼可直接观察判定。作为一种快速灵敏实用的分子诊断技术,该方法有利于罗氏沼虾白尾病的诊断与预防。
  • 【期刊】 罗氏沼虾野田村病毒和双顺反子病毒双重RT-PCR检测方法与序列分析

    刊名:上海海洋大学学报 作者:潘晓艺 ; 刘杜鹃 ; 沈锦玉 ; 张宇飞 ; 蔺凌云 ; 王军毅 ; 郝贵杰 ; 姚嘉赟 ; 徐洋 ; 袁雪梅 关键词:罗氏沼虾 ; 双顺反子病毒 ; 野田村病毒 ; 双重RT-PCR 机构:浙江省淡水水产研究所 ; 浙江省淡水水产研究所 ; 温州医学院生命科学学院 年份:2012
    摘要:罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)和双顺反子病毒(M.rosenbergii dicistrovirus,MrDV)是已报道对罗氏沼虾易感的主要致病性病毒,该研究通过建立双重RT-PCR方法对MrDV和MrNV两种病毒同时进行检测。根据MrDV和MrNV基因组序列的保守区分别设计特异性引物,并对双重PCR的退火温度和引物浓度进行优化,在获得优化反应体系和反应条件后,对罗氏沼虾样品进行检测。结果表明,双重PCR最佳退火温度为60℃,反应体系最佳引物终浓度MrNV384为0.1μmol/L,MrDV472为0.05μmol/L,对病样总RNA的最低检测限为360fg。引物的特异性检测表明,该检测方法对TSV、WSSV、IHHNV和嗜水气单胞菌TPS-30基因组无交叉反应。对阳性样品的病毒扩增序列分析表明,MrDV RNA依赖性RNA聚合酶编码区序列无变异,MrNV-RNA2序列存在较多变异,进化树结果表明2011年长三角的MrNV病毒主要来自于中国基因型和东南亚基因型。该方法的建立为罗氏沼虾病毒性疾病的预防和种苗的繁育奠定了基础。
  • 【期刊】 罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)

    刊名:重庆水产 作者:孙正琼 关键词:罗氏沼虾 ; 长臂大虾 ; 长臂虾科 ; 分类地位 ; 东南亚 ; 沼虾属 机构:西南大学荣昌校区水产系 ; 西南大学荣昌校区水产系 年份:2015
    摘要:【别称】淡水长臂大虾、泰国虾、金钱虾(台湾)
  • 【期刊】 罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)

    刊名:《重庆水产》 作者:孙正琼 关键词:罗氏沼虾 ; 长臂大虾 ; 长臂虾科 ; 分类地位 ; 东南亚 ; 沼虾属 机构:西南大学荣昌校区水产系 ; 西南大学荣昌校区水产系 年份:2015
    摘要:【别称】淡水长臂大虾、泰国虾、金钱虾(台湾) 【分布地带】原产东南亚 【分类地位】长臂虾科、沼虾
  • 【期刊】 罗氏沼虾病毒病检测和免疫防治进展

    刊名:浙江农业科学 作者:翁宏飚 ; 沈卫锋 ; 牛宝龙 关键词:罗氏沼虾 ; 诺达病毒 ; 疫苗 机构:浙江省农业科学院蚕桑研究所 ; 浙江省农业科学院蚕桑研究所 ; 浙江省农业科学院水产研究中心 年份:2019
    摘要:白尾病是一种由诺达病毒(MrNV)及其卫星样病毒(XSV)引起的罗氏沼虾病害,具有蔓延速度快和致死率高的特点,是罗氏沼虾养殖中的主要病害。介绍罗氏沼虾MrNV和XSV的基因组和结构蛋白、病毒检测方法、罗氏沼虾MrNV免疫机制、疫苗研究进展、MrNV病毒样颗粒微粒特性,以及罗氏沼虾健康养殖策略,讨论疫苗在罗氏沼虾病害防治中的作用。
  • 【期刊】 罗氏沼虾稻田养殖技术探究

    刊名:农业与技术 作者:陈儒华 关键词:罗氏沼虾;稻田养殖技术 机构:云南农业大学 ; 云南农业大学 ; 云南省瑞丽市水产工作站 年份:2017
    摘要:罗氏沼虾又叫做马来西亚虾,是一种淡水虾,它的体格比较大,而且容易养殖,生长快,和产量高等诸多的优点,所以许多的养殖专业户喜欢养殖罗氏沼虾。养殖罗氏沼虾的时候,要从稻田的选择、田间的建设、虾苗培育、水质的管理和病虫害的防治等多方面进行有效的技术探索和研究。
  • 【期刊】 罗氏沼虾常见病害的防治

    刊名:农家科技(下旬刊) 作者:戴知晗 关键词:罗氏沼虾 ; 常见病害 ; 防治 ; 江苏 机构:江苏省连云港市赣榆区海洋渔业技术指导站 ; 江苏省连云港市赣榆区海洋渔业技术指导站 年份:2018
    摘要:赣榆区罗氏沼虾养殖业发展迅速,经济效益显著,不过在生产上已发现不少病害,经常对生产造成较大损失.但许多养殖户还不太了解虾病的病症及防治方法.为此,现将有关虾病预防和治疗方法介绍如下,供参考.
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