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  • 【期刊】 拟南芥缺失突变体at14a的比较转录组分析

    刊名:江苏农业科学 作者:王琳 ; 孙庆玲 ; 刘辉 ; 梁建生 关键词:缺失突变体 ; AT14A ; 拟南芥 ; 基因芯片 ; 转录组学 机构:扬州大学生物科学与技术学院 ; 扬州大学生物科学与技术学院 年份:2016
    摘要:以at14a相关基因型(野生、缺失)拟南芥植株为试验材料,利用转录组学和生物信息学等方法,分析野生型(col)、缺失突变体(at14a)拟南芥差异基因表达状况,初步探讨拟南芥AT14A的功能。结果表明:at14a在拟南芥植株根、茎、叶和花中均有表达,尤其在叶片中的表达量较高;相较于野生型,缺失突变体at14a中有194个差异基因,其中上调基因122个,下调基因72个;通过GO富集分析发现,2种基因型植株差异基因主要参与了应答胁迫过程,这表明at14a可能通过调控AT5G39610、AT1G53240、AT4G32770、AT1G02920、AT1G10760这些逆境胁迫相关基因的表达来参与应答胁迫。差异分子主要定位于细胞核,具有绑定的分子功能。通过pathway分析发现,2个基因型植株差异基因主要参与了核糖体代谢、碳水化合物代谢、光合等代谢途径。研究结果为深入研究at14a作用的分子机理奠定了基础。
  • 【期刊】 RACK1及其缺失突变体与CLIC1的共定位研究

    刊名:安徽医科大学学报 作者:王蓓华 ; 朱亮亮 ; 刘晓颖 ; 范礼斌 关键词:RACK1 ; 质粒构建 ; 转染 ; 免疫荧光 ; Western blot 机构:安徽医科大学生命科学学院生物学系 ; 安徽医科大学生命科学学院生物学系 年份:2015
    摘要:目的运用分子克隆技术构建活化蛋白激酶C受体1(RACK1)突变体的真核表达质粒,进行RACK1突变体的表达、定位及其与胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)蛋白的共定位研究,为其进一步的功能研究奠定基础。方法以RACK1全长c DNA序列为模板,构建真核表达质粒pc DNA3.1-RACK1-N(1-138)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1-C(130-317)-FLAG;Western blot法检测突变体在哺乳动物细胞中的表达;用免疫荧光技术了解突变体蛋白在哺乳动物细胞中的共定位情况。结果成功构建了RACK1突变体的真核表达质粒;Western blot法检测到蛋白主要在胞质中表达,核内有部分表达;免疫荧光实验表明,RACK1及突变体蛋白主要定位在胞质与核膜,细胞核中也有少量表达,与CLIC1蛋白存在共定位。结论成功构建了RACK1缺失突变体,并在真核细胞中成功表达;RACK1及突变体与CLIC1蛋白在哺乳动物细胞中均存在不同程度的共定位,蛋白之间可能存在相互作用,为RACK1蛋白的功能研究奠定了基础。
  • 【期刊】 牛心甘蓝蜡粉缺失突变体410M特征的研究

    刊名:南京农业大学学报 作者:石利朝;曾爱松;李家仪;王金香;宋立晓;严继勇; 关键词:甘蓝;;蜡粉缺失突变体;;农艺性状;;超微结构;;遗传规律;;蜡粉基因 机构:南京农业大学园艺学院 ; 南京农业大学园艺学院 ; 中国农业大学生物学院 年份:2018
    摘要:[目的]本文旨在探索牛心甘蓝蜡粉缺失突变体410M的特征和实际应用价值,以丰富甘蓝种质资源,加速新品种创制和改良。[方法]调查牛心甘蓝野生型材料410W和蜡粉缺失突变体410M的农艺性状,测定其营养品质;扫描电镜观察其叶表超微结构;以蜡粉缺失突变体材料410M(P1)与其野生型410W(P2)为亲本分别配制6世代群体,分析410M蜡粉缺失性状的遗传规律;筛选出14个在拟南芥中参与蜡粉合成、转运的基因,并利用实时荧光定量PCR对其在410W和410M中的表达模式进行分析。[结果]蜡粉缺失甘蓝叶色亮绿,突变体410M球叶和外叶的维生素C含量显著高于野生型;其他表型及主要营养成分与野生型无明显差异。叶表超微结构观察显示,突变体叶表面光滑,蜡粉严重缺失;野生型叶表蜡粉分布致密,晶体结构主要为片状和线状。对6世代群体分离比例进行χ~2检测,结果表明410M蜡粉缺失性状为隐性单基因遗传。在参与拟南芥蜡粉生物合成、转运的14个基因中,共有7个基因在野生型中的表达显著高于突变体。[结论]蜡粉缺失突变体410M遗传稳定,商品性好,为育种和蜡粉分子基础研究的优良材料。
  • 【期刊】 牛心甘蓝蜡粉缺失突变体410M特征的研究

    刊名:南京农业大学学报 作者:石利朝[1,2] ; 曾爱松[2] ; 李家仪[3] ; 王金香[1,2] ; 宋立晓[2] ; 严继勇[2] 关键词:甘蓝 ; 蜡粉缺失突变体 ; 农艺性状 ; 超微结构 ; 遗传规律 ; 蜡粉基因 机构:[1]南京农业大学园艺学院 ; [1]南京农业大学园艺学院 ; [3]中国农业大学生物学院 年份:2018
    摘要:[目的]本文旨在探索牛心甘蓝蜡粉缺失突变体410M的特征和实际应用价值,以丰富甘蓝种质资源,加速新品种创制和改良。[方法]调查牛心甘蓝野生型材料410W和蜡粉缺失突变体410M的农艺性状,测定其营养品质;扫描电镜观察其叶表超微结构;以蜡粉缺失突变体材料410M(P1)与其野生型410W(P2)为亲本分别配制6世代群体,分析410M蜡粉缺失性状的遗传规律;筛选出14个在拟南芥中参与蜡粉合成、转运的基因,并利用实时荧光定量PCR对其在410W和410M中的表达模式进行分析。[结果]蜡粉缺失甘蓝叶色亮绿,突变体410M球叶和外叶的维生素C含量显著高于野生型;其他表型及主要营养成分与野生型无明显差异。叶表超微结构观察显示,突变体叶表面光滑,蜡粉严重缺失;野生型叶表蜡粉分布致密,晶体结构主要为片状和线状。对6世代群体分离比例进行χ~2检测,结果表明410M蜡粉缺失性状为隐性单基因遗传。在参与拟南芥蜡粉生物合成、转运的14个基因中,共有7个基因在野生型中的表达显著高于突变体。[结论]蜡粉缺失突变体410M遗传稳定,商品性好,为育种和蜡粉分子基础研究的优良材料。
  • 【期刊】 肝癌中 EPHA3受体 SAM 结构域缺失突变体的发现

    刊名:生物学杂志 作者:陈霞 ; 厉建中 ; 嵇承栋 关键词:突变 ; 肿瘤 ; 酪氨酸激酶受体 机构:第二军医大学肿瘤研究所 ; 第二军医大学肿瘤研究所 ; 同济大学附属杨浦医院上海市杨浦区中心医院 年份:2017
    摘要:酪氨酸蛋白激酶受体( RTKs)具有调节细胞生长、分化和迁移的能力,是一类多功能的跨膜糖蛋白。 EPH受体家族蛋白高度保守,成员众多,是RTKs中最大的一个分支。大量的研究表明,EPH家族蛋白不仅在胚胎发育过程中具有调节细胞间黏附或排斥、细胞迁移、轴突导向以及血管形成等多方面作用,并且在一些恶性肿瘤的血管生成、肿瘤转移与侵袭等肿瘤的发生发展及预后过程中也发挥着重要的调节作用。在研究EPHA3受体对肝癌转移的作用过程中,发现Epha3在肝癌组织中具有一种新的突变体,该突变体在其胞内部分缺失了96 bp并提前终止翻译而缺少SAM结构域,推测其可能在肝癌的发生发展过程中起调控作用。
  • 【期刊】 EMS诱变亚麻荠获得2S贮藏蛋白缺失突变体

    刊名:华北农学报 作者:苑丽霞;郝敬云;赵奎;薛金爱;李润植 关键词:亚麻荠 ; 2S清蛋白 ; EMS ; 突变体(2SP7) 机构:晋中学院生物科学与技术学院 ; 晋中学院生物科学与技术学院 ; 山西农业大学分子农业与生物能源研究所 年份:2016
    摘要:亚麻荠种子富含大量不饱和脂肪酸和贮藏蛋白。为了获得广泛的育种材料,创建优异的新种质,采用EMS(甲基磺酸乙酯)对亚麻荠种子进行诱变处理。通过EMS不同处理时间(0,8,12,16h)和不同处理浓度(0,0.2%,0.4%,0.6%,0.8%,1.0%,1.2%)条件下诱变亚麻荠种子,建立了EMS诱变亚麻荠种子的优化体系,以0.8%(F/F)EMS处理成熟种子12h效果最佳,筛选获得一个亚麻荠2SW突变体。与野生型相比,该突变体种子贮藏蛋白成分中缺失了2S清蛋白,但是亚麻荠种子含油量和蛋白含量、株型和种子萌发等农艺性状未发生显著变化。这种特殊的亚麻荠2SP7突变体可作为研究种子贮藏蛋白合成机理及培育高营养品质亚麻荠新品种的优异种质资源,也可用于进行相关功能基因组学等的研究。
  • 【期刊】 FKBP25缺失突变体在细胞中的表达与定位

    刊名:安徽医科大学学报 作者:张姗靖 ; 王蓓华 ; 龚芮 ; 潘林鑫 ; 耿慧武 ; 刘晓颖 ; 邓松华 ; 范礼斌 关键词:FKBP25 ; 基因表达 ; 免疫荧光 ; 细胞定位 机构:安徽医科大学病理生理学教研室 ; 安徽医科大学病理生理学教研室 ; 安徽医科大学生命科学学院生物学教研室 年份:2014
    摘要:目的研究FKBP25缺失突变体蛋白在细胞内的表达和定位。方法以人FKBP25全长cDNA序列的质粒为模板,PCR方法分别扩增出FKBP25缺失突变体序列,然后插入真核表达载体pcDNA3.1中,通过Western blot方法和免疫荧光方法检测其在细胞株中的表达和定位。结果成功构建了FKBP25缺失突变体的真核表达载体,经Western blot检测FKBP25缺失突变体在HEK 293T细胞中能够有效表达,免疫荧光显微镜结果显示FKBP25缺失突变体在COS7细胞中分布于细胞核和细胞质。结论 FKBP25缺失突变体在HEK 293T、COS7细胞中能够表达,为了解FKBP25缺失突变体的功能提供了一定基础。
  • 【期刊】 几份甘蓝蜡粉缺失突变体特征特性的研究

    刊名:园艺学报 作者:唐俊 ; 刘东明 ; 刘泽洲 ; 杨丽梅 ; 方智远 ; 刘玉梅 ; 庄木 ; 张扬勇 ; 孙培田 关键词:结球甘蓝 ; 蜡粉缺失突变体 ; 超微结构 ; 蜡粉成分 ; 农艺性状 ; 杂种优势 机构:中国农业科学院蔬菜花卉研究所 ; 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 年份:2015
    摘要:为了探索甘蓝蜡粉缺失突变体的特征特性和实际应用价值,对不同类型的5份甘蓝蜡粉缺失突变体进行了研究。叶表超微结构观察及蜡粉成分分析发现:突变体叶表面蜡粉严重缺失,其蜡粉量仅约为野生型的30%;野生型叶表蜡粉晶体结构主要为柱状和线状,而突变体主要为颗粒状和短棒状;野生型叶表蜡粉成分主要为烷烃、脂肪酸、醇、醛和酮,而突变体主要缺失成分为烷烃和酮,推测突变体蜡粉合成途径中的烷烃合成途径受阻,从而表现为蜡粉缺失。突变体的叶绿素浸出率和叶片失水率均显著高于其野生型,说明其叶片角质层透性增加。植株生长曲线的测定结果显示:突变体1和突变体3与其野生型相比生长相对滞后,生长势稍弱,而突变体2的生长与其野生型无显著差异。农艺性状及杂种优势的调查结果表明:蜡粉缺失甘蓝叶色亮绿,商品性好,特别是突变体2,不仅球形美观且其蜡粉缺失性状为显性遗传;用纯合显性的突变体2的自交系与普通材料配制的杂交组合具有球色亮绿、杂种优势明显的优点,实际应用价值较大。
  • 【期刊】 UHRF2不同结构域缺失突变体的真核表达

    刊名:中国生物制品学杂志 作者:白露 ; 王筱绘 ; 胡斌 ; 周丹琳 ; 段昌柱 关键词:UHRF2 ; 结构域 ; 缺失体 ; 真核细胞 ; 表达 机构:重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室 ; 重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室 ; 分子医学与肿瘤研究中心 年份:2013
    摘要:目的构建UHRF2不同结构域缺失突变体,并在HEK293细胞中表达。方法根据UHRF2不同结构域位置特征,构建5种不同结构域缺失突变体;以重组质粒pCMV-3xFlag-UHRF2为模板,PCR法直接扩增△UBL、△RING和△YDG+△RING编码基因,重叠PCR法扩增△PHD和△YDG编码基因,定向克隆至pCMV-3xFlag真核表达载体中,构建重组表达质粒,转染HEK293细胞,Western blot鉴定重组蛋白的表达。结果 UHRF2的结构域缺失体△UBL、△PHD的上游和下游及上下游合并、△YDG的上游和下游及上下游合并、△RING和△YDG+△RING的PCR产物分别可见2 018、987、1 152、2 272、1 232、629、1 827、2 163和1 287 bp的特异条带;UHRF2各结构域缺失体的重组表达质粒经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;重组质粒转染HEK293细胞表达的重组蛋白大小均与理论值相符。结论成功在HEK293细胞中表达了UHRF2不同结构域缺失突变体,为进一步研究UHRF2各结构域的功能及其与其他蛋白质的相互作用位点奠定了基础。
  • 【论文】 Flg22诱导拟南芥钙信号缺失突变体的筛选

    作者:杨艺 关键词:植物免疫 ; flg22 ; 钙信号 机构:杭州师范大学 ; 杭州师范大学 年份:2018
    摘要:病原菌侵害是影响农作物产量重要因素。植物通过质膜或胞内的受体感受这些生物胁迫的存在,触发下游的信号转导,引发相应的免疫反应以抑制病原体的侵害。而作为植物第二信使的钙信号,在植物感受到胁迫初期就会出现,并对下游信号的传递发挥着重要的作用。Flg22作为一个典型的病原体相关的分子模式,其相关的信号转导机制已经被研究的较为清楚。但对于flg22的诱导如何引起胞内钙离子浓度增加的分子机制依然不清楚。本研究以含有可以稳定遗传水母荧光蛋白(AEQUORIN,AQ)基因的拟南芥EMS诱变体作为材料,通过筛选flg22胁迫下钙离子浓度上升缺失突变体,期望能够得到flg22诱导的钙信号传导通路中的特异性组分。并且通过克隆相应基因,进一步深入探讨植物感受生物胁迫的机理。目前取得的成果如下:1.通过表型筛选、特异性验证,我们得到了flg22诱导的钙信号缺失的候选突变体;2.我们选取其中一个候选突变体进行回交以及BF_3的验证,得到该突变体稳定表达的BF_3代,并完成了相应的全基因组重测序,目前正在对突变基因进行定位,并初步将该基因定位于四号染色体上;3.通过对突变体生理表型的分析,我们发现筛选得到的突变体对AtPep1和flg22都不敏感,表明该突变基因可能在植物防御中发挥一定的作用;4.通过荧光定量PCR对flg22诱导下PR1基因表达的检测,我们发现植物在应对病害胁迫时,PR1基因表达量会降低。本研究的顺利进行,将为生物胁迫诱导的早期钙信号,以及采用基因工程方法提高农作物抗病性奠定基础,对进一步进行植物抗病育种以及指导农业生产实践具有重要的作用。
  • 【期刊】 西瓜专化型尖孢镰刀菌FonSIX6缺失突变体的构建

    刊名:浙江农业学报 作者:唐宁安 ; 牛晓伟 ; 张跃建 ; 寿伟松 ; 范敏 关键词:缺失突变体 ; 西瓜枯萎病 ; FonSIX6 ; 效应蛋白 ; 西瓜专化型尖孢镰刀菌 机构:浙江师范大学化学与生命科学学院 ; 浙江师范大学化学与生命科学学院 ; 浙江省农业科学院蔬菜研究所 年份:2013
    摘要:病原菌和植物相互作用时分泌效应蛋白(effectors)抑制植物的防卫反应。枯萎病是由尖孢镰刀菌引起的真菌病害,尖孢镰刀菌和寄主相互作用时分泌几个特定的富含半胱氨酸的小分子量蛋白(15.8~29.9kD)进入木质部启动致病力,称为SIX(secreted in xylem)蛋白,其中,SIX6蛋白是一个效应蛋白。西瓜枯萎病是由西瓜专化型尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.Niveurn,Fon)引起的真菌病害。为了明确FonSIX6在侵染西瓜时的作用,克隆了该基因的上下游序列,以潮霉素为筛选标记构建了该基因的缺失突变体载体pDH-SIX6;将构建好的基因缺失载体转入农杆菌AGL-1中,通过农杆菌介导的遗传转化和转化子的筛选获得了FonSIX6基因的缺失突变体
  • 【期刊】 家蚕丝腺发育相关基因Bmsage缺失突变体的RNA-seq分析

    刊名:蚕业科学 作者:辛虎虎 ; 张登攀 ; 矫鹏 ; 陈瑞婷 ; 陆喦 ; 缪云根 关键词:家蚕 ; 丝腺 ; 分化与发育 ; Bmsage基因 ; 基因敲除 ; RNA-seq测序 机构:浙江大学动物科学学院蚕蜂研究所 ; 浙江大学动物科学学院蚕蜂研究所 年份:2015
    摘要:Bmsage是在家蚕丝腺中特异表达的基因,之前的研究明确其对丝素重链基因fib-H转录具有调控作用。在开展Bmsage功能的研究中,运用CRISPR/Cas9基因敲除系统,获得了Bmsage缺失的纯合突变体家蚕,其表型特征是幼虫的丝腺异常发育,缺失中部丝腺和后部丝腺。以Bmsage缺失型家蚕及正常型家蚕产下后5 d的卵为材料,应用RNA-seq测序技术在转录水平上获得194个差异表达基因。对Bmsage缺失型家蚕突变体胚胎期的这些差异表达基因进行GO功能注释,结果显示:Bmsage基因缺失后,对家蚕生理功能的影响主要集中在一些细胞组分,如与肌肉功能相关的肌球蛋白基因和肌钙蛋白基因都明显上调表达,与碳水化合物代谢相关的基因如多种凝集素基因和糖苷酶基因,除个别下调表达外,其余均上调表达;排在前10的GO term中,出现较多的是与几丁质分解代谢相关的几丁质酶基因和多种丝氨酸蛋白酶抑制剂基因。KEGG信号通路分析显示:差异基因主要与一些糖类、脂类和氨基酸的代谢的信号通路相关,其中又以糖类代谢为主,如半乳糖代谢、糖胺聚糖降解及氨基糖和核苷酸糖代谢,所以Bmsage可能参与了多个糖类代谢途径;在差异基因中,与丝腺发育关系最大的是几丁质酶基因、β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因和丝氨酸蛋白酶抑制剂基因,以及一些转运RNA基因(如TRNAE-CUC、TRNAN-GUU、TRNADGUC和TRNAV-GAC)。因此推测Bmsage可能通过复杂的调控网络,参与了丝腺组织的分化与形成过程。
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