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  • 【期刊】 木薯抗草甘膦突变株系离体筛选

    刊名:湖北农业科学 作者:陆荣生 ; 韩美丽 ; 杨迪 ; 覃建林 ; 马跃峰 关键词:木薯(Manihot esculenta Crantz) ; 愈伤组织 ; 草甘膦 ; 抗性 机构:广西农业科学院微生物研究所 ; 广西农业科学院微生物研究所 ; 广西农业科学院植物保护研究所 年份:2017
    摘要:以木薯(Manihot esculenta Crantz)品种桂热-6、桂热-4试管苗叶片为材料,研究草甘膦对愈伤组织增殖与分化的影响,以建立抗草甘膦的木薯离体筛选体系.结果表明,桂热-6、桂热-4幼叶愈伤组织诱导与增殖的适宜配方分别为改良B5+2,4-D 0.50~0.75 mg/L、改良B5+2,4-D 0.75 mg/L;愈伤组织分化不定芽的适宜配方分别为改良B5+TDZ 0.75 mg/L、改良B5+TDZ 0.75~1.00 mg/L.愈伤组织增殖过程中,桂热-6、桂热-4愈伤死亡率达到50%左右所需的草甘膦浓度分别为800、600 mg/L;愈伤组织分化过程中,桂热-6、桂热-4愈伤组织死亡率达到50%左右所需的草甘膦浓度分别为600、400mg/L.在含草甘膦的愈伤组织增殖培养基、愈伤组织分化培养上分二步筛选获得了桂热-6木薯抗草甘膦无性系.温室幼苗喷施草甘膦试验表明,抗性无性系幼苗对草甘膦的抗性得到增强,研究结果可为木薯无性系变异育种研究提供参考.
  • 【期刊】 酿酒酵母低渗敏感性突变株的选育

    刊名:食品与机械 作者:叶菁 ; 岳希洁 ; 蒋雪薇 ; 罗晓明 ; 陈代文 ; 吴健 ; 李赤翎 关键词:酿酒酵母 ; 紫外诱变 ; 低渗敏感性突变株 ; 条件性自溶 机构:长沙理工大学化学与生物工程学院 ; 长沙理工大学化学与生物工程学院 ; 益阳职业技术学院生物与信息工程系 ; 广东益鲜美生物科技有限公司 年份:2017
    摘要:为促进酿酒酵母胞内产物的有效释放,以其野生型二倍体(2n)菌株Y_1为出发菌株,经紫外诱变处理,通过测定其胞外FDP浓度及核酸、蛋白质渗透率,对比各突变株在低渗条件下的自溶程度。结果表明:突变株Hs_5~*(n)低渗培养时,条件性自溶程度最高,其胞外FDP浓度达25.82μg/mL,低渗培养6h时,其核酸、蛋白质渗透率高达1.86,2.07。此外突变株Hs_2~*(n)、Hs_1(2n)也具有较好的条件性自溶能力。试验共筛选获得3株低渗敏感性突变株,与野生型菌株相比,条件性自溶的低渗敏感性突变株能有效促进胞内大分子物质的外泌。
  • 【期刊】 白念珠菌CaFIG1基因缺失突变株的构建

    刊名:安徽农业科学 作者:王雅楠 ; 王军军 ; 徐大勇 ; 蒋伶活 关键词:白念珠菌 ; CaFIG1 ; 基因敲除 机构:江南大学生物工程学院国家工程实验室 ; 江南大学生物工程学院国家工程实验室 年份:2015
    摘要:[目的]研究Ca FIG1基因除参与有性生殖过程外,是否还参与细胞钙稳态等其他功能,对Ca FIG1进行基因敲除。[方法]采用2种方法分别敲除Ca FIG1的2个等位基因,一种通过PCR扩增HIS1敲除盒,另一种通过克隆的手段构建URA3敲除盒。[结果]从白念珠菌RM1000中成功敲除了Ca FIG1双等位基因。[结论]该敲除策略同样适用于其他基因的敲除,提高了基因敲除的效率。
  • 【期刊】 IFA筛选经EMS诱导的沙眼衣原体突变株

    刊名:现代生物医学进展 作者:田颖新 ; 杨长生 ; 贾天军 ; 王冰 ; 杨瑞宁 ; 邱红 关键词:EMS ; 突变菌株 ; 空斑实验 ; 间接免疫荧光 机构:美国德克萨斯大学微生物免疫系 ; 美国德克萨斯大学微生物免疫系 ; 河北北方学院 年份:2016
    摘要:目的:用甲基磺酸乙酯(Ethylmethylsulfone,EMS)诱导D型沙眼衣原体突变,利用间接免疫荧光法筛选出突变菌株,为研究不同衣原体基因的功能提供实验依据。方法:将D型沙眼衣原体标准株接种Mc Coy细胞,加入EMS诱导突变,收集存活菌株,利用空斑实验进行衣原体的分离和纯化,并用不同衣原体蛋白单克隆抗体做间接免疫荧光实验筛选突变株。结果:用间接免疫荧光筛选经EMS作用的沙眼衣原体,筛选出三株包涵体形态偏小的菌株(56#、58#、95#),一株圆形包涵体的突变株(61#)和一株D413N表达阴性的突变菌株(83#)。结论:用EMS作为诱导剂诱导D型沙眼衣原体突变,并成功筛选出三种突变株。为寻找衣原体功能基因与衣原体表型之间的联系奠定了实验基础。
  • 【期刊】 双缺陷型毕赤酵母X33突变株的诱变育种

    刊名:食品与生物技术学报 作者:顾鹏飞 ; 李萌 ; 朱瑞宇 ; 金坚 关键词:糖基化 ; 诱变 ; 生长表型 ; 甘露糖转移酶 机构:江南大学工业生物技术教育部重点实验室 ; 江南大学工业生物技术教育部重点实验室 ; 江南大学药学院 年份:2016
    摘要:为促进Pichia pastoris X33α-1,6-甘露糖转移酶(OCH1p)与α-1,3-甘露糖转移酶(ALG3p)双突变菌株(och1 alg3 m X33)作为蛋白质表达宿主菌的应用,为双突变菌株进一步糖基化的研究奠定基础。作者通过紫外诱变和常压室温等离子体(ARTP)诱变的方法来提高双突变菌株的生长速度以及适应能力。经过4轮筛选发现了生长速度提高15%、温度敏感性有所降低、细胞存活率有所提高的双突变菌株。
  • 【期刊】 鮰爱德华菌T6SS eivpP基因缺失突变株的构建

    刊名:大连海洋大学学报 作者:郭羿 ; 杨晓宇 ; 倪萍 ; 王一婷 ; 郭思聪 ; 马红丽 ; 赵小然 ; 叶仕根 关键词:鮰爱德华菌 ; eivpP基因 ; 基因敲除 ; 缺失突变 机构:大连海洋大学农业农村部北方海水增养殖重点实验室大连市海珍品疾病防控重点实验室 ; 大连海洋大学农业农村部北方海水增养殖重点实验室大连市海珍品疾病防控重点实验室 年份:2019
    摘要:为研究鮰爱德华菌Edwardsiella ictaluriⅥ型分泌系统(T6SS)EivpP与其他分泌蛋白之间的相互作用及其在细菌致病过程中的作用机制,在克隆到eivpP基因上、下游同源臂的基础上,采用融合PCR技术制备了eivpP基因缺失用的融合片段,并成功克隆到自杀质粒pDM4内,再将重组自杀质粒转化到大肠杆菌S17-1λ(pir)中,与鮰爱德华菌野生菌株ATCC33202共培养。经同源重组和蔗糖负筛获得鮰爱德华菌eivpP基因缺失突变阳性克隆,经PCR鉴定结果显示,突变株未检测出eivpP基因,即eivpP基因彻底敲除成功。本试验结果可为研究eivpP基因在鮰爱德华菌致病过程中的作用机制提供数据资料,为鮰爱德华菌弱毒疫苗的研发提供理论依据。
  • 【期刊】 单增李斯特标准菌NrdD基因插入突变株的构建

    刊名:湖北畜牧兽医 作者:舒加乐 ; 郑琳琳 关键词:突变株 ; 单增李斯特菌 ; NrdD基因 ; 同源重组 机构:上海交通大学实验动物中心 ; 上海交通大学实验动物中心 年份:2019
    摘要:利用同源重组的原理构建了单增李斯特氏菌NrdD基因插入突变株,从大肠杆菌基因组中分别扩增出NrdD基因上下游同源臂,与pKSV7质粒相连,构建成功重组突变载体pKSV7-D1D2,将其电转入单增李斯特菌后,用氯霉素抗性平板筛选得到NrdD基因插入突变株,并对突变菌株序列测定,证明回复突变株构建成功。该突变株可在严格无氧环境中生存,为进一步研究NrdD基因功能、单增李斯特的致病机制和疫苗载体的研发奠定了基础。
  • 【期刊】 酿酒酵母Mbp1基因缺失突变株耐受性研究

    刊名:基因组学与应用生物学 作者:陈小玲 ; 陈英 ; 陆雁 ; 陈东 关键词:Mbp1基因 ; 耐受性 ; 酿酒酵母 ; 海藻糖 ; 酶活 ; 乙醇 机构:广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室国家非粮生物质能源工程技术研究中心广西生物质产业化工程院广西生物炼制重点实验室 ; 广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室国家非粮生物质能源工程技术研究中心广西生物质产业化工程院广西生物炼制重点实验室 年份:2016
    摘要:为了研究Mbp1基因对工业酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)耐受性的影响,在敲除野生型工业酿酒酵母MF1015菌株Mbp1基因的基础上,分析Mbp1基因缺失菌株(突变菌株)与野生型在乙醇耐受性、耐热性、细胞壁完整性、呼吸强度、海藻糖含量、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、乙醇脱氢酶(ADH)活性等方面的差异。结果表明:在含刚果红或SDS的平板上突变菌株的菌落比野生型小、菌体存活率比野生型低;突变菌株的乙醇耐受性和耐热性均下降,在乙醇浓度为9%的液体培养基中,突变菌株的最大OD600约为3.15,而野生型最大OD600值约为3.48;在30℃和37℃时突变菌株和野生型的生长趋势基本一致,而在40℃时,突变菌株最大OD600约为3.0,而野生型约为4.5;用9%乙醇处理后,突变菌株胞内海藻糖含量、过氧化氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶、乙醇脱氢酶酶活分别比野生型低49%、80%、24%、37%、73%,而未经乙醇处理的突变菌株和野生型酶活无明显差别。推测Mbp1基因有助于工业酿酒酵母适应外部不良环境。
  • 【期刊】 近红外快速筛选小麦后代湿面筋突变株

    刊名:农业科技通讯 作者:程星 ; 赵平 ; 秦海英 ; 李国生 关键词:湿面筋小麦 ; 加代 ; 近红外 ; 快速筛选 机构:河南省濮阳市农业科学院 ; 河南省濮阳市农业科学院 年份:2016
    摘要:利用一种快速筛选小麦湿面筋转化后代材料的温室加代技术,在比较了不同的幼胚形态、春化时间及温室温度对小麦生长的影响后,确定下述加代流程:用授粉后12~16 d的幼胚直接培养成苗,在4℃~8℃条件下春化25 d,移栽入温室,控制温度、湿度,促其在35~40 d内开花、授粉,继续进行下一轮培养。此法简便、快速,能在70 d左右完成小麦1代生长周期,若不间断连续培养可1年繁殖4代,显著缩短小麦生育周期,适合进行大量湿面筋突变株的筛选。
  • 【期刊】 炭疽芽胞杆菌nprR突变株的生物学特性分析

    刊名:生物技术通讯 作者:袁利思 ; 陶好霞 ; 江巍 ; 关清 ; 王博文 ; 刘纯杰 ; 刘东 ; 王艳春 关键词:炭疽芽胞杆菌 ; nprR基因 ; 生物特性 ; 蛋白酶活性 机构:河北师范大学生命科学学院 ; 河北师范大学生命科学学院 ; 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所 年份:2018
    摘要:目的:分析炭疽芽胞杆菌npr R突变株的生物学特性,研究基因缺失对菌株的影响。方法:利用PCR、免疫印迹等方法在基因水平和蛋白水平对菌株进行鉴定分析;绘制生长曲线比较突变株和A16R株的生长性能;芽胞形成实验分析突变株形成芽胞能力,糖酵解实验分析二者生化特性的差异。结果:突变株npr R基因缺失无回复突变,与出发株A16R相比,突变株蛋白酶活性大大降低,保护性抗原降解现象明显减少,生长速度和生化特性基本一致,但芽胞形成能力明显下降。结论:与A16R株相比,突变株蛋白酶活性降低且芽胞形成能力下降,可作为一种新的抗原表达宿主菌用于相关疫苗的抗原表达与制备。
  • 【期刊】 铜绿假单胞菌PA0745基因突变株的构建及鉴定

    刊名:重庆医学 作者:卢培林 ; 刘利 ; 熊霞 关键词:假单胞菌,铜绿 ; 毒力 ; PA0745基因 ; 同源重组 机构:西南医科大学附属医院皮肤科 ; 西南医科大学附属医院皮肤科 年份:2018
    摘要:目的构建铜绿假单胞菌PA14细胞株的PA0745基因突变株,并验证其致病性。方法采用同源重组原理构建铜绿假单胞菌PA0745基因缺失株和点突变株。利用质粒抗性和营养缺陷进行筛选,获得铜绿假单胞菌突变株E126A、E146A和ΔPA0745。分析突变PA0745基因后,PA14细胞株生长特性及致病性变化。结果成功构建PA14细胞株的PA0745基因突变株E126A、E146A和ΔPA0745。生长曲线测定结果表明,PA0745基因突变后,不影响PA14细胞株正常生长。细胞侵染实验结果显示,相较于PA14细胞株,E126A、E146A和ΔPA0745对RAW264.7侵染能力分别下降了29.51%、60.66%和79.34%。结论本研究成功构建了PA14细胞株的PA0745基因突变株,并初步验证了PA0745基因的功能,这对开发抗菌药物有指导意义。
  • 【期刊】 炭疽芽胞杆菌A16D2株BA2380基因缺失突变株的构建

    刊名:微生物与感染 作者:贾书骅 ; 陈楠 ; 王东澍 ; 王甜甜 ; 冯尔玲 ; 朱力 ; 王恒樑 ; 彭清忠 ; 刘先凯 关键词:炭疽芽胞杆菌 ; 基因替换 ; 同源重组 ; "Golden Gate" cloning 机构:吉首大学 ; 吉首大学 ; 军事医学科学院生物工程研究所 ; 军事医学科学院生物工程研究所 ; 沈阳师范大学化学与生命科学学院 ; 军事医学科学院生物工程研究所 ; 吉首大学 年份:2017
    摘要:本课题组早期研究结果表明,炭疽芽胞杆菌BA2380蛋白可能与炭疽芽胞杆菌毒力有关,因而有必要对其功能进行深入研究.选取炭疽芽胞杆菌A16D2株为出发菌株,以其BA2380基因为目的缺失基因,参照A16D2株基因组序列及质粒pSET4s序列,利用软件设计上下游同源臂及抗性基因引物,用本实验室改造的"Golden Gate"克隆方法将3个片段同时连入温敏型穿梭载体pKMBK中(本实验室构建的受体质粒),从而构建基因打靶质粒.将该基因打靶质粒导入炭疽芽胞杆菌A16D2感受态细胞中,利用同源重组原理,筛选获得炭疽芽胞杆菌A16D2 BA2380基因缺失突变株,并对其进行验证.结果验证了本课题组构建的"Golden Gate"克隆体系进行多片段克隆的高效性,也为后续探索其基因功能奠定了基础.
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