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  • 【专利】 禽白血病病毒混合感染中单一病毒的纯化方法

    作者:王培坤 ; 林璐璐 ; 杨永立 ; 李海娟 ; 磨美兰 ; 韦天超 ; 黄腾 ; 韦平 年份:2017
    摘要:本发明公开了一种白血病病毒混合感染中单一病毒的纯化方法,通过测定混合感染病毒的TCID50进行终点稀释,采用稀释后的病毒液接种DF‑1细胞,收集上清与细胞培养物并用分型鉴定引物与IFA的对其进行鉴定,从而获得单一亚型的禽白血病病毒。该法对实验条件要求简单,具有很高的实际应用价值。实验结果证明,本发明可以成功的对不同亚型混合感染的ALV进行纯化,可为禽白血病病毒分子生物学特征及其致病性的研究提供技术支持。
  • 【期刊】 Borna病病毒病毒性脑炎及精神分裂症的关系

    刊名:中国老年学杂志 作者:张丽 ; 刘玫 ; 徐平 ; 蒋国红 关键词:精神分裂症 ; 病毒性脑炎 ; @@ 机构:遵义医学院附属医院神经内科 ; 遵义医学院附属医院神经内科 年份:2017
    摘要:目的 探讨Boma病病毒(BDV)与精神分裂症(SCH)及病毒性脑炎(VE)发病的关系.方法 对来自遵义市、毕节地区等贵州省部分地区的健康人100例、SCH患者30例、VE患者62例的外周血单核细胞(PBMC)采用巢式逆转录荧光定量PCR法检测是否存在BDVp24基因片段,并纯化、克隆阳性产物,对阳性产物测序并进行同源性分析.结果 BDVp24基因片段在VE[6.5% (4/62)]与健康人(0%)中的阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),但健康人与SCH患者阳性率[6.7%(2/30)]比较无显著差异(P>0.05).SCH患者与VE患者经检测之后存在完全相同的测序结果,相较于GenBank提供的Strain V毒株、C6BV毒株、1766毒株和He80/FR病毒株存在3%、3%、2%和3%的突变率,其中有3个、3个、2个和3个位点发生一致的基因沉寂性突变,BDV与1766毒株最相似,SCH患者的临床表现与VE患者的临床表现相似.结论 遵义市、毕节地区等贵州省部分地区VE的发生率可能与BDV感染有关.BDV p24基因片段未在健康人中检出.
  • 【期刊】 病毒性腹泻病毒BVDV-LC株的分离与鉴定

    刊名:中国预防兽医学报 作者:马旭升 ; 何延华 ; 盛金良 ; 黄新 ; 丁金花 ; 豆晓霞 ; 刘贤侠 ; 陈创夫 关键词:牛病毒性腹泻病毒 ; 分离鉴定 ; 进化分析 机构:石河子大学生命科学学院 ; 石河子大学生命科学学院 ; 石河子大学动物科技学院 年份:2018
    摘要:为分离鉴定新疆地区牛病毒性腹泻病毒(BVDV)流行株,本研究通过RT-PCR检测、细胞分离培养、直接免疫荧光抗体检测、核苷酸序列测定及生物信息学分析对新疆某奶牛场采集的腹泻牛粪便样品进行了病毒分离和鉴定。结果显示,分离得到一株新的牛源BVDV,命名为BVDV-LC株。该病毒株在MDBK细胞培养时未能引起细胞病变;5'-UTR与N~(pro) PCR扩增为阳性,扩增片段与预期大小一致;直接免疫荧光检测荧光信号为阳性;病毒滴度为10~(5.6) TCID_(50)/0.1 mL;遗传进化分析显示,该分离株与猪源BVDV-SD0803株有较近的亲缘关系,同属于BVDV-1q基因亚型。本研究表明BVDV-LC株的分离鉴定对进一步开展疫苗研发、牛病毒性腹泻致病机理等方面的研究具有重要意义。
  • 【期刊】 犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救与鉴定

    刊名:中国兽医学报 作者:文兆海 ; 毛丽萍 ; 胡远 ; 程瑶 ; 周海莹 ; 陈凯云 ; 翟少华 ; 简子健 关键词:重组狂犬病病毒 ; 犬瘟热病毒N基因 ; 反向遗传学 ; RT-PCR ; 间接免疫荧光 机构:新疆农业大学动物医学学院 ; 新疆农业大学动物医学学院 年份:2018
    摘要:探究犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救及鉴定,为后期犬瘟热-狂犬病二联口服弱毒活疫苗的研制奠定基础。采用脂质体转染的方法,将纯化后的重组质粒(pcDNA-N-G-EGFP-CDVN-PM-L)与辅助性表达质粒(pcDNAN、pcDNA-G、pcDNA-P、pcDNA-L)共转染BSR细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光技术进行检测并鉴定。结果显示,对盲传至第6代、第9代病毒液进行RT-PCR检测,均出现与预期相符的目的片段(狂犬病病毒N基因片段大小为1 315bp,犬瘟热病毒CDV-N基因片段大小为1 653bp)。间接免疫荧光试验后在激光共聚焦显微镜下,试验组均可观察到大量绿色荧光表达。RT-PCR结果与间接免疫荧光试验结果相吻合,表明犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒拯救成功。
  • 【期刊】 大鼠AEG-1慢病毒表达载体构建及病毒包装

    刊名:宁夏医科大学学报 作者:刘昆梅 ; 张春 ; 郭乐 关键词:星形胶质细胞上调基因-1 ; 慢病毒载体 ; 293T细胞 机构:宁夏医科大学宁夏颅脑疾病重点实验室 ; 宁夏医科大学宁夏颅脑疾病重点实验室 年份:2017
    摘要:目的利用分子克隆技术构建大鼠AEG-1慢病毒表达载体并进行慢病毒包装。方法设计合成全长大鼠AEG-1基因序列(R-AEG-1),在克隆质粒GV367的基础上构建AEG-1基因慢病毒表达载体(R-AEG-1-GV367),测序鉴定构建成功。R-AEG-1-GV367与包装质粒转染293T细胞进行慢病毒包装。结果成功构建大鼠AEG-1慢病毒表达载体并成功包装出高效感染率的慢病毒颗粒,测定病毒滴度为2E+8TU·m~(-1)。结论 AEG-1慢病毒表达载体的构建及病毒颗粒包装为后续AEG-1过表达在神经细胞行为学和分子生物学的研究奠定了基础。
  • 【期刊】 病毒性腹泻病毒RT-PCR方法的建立及应用

    刊名:中国比较医学杂志 作者:王吉 ; 付瑞 ; 李晓波 ; 王淑菁 ; 王莎莎 ; 李威 ; 秦骁 ; 巩薇 ; 岳秉飞 ; 贺争鸣 关键词:牛病毒性腹泻病毒 ; RT-PCR ; 牛源样本 机构:中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心 ; 中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心 年份:2017
    摘要:目的建立用于牛源样本中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重RT-PCR检测方法。方法选择已发表的BVDV 1型和BVDV 2型包含5’UTR区高保守区域基因作为靶基因,分别设计合成引物,建立双重BVDV RT-PCR方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行方法学评价。同时用建立的RT-PCR方法检测了小牛血清、小牛血清去蛋白提取液、脾多肽注射液等41批次牛源性样本和64份牛血浆样本。牛源样本和64份牛临床样本。结果建立的BVDV RT-PCR检测方法与牛副流感病毒III型(BPIV3)、猪瘟病毒(CSFV)、乙型脑炎病毒(JEV)均无交叉反应;检测BVDV 1型和BVDV 2型DNA模板最低浓度分别为每微升8.87×10~2拷贝和6.31×10~2拷贝,BVDV 1型和2型c DNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带。应用建立的BVDV RT-PCR方法检测41批次牛源样本和64份牛血浆样本,核酸阳性率分别为14.6%和29.7%。结论建立的BVDV RT-PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源样本携带BVDV核酸的检测。
  • 【期刊】 禽腺病毒感染SPF鸡的病变和病毒分布初步研究

    刊名:中国家禽 作者:殷国政 ; 司振书 ; 刘延伟 ; 李哲 ; 李玉保 ; 路建彪 关键词:禽腺病毒 ; 血清4型 ; 病毒分布 ; 全身性感染 机构:聊城大学农学院 ; 聊城大学农学院 年份:2019
    摘要:鸡心包积液-肝炎综合征是一种急性传染病,由血清4型禽腺病毒引起。为了解该病原的主要致病特点,采用Ⅰ群4型禽腺病毒聊城分离株(SDLC 201601)接种SPF鸡胚,观察鸡胚病变;人工感染1日龄SPF鸡,对病死鸡进行剖检,观察主要病理变化,并采用PCR方法对各脏器进行病毒DNA的检测。结果发现,鸡胚试验组至接毒后第8天鸡胚全部死亡,接毒6 d后死亡胚出现心包积液、肝脏肿大、变性或出血及肾脏肿大、出血等典型病变。SPF鸡试验组在感染后第3天出现死亡并达到死亡高峰,第4天全部死亡,死亡率为100%,SPF鸡对照组无发病死亡;SPF鸡试验组死亡鸡主要病变在肝脏、心脏及肾脏等器官,其中肝脏的病变评分最高;死亡鸡的脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气管、胰腺、小肠、法氏囊、肌胃、腺胃等脏器均检测到该病毒的DNA。表明该毒株对1日龄SPF鸡感染性强,可侵袭各组织脏器,为全身性感染,致死率可达100%。
  • 【期刊】 我国西尼罗病毒和Tahyna病毒的发现与流行

    刊名:微生物与感染 作者:梁国栋 关键词:虫媒病毒 ; 蚊传虫媒病毒 ; 西尼罗病毒 ; Tahyna病毒 ; 病毒性脑炎 机构:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 ; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 年份:2016
    摘要:已发现100余种蚊传虫媒病毒在世界各地流行,其引发的人兽共患病是全世界关注的公共卫生问题。长期以来我国仅发现乙型脑炎和登革热两种蚊传虫媒病毒病,但近年来新发现西尼罗病毒和Tahyna病毒及其感染疾病流行。从我国新疆维吾尔自治区采集的蚊虫标本中分离到西尼罗病毒,大量血清学研究证明当地不仅存在西尼罗病毒感染所致疾病,还发生过西尼罗病毒感染引发的病毒性脑炎流行。目前已从新疆维吾尔自治区、青海省和内蒙古自治区采集的蚊虫标本中分离到Tahyna病毒,并发现其在自然界动物中的循环和导致的人类感染流行。西尼罗病毒和Tahyna病毒及其相关感染性疾病的发现为我国虫媒病毒及虫媒病毒病的预防与控制提出了新的挑战。
  • 【专利】 一种猪病毒性腹泻病毒5重RT-PCR检测试剂盒

    作者:刘光亮 ; 李宝玉 ; 付钰广 ; 陈佳宁 ; 兰喜 ; 丁光明 年份:2016
    摘要:本发明公开一种“猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪札幌病毒和猪嵴病毒”的5重RT-PCR检测方法以及试剂盒。本发明的试剂盒中包括有10条特异性扩增引物,在其使用时以待检样品的总RNA,利用6碱基随机引物反转录为cDNA,再以cDNA为模板利用试剂盒中的检测反应体系进行RCR扩增,根据不同病原所扩增的PCR片段大小不同来判定待检样品是否感染一种病原,或是混合感染。本发明的试剂盒在保证特异性和敏感性的情况下,具有操作简单、快速,降低了检测成本、劳动强度的优点,可适用于田间样品检测。
  • 【期刊】 狂犬病毒PV-2061株的病毒滴度测定方法的研究

    刊名:医药前沿 作者:李爽 ; 姚宇 ; 李鹤 ; 田威 关键词:狂犬病病毒 ; 免疫荧光法 ; 蚀斑法 机构:辽宁成大生物股份有限公司 ; 辽宁成大生物股份有限公司 ; 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院 年份:2018
    摘要:目的:建立狂犬病毒PV-2061株病毒滴度的快速、准确的检测方法.方法:取12批狂犬病毒PV-2061株的病毒样品,分别采用蚀斑法、免疫荧光法检测病毒滴度,与小鼠脑内注射法进行比较,验证其检测结果的相关性.另取一批狂犬病毒PV-2061株的病毒样品,用蚀斑法和免疫荧光法重复检测6次,比较两种实验方法的精密性.结果:蚀斑法和免疫荧光法测得的结果与小鼠脑内注射法之间呈正相关性;重复测定同一病毒样品,免疫荧光法的变异系数更低,表明免疫荧光的重复性更好.结论:以细胞法替代小鼠法检测狂犬病毒的毒力是可行的.免疫荧光法检测病毒滴度,快速、准确、精密度好,为狂犬病毒PV-2061株的疫苗的研究奠定了基础.
  • 【期刊】 一种基于PE病毒转图和CNN的病毒识别方法

    刊名:软件 作者:吕臻 ; 张宇 关键词:CNN ; 深度学习 ; 图像分类 ; 病毒分类识别 ; 不平衡样本 机构:浙江省嘉兴市公安局科技信息通信处 ; 浙江省嘉兴市公安局科技信息通信处 ; 贵州省遵义市公安局科技信息通信处 年份:2018
    摘要:随着互联网的爆炸式的发展,计算机病毒也是层出不穷,如何快速的对新增病毒进行响应和查杀也是一个较大的挑战[1]。普通的特征检测方法对于新样本的检测存在滞后性,往往无法有效查杀新增样本。通常的机器学习查杀病毒,则存在特征难以提取,训练集样本不均衡的问题。本文中提出一种方法,通过CNN算法和文件图像化表示算法结合进行病毒扫描的方法。本文中发现,通过CNN,可以有效的提取文件图像化后的特征,达到了自动提取特征的目的。修改了CNN中softmax算法,从而解决了样本不均衡问题。
  • 【期刊】 猪群感染圆环病毒3型病例的诊断和病毒鉴定

    刊名:猪业科学 作者:贺东生 ; 俞丽 ; 苏丹萍 ; 梁伟放 ; 李锦辉 关键词: ; PCR鉴定 ; PCV3 ; CAP段基因 ; 序列分析 机构:华南农业大学兽医学院 ; 华南农业大学兽医学院 年份:2017
    摘要:2017年8月,华南某猪场保育猪出现慢性消瘦和呼吸道综合征的病猪。经实验室PCR诊断,排除猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)后显示为猪圆环病毒3型(PCV3)阳性。采用特异性CAP段基因引物扩增该片段,使用DNAMAN7.0和MEGA6.06软件进行同源性分析。结果,成功克隆了该病毒的CAP段基因,序列长度为671 bp,并进行基因测序和遗传进化分析。序列同源性分析表明该毒株为PCV3,命名为PCV3/CN/Guangzhou/2017。
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