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  • 【专利】 一种碳点载药体系的制备方法

    作者:段相林 ; 耿丽娜 ; 张泽帝 ; 常彦忠 年份:2018
    摘要:本发明公开了一种碳点载药体系的制备方法。以牡丹花粉为原料,尿素为修饰试剂,采用水热法制备出粒径均匀的碳点,再将碳点分别与盐酸阿霉素(DOX)、柠檬酸铁(FAC)进行避光偶联反应,得到CDs‑DOX和CDs‑FAC。本发明所制备的CDs‑DOX载药量高,具有缓释性,且具有癌细胞靶向释放的特征;所制备的CDs‑FAC载药量高,具有缓释性,且胃液释放慢于肠液释放,CDs‑FAC可减轻FAC对胃的刺激作用,有利于小肠吸收,适合口服用药。制备方法简单、操作简便,反应易控制;所得产物有利于改善单纯DOX或FAC的给药效果,减轻其毒副作用,可用于治疗铁紊乱相关疾病。
  • 【会议】 Vitamin C对酒精性脂肪肝小鼠铁代谢影响的研究

    作者:段相林 ; 王越甲 ; 刘贝 ; 田占涛 ; 潘书红 机构:河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学研究室 ; 河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学研究室 年份:2013
    摘要:目的探讨Vitamin C对小鼠酒精性脂肪肝动物模型铁代谢相关蛋白表达的影响。方法 "饮酒法"诱导建立小鼠酒精性脂肪肝模型,实验动物分为A:正常对照组,B:酒精性脂肪肝组及C:酒精性脂肪肝+Vitamin C组,并通过PCR、Western blotting免疫组化等技术,研究Vitamin C对酒精性脂肪肝小鼠肝脏铁代谢相关蛋白表达的变化的影响。结果与A组相
  • 【期刊】 线粒体未折叠蛋白反应分子机制的研究进展

    刊名:生物化学与生物物理进展 作者:段相林 ; 樊玉梅 ; 郝强 ; 刘思颖 ; 常彦忠 ; 谭克 关键词:线粒体 ; 线粒体未折叠蛋白反应 ; ATFS-1 ; HSF1 ; ATF5 ; 疾病 机构:河北师范大学生命科学学院河北省动物生理生化与分子生物学重点实验室 ; 河北师范大学生命科学学院河北省动物生理生化与分子生物学重点实验室 年份:2017
    摘要:线粒体未折叠蛋白反应(UPR~(mt))作为新发现的细胞内应激机制,直接影响老化、神经退行性疾病、癌症等疾病的发生发展.UPR~(mt)是线粒体为了维持其内部蛋白质的平衡,启动由核DNA编码的线粒体热休克蛋白和蛋白酶等基因群转录活化程序的应激反应.深入探究UPR~(mt)的作用机制对阐明老化和线粒体相关疾病的发病机理具有指导意义.本文主要阐述了线粒体未折叠蛋白反应的诱导因素、线虫和哺乳动物细胞中最新的未折叠蛋白应激反应的信号传导通路、调控因子、具体作用机制以及线粒体未折叠蛋白反应与衰老、免疫等疾病的联系,旨在为这些疾病提供新的理论基础和治疗靶点.
  • 【期刊】 铁蛋白重链亚铁氧化酶活性突变体的构建及鉴定

    刊名:生物技术 作者:段相林 ; 柳彩芝 ; 苗青 ; 薛建奇 ; 潘书红 ; 樊玉梅 关键词:铁蛋白重链 ; 亚铁氧化酶活性 ; 重叠PCR ; 分子克隆 机构:河北师范大学生命科学学院 ; 河北师范大学生命科学学院 年份:2015
    摘要:[目的]构建小鼠铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH)亚铁氧化酶活性突变基因的真核表达载体。[方法]针对小鼠FTH基因的亚铁氧化酶活性关键位点(K86、E62和H65),设计并合成6条PCR引物。利用重叠延伸PCR技术,获得小鼠FTH基因的突变体m FTH(K86Q、E62K和H65G),简写为m FTH(3M)。然后将m FTH(3M)插入到实验室已有的C端带Flag标签的真核表达载体pc DNA3中,插入位置为多克隆位点区域中限制性内切酶Bam HⅠ和HindⅢ之间,从而得到亚铁氧化酶活性缺失的FTH真核表达载体pc DNA3-m FTH(3M)-Flag。重组质粒经酶切和测序鉴定正确后,用脂质体lipofectamineTM2000将其转染到RAW264.7细胞中,检测细胞中带有Flag标签的m FTH(3M)蛋白的表达。[结果]重组质粒酶切得到预期片段,测序显示所构建的m FTH(3M)真核表达载体序列正确,细胞内检测到带Flag标签的m FTH(3M)蛋白信号的强烈表达。[结论]实验成功构建了小鼠FTH亚铁氧化酶活性位点基因突变的真核表达载体pc DNA3-m FTH(3M)-Flag。
  • 【会议】 去铁胺联合吉西他滨对肾癌Caki-1细胞迁移侵袭的影响

    作者:段相林 ; 沈永青 ; 刘贝 ; 田占涛 机构:河北师范大学生命科学学院,铁代谢分子生物学实验室 ; 河北师范大学生命科学学院,铁代谢分子生物学实验室 年份:2013
    摘要:目的探讨去铁胺联合吉西他滨对肾癌Caki-1细胞迁移侵袭的影响。方法采用去铁胺(Defroxmaine,DFO)(100 u M)、吉西他滨(Gemcitabine,GEM)(100 n M)单独及联合作用于肾癌细胞株Caki-1后,应用细胞划痕愈合实验及细胞迁移实验检测细胞迁移能力,明胶酶图实验检测细胞MMP-2活性,细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blot免疫印迹法检测上皮钙粘素(E-cadherin,ECAD)的表达量。结果 24h时对照组划痕近乎愈合,而两药单用组划痕愈合较差,联合用药组划痕愈合
  • 【期刊】 FTL-EGFP融合基因真核表达载体的构建及其表达

    刊名:生物技术 作者:段相林 ; 徐慕陶 ; 何淑芬 ; 苗峻华 ; 刘思颖 ; 谭克 ; 樊玉梅 关键词:铁蛋白轻链 ; 绿色荧光蛋白 ; 分子克隆 ; 免疫印迹 机构:河北师范大学生命科学学院 ; 河北师范大学生命科学学院 年份:2017
    摘要:[目的]构建小鼠铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)真核表达载体并检测其表达。[方法]利用PCR扩增技术得到小鼠560 bp的FTL基因编码序列,将此序列插入到含有增强型绿色荧光基因EGFP的真核表达载体PEGFP/N1多克隆位点区域中的限制内切酶HindⅢ和Bam HⅠ之间,得到真核表达载体m FTL-PEGFP/N1。经酶切和测序鉴定后,将构建成功的m FTL-PEGFP/N1及其对照空载体PEGFP/N1分别转染到小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞中,提取蛋白后利用免疫印迹技术检测细胞中带有PEGFP标签的FTL蛋白的表达。[结果]新构建的m FTL-PEGFP/N1重组质粒经酶切鉴定得到预期片段,进一步的测序结果显示所构建的重组质粒中插入的小鼠FTL基因的c DNA序列正确。[结论]利用分子克隆技术获得了带有绿色荧光蛋白标签的小鼠铁蛋白轻链真核表达载体m FTL-PEGFP/N1,并在细胞中表达良好。
  • 【期刊】 小鼠铁调素1功能肽Hepc25的表达及纯化

    刊名:解剖学报 作者:段相林 ; 赵述强 ; 石振华 ; 栗海峰 ; 常彦忠 关键词:Hepcidin1 ; Hepc25 ; 铁代谢 ; 融合蛋白 ; SDS-PAGE ; 层析 ; 免疫印迹法 ; 小鼠 机构:河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学实验室 ; 河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学实验室 年份:2012
    摘要:目的利用原核生物表达载体表达小鼠铁调素功能肽Hepc25,并对其进行纯化。方法选取编码25aa的Hepc25基因与硫氧还蛋白基因融合后在大肠杆菌中大规模诱导表达该融合蛋白,以RT-PCR法扩增小鼠Hepcidin1功能肽基因Hepc25,将目的基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中获得pET-32a-Hepc25,再以pET-32a-Hepc25转化大肠杆菌BL21表达融合蛋白,收集菌体蛋白,用Western blotting和SDS-PAGE法检测融合蛋白,优化融合蛋白高表达条件。依次利用亲和层析、离子交换层析和凝胶排阻层析法纯化融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切、高效液相色谱法(HPLC)分离纯化获得了目的蛋白Hepc25。结果成功构建了小鼠pET-32a-Hepc25融合蛋白表达载体,融合蛋白表达量约占大肠杆菌BL21总蛋白量的28%,融合蛋白在33℃、120r/min、终浓度为0.2mmol/L的异丙基-β-D硫化半乳庶糖(IPTG)诱导8h的条件下表达量最高,融合蛋白纯度达95%。融合蛋白经过色谱分离、酶切和HPLC分析,目的蛋白的纯度也达95%以上。结论利用原核生物表达载体成功表达并纯化了小鼠铁调素功能肽Hepc25,并筛选出了高表达的优化条件。
  • 【期刊】 Y染色体多态性与临床遗传学效应的研究

    刊名:中国妇幼保健 作者:段相林 ; 李亚丽 ; 高福禄 关键词:Y染色体 ; 染色体多态性 ; 遗传学效应 机构:河北省人民医院三优中心 ; 河北省人民医院三优中心 ; 河北师范大学生命学院 年份:2013
    摘要:目的:探讨Y染色体多态性的临床遗传效应。方法:对因配偶自然流产史、育儿智力低下或本人发育异常、不育等进行遗传咨询的男性病例进行外周血淋巴细胞培养和G显带染色体核型分析。结果:检出183例Y染色体呈多态性,其中148例46,XY,Y≥18;30例46,XY,Y≤21;3例46,X,Yqs;1例46,X,Yq-;1例46,X,Yp+。148例大Y病例中,91例与自然流产相关;34例与配偶不良孕史相关,包括:神经管畸形、唇腭裂、消化道畸形、心脏畸形等;7例智力低下;6例性腺发育不良;10例不育。小Y病例主要与流产、智力低下、性腺发育不良、无精子症等相关。结论:Y染色体的多态性具有临床遗传效应,它与流产、发育异常及智力低下有关。
  • 【期刊】 靶向FTL基因的shRNA真核表达载体的构建及鉴定

    刊名:生物技术 作者:段相林 ; 蔡琳琳 ; 柳彩芝 ; 黄永茂 ; 王胜南 ; 樊玉梅 关键词:FTL基因 ; RNA干扰 ; shRNA ; 真核表达载体 机构:河北师范大学生命科学院 ; 河北师范大学生命科学院 ; 河北化工医药职业技术学院化学与环境工程系 年份:2014
    摘要:目的:为了构建铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)的短发夹小干扰RNA表达载体,并提供进一步研究FTL功能的平台。方法:针对小鼠FTL基因的特异性位点设计并合成特异性长度约65bp的短发夹状小干涉RNA(shRNA)寡核苷酸序列,退火形成双链后将其插入真核表达载体pRNA-U6.1/neo的限制性内切酶HindⅢ和Bam HⅠ之间中,构建成FTL基因的干扰载体(FTL shRNA)。经测序鉴定正确后,用lipofectamineTM2000将FTL shRNA及其对照空载体pRNA-U6.1/neo分别转染到小鼠腹腔单核巨噬细胞(RAW264.7)中,提取蛋白后利用Western blot技术检测细胞中FTL蛋白的表达。结果:得到与预期目的片段大小相似的重组载体,测序结果显示所构建的小鼠FTL shRNA质粒序列正确。细胞内的FTL表达被FTL shRNA成功干扰,效率高达80%。结论:实验成功构建了小鼠FTL基因的短发夹小RNA干扰表达载体FTL shRNA。
  • 【期刊】 DNA连接酶Ⅲ在线粒体基因组完整性保持中的作用

    刊名:生物化学与生物物理进展 作者:段相林 ; 郭晓强 ; 沈永青 ; 郭振清 ; 常彦忠 关键词:DNA连接酶Ⅲ ; DNA修复 ; 线粒体DNA ; 基因组完整性 机构:河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学研究室 ; 河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学研究室 ; 解放军白求恩军医学院生化教研室 ; 河北科技师范学院生命科学系 年份:2012
    摘要:真核DNA连接酶(DNA ligase)通过催化ATP依赖的双链DNA切口连接而在DNA复制、重组和修复过程中发挥了重要作用.DNA连接酶Ⅲ(Lig3)是一种独特性的连接酶,既可定位于细胞核,又可定位于线粒体.Lig3通过与DNA修复蛋白XRCC1作用而参与了碱基切除修复和其他单链断裂修复.但Lig3以XRCC1不依赖方式在线粒体DNA完整性保持方面发挥了更为重要的作用.这些研究为Lig3功能和DNA修复研究提供了新的视野.
  • 【期刊】 DNA连接酶Ⅲ在线粒体基因组完整性保持中的作用

    刊名:《生物化学与生物物理进展》 作者:段相林 ; 郭晓强 ; 沈永青 ; 郭振清 ; 常彦忠 关键词:DNA连接酶Ⅲ ; DNA修复 ; 线粒体DNA ; 基因组完整性 机构:河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学研究室 ; 河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学研究室 ; 解放军白求恩军医学院生化教研室 ; 河北科技师范学院生命科学系 年份:2012
    摘要:真核DNA连接酶(DNA ligase)通过催化ATP依赖的双链DNA切口连接而在DNA复制、重组和修复过程中发挥了重要作用.DNA连接酶Ⅲ(Lig3)是一种独特性的连接酶,既可定位于细胞核,又可定位于线粒体.Lig3通过与DNA修复蛋白XRCC1作用而参与了碱基切除修复和其他单链断裂修复.但Lig3以XRCC1不依赖方式在线粒体DNA完整性保持方面发挥了更为重要的作用.这些研究为Lig3功能和DNA修复研究提供了新的视野.
  • 【期刊】 组蛋白去甲基化酶PHD锌指蛋白8与神经发育

    刊名:生物化学与生物物理进展 作者:段相林 ; 郭晓强 ; 沈永青 ; 刘贝 ; 常彦忠 关键词:组蛋白去甲基化酶 ; PHD锌指蛋白8 ; X-连锁智力迟滞 ; 神经发育 机构:河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学研究室 ; 河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学研究室 ; 解放军白求恩军医学院生化教研室 ; 北京大学深圳医院男性生殖与遗传广东省重点实验室 年份:2011
    摘要:PHD锌指蛋白8(PHF8)是一种Fe2+和α-酮戊二酸依赖的组蛋白赖氨酸去甲基化酶.PHF8属于包含JmjC结构域蛋白家族,在N端还含有一个PHD(planthomeodomain)锌指结构域.人的PHF8基因突变往往破坏组蛋白去甲基化酶活性,从而引发遗传性X-连锁智力迟滞(XLMR)并伴发唇裂的发生.PHF8一方面可催化H3K9me2/1、H4K20me1和H3K27me2的去甲基化,另一方面还通过N端PHD锌指结构域与H3K4me3结合而发挥转录共激活作用.PHF8可调节rRNA和多个涉及神经发育的蛋白质编码基因如JARID1C的表达.这些研究显示,PHF8是一种重要的神经发育调节因子,从而拓宽了对组蛋白甲基化与基因表达关联的理解,同时为XLMR疾病的理解提供了新的线索.
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