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  • 【期刊】 miR-204对人晶状体上皮细胞移行的影响

    刊名:哈尔滨医科大学学报 作者:王晓媛[1] ; 白洁[1] ; 丛丽丹[1] ; 高维奇[1] ; 宋武琦[2] ; 张凤民[2] 关键词:人晶体上皮细胞 腺病毒 miR-204 转染 细胞移行 机构:哈尔滨医科大学附属第一医院眼科 ; 哈尔滨医科大学附属第一医院眼科 年份:2017
    摘要:目的 探讨经体外转染携带有miR-204的重组腺病毒ADV-miR-204对人晶状体上皮细胞移行的影响。方法 ADV-miR-204在293细胞中扩增、分离纯化并滴定病毒滴度;ADV-miR-204体外转染人晶体上皮细胞HLE-B3,细胞划痕法测定ADV-miR-204对HLE-B3移行的影响。结果 测定ADVmiR-204的病毒滴度为1.5×109pfu/m L;ADV-miR-204以MOI为10、50、100、200、500分别感染HLE-B372 h后,细胞移行愈合率随着ADV-miR-204的感染浓度增加而降低,MOI=100组与MOI=50组、MOI=10组相比差异显著(P〈0.05)。而在MOI=100、MOI=200、MOI=500实验组组间差异不明显。同一感染浓度(MOI=100),不同时间点(0~72 h)下感染组细胞移行愈合率与正常细胞组比较均明显降低(P〈0.05)。结论 ADV-miR-204可成功转染人晶体上皮细胞,并可减缓细胞的移行。
  • 【期刊】 miR-126对人晶状体上皮细胞凋亡的影响

    刊名:中国老年学杂志 作者:汪静 关键词:miR-126 ; 锌指蛋白Kruppel样因子6 ; 人晶状体上皮细胞 ; 凋亡 ; 白内障 机构:武汉市艾格眼科医院 ; 武汉市艾格眼科医院 年份:2018
    摘要:目的探讨miR-126表达水平对人晶状体上皮细胞系HLEB3凋亡的影响及作用机制。方法使用H2O2构建HLEB3体外凋亡模型,qRT-PCR检测miR-126水平变化;使用脂质体2000分别将miR-126模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)以及二者相应的阴性对照转染到HLEB3中,分别上调、下调细胞中miR-126表达,转染48 h后qRT-PCR验证转染效率,流式细胞仪检测各组HLEB3凋亡水平;通过靶基因预测软件预测miR-126可能靶向调控KLF6基因的表达,检测各组HLEB3中KLF6 mRNA和蛋白表达水平。结果 HLEB3凋亡模型中miR-126相对表达量明显高于正常HLEB3,差异有统计学意义(P<0.01)。模拟物组HLEB3凋亡率明显低于模拟物阴性对照组;抑制物组HLEB3凋亡率明显高于抑制物阴性对照组;差异均有统计学意义(均P<0.05)。模拟物组HLEB3中KLF6 mRNA相对表达量明显低于模拟物阴性对照组,抑制物组KLF6 mRNA相对表达量明显高于抑制物阴性对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);模拟物组HLEB3中KLF6蛋白相对表达量明显低于模拟物阴性对照组,抑制物组KLF6蛋白相对表达量明显高于抑制物阴性对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 miR-126在HLEB3凋亡模型中表达上调,miR-126可通过调控KLF6基因表达来影响HLEB3凋亡,在白内障发病机制中发挥作用。
  • 【期刊】 miR-126对人晶状体上皮细胞凋亡的影响

    刊名:《中国老年学杂志》 作者:汪静 关键词:MIR-126 ; 锌指蛋白Kruppel样因子6 ; 人晶状体上皮细胞 ; 凋亡 ; 白内障 机构:武汉市艾格眼科医院 ; 武汉市艾格眼科医院 年份:2018
    摘要:目的探讨miR-126表达水平对人晶状体上皮细胞系HLEB3凋亡的影响及作用机制。方法使用H2O2构建HLEB3体外凋亡模型,qRT-PCR检测miR-126水平变化;使用脂质体2000分别将miR-126模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)以及二者相应的阴性对照转染到HLEB3中,分别上调、下调细胞中miR-126表达,转染48h后qRT—PCR验证转染效率,流式细胞仪检测各组HLEB3凋亡水平;通过靶基因预测软件预测miR-126可能靶向调控KLF6基因的表达,检测各组HLEB3中KLF6mRNA和蛋白表达水平。结果HLEB3凋亡模型中miR-126相对表达量明显高于正常HLEB3,差异有统计学意义(P〈0.01)。模拟物组HLEB3凋亡率明显低于模拟物阴性对照组;抑制物组HLEB3凋亡率明显高于抑制物阴性对照组;差异均有统计学意义(均P〈0.05)。模拟物组HLEB3中KLF6mRNA相对表达量明显低于模拟物阴性对照组,抑制物组KLF6mRNA相对表达量明显高于抑制物阴性对照组,差异均有统计学意义(均P〈0.05);模拟物组HLEB3中KLF6蛋白相对表达量明显低于模拟物阴性对照组,抑制物组KLF6蛋白相对表达量明显高于抑制物阴性对照组,差异均有统计学意义(均P〈0.05)。结论miR-126在HLEB3凋亡模型中表达上调,miR-126可通过调控KLF6基因表达来影响HLEB3凋亡,在白内障发病机制中发挥作用。
  • 【期刊】 miR-21对晶状体上皮细胞增殖、迁移的影响

    刊名:临床和实验医学杂志 作者:王堃 ; 胡玥 ; 赵梅生 关键词:晶状体上皮细胞 ; miR-21 ; 细胞增殖 ; 细胞迁移 机构:吉林大学第二医院眼科中心白内障科 ; 吉林大学第二医院眼科中心白内障科 年份:2019
    摘要:目的探讨miR-21对晶状体上皮细胞增殖、迁移的影响。方法人晶状体上皮细胞(HLE-B3)随机分为三组,实验组转染miR-21模拟剂(mimic),对照组转染miR-21阴性对照(NC),空白组加入等剂量的磷酸盐缓冲液(PBS)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,双染法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移,Western-blot检测细胞Bcl-2、Akt蛋白表达。对三组上述各指标进行比较。结果转染48 h后,实验组中miR-21相对表达水平显著上升,与空白组、对照组比较差异均有统计学意义(P <0. 05)。转染24 h、48 h后,实验组的细胞增殖活性显著低于空白组与对照组(P <0. 05);转染48 h后,实验组的细胞凋亡率显著高于空白组与对照组(P <0. 05),迁移距离与过膜细胞数都显著少于空白组与对照组(P <0. 05)。转染48 h后,实验组的Bcl-2、Akt蛋白表达水平显著低于空白组与对照组(P <0. 05),空白组与对照组对比差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 miR-21能通过调节晶状体上皮细胞中Bcl-2、Akt蛋白的表达,从而抑制细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。
  • 【期刊】 MicroRNA-34a对人晶状体上皮细胞衰老的影响

    刊名:眼科新进展 作者:黎清兰 ; 郭海科 ; 张洪洋 关键词:人晶状体上皮细胞 ; MicroRNA-34a ; 衰老 机构:南方医科大学 ; 南方医科大学 ; 广东省人民医院 ; 广东省医学科学院 年份:2016
    摘要:目的探讨MicroRNA-34a(MiR-34a)对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)衰老的影响。方法通过慢病毒介导构建稳定过表达MiR-34a的HLEC-B3细胞株,荧光显微镜下观察细胞转染情况,采用qRT-PCR检测MiR-34的表达。采用β-半乳糖苷酸(SA-β-gal)染色检测HLEC-B3细胞的衰老情况。结果成功转染的细胞显示红色荧光。MiR-34a组MiR-34a的相对表达量(18.69±3.71)显著高于空载体组(1.00±0.02)(P<0.05),成功构建过表达MiR-34a的HLEC-B3细胞株。MiR-34a组和空载体组SA-β-gal染色阳性率分别为(87.67±4.51)%、(7.33±3.21)%,MiR-34a组高于空载体组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达MiR-34a促进HLEC衰老,提示MiR-34a可能参与了年龄相关性白内障的形成,有可能成为治疗年龄相关性白内障的新靶点。
  • 【期刊】 TGF-β_2对人晶状体上皮细胞SPARC表达的影响

    刊名:现代医院 作者:郭瑞 关键词:人晶状体上皮细胞 ; TGF-Β2 ; SPARC 机构:[1]广东首眼病防治研究所 ; [1]广东首眼病防治研究所 ; [2]广东首人民医院 ; [3]广东首医学科学院 年份:2018
    摘要:目的研究TGF-β2对人晶状体上皮细胞酸性富含胱氨酸分泌型蛋白(SPARC)表达的影响,以期为白内障的发病机制提供确切的理论依据。方法用终浓度为10 ng/ml的TGF-β2培养HLECs-B3细胞,连续培养0h、6 h、16 h、24 h。0 h细胞为对照组,6 h、16 h和24 h细胞为实验组。细胞免疫荧光法检测SPARC表达水平变化,Western blotting检测SPARC表达量的变化。结果细胞免疫荧光法检测结果显示,随着TGF-β2培养细胞时间的延长,SPARC表达的荧光逐渐增多增强,各实验组细胞SPARC表达的荧光均较对照组增多增强。Western blot法检测结果显示,随着TGF-β2培养细胞时间的延长,SPARC表达量逐渐增加,各实验组细胞SPARC表达量均较对照组明显增加,各实验组与对照组SPARC表达量的差异均具有统计学意义(P〈0.05)。结论 TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞SPARC表达增加。
  • 【期刊】 TGF-β_2对人晶状体上皮细胞SPARC表达的影响

    刊名:现代医院 作者:郭瑞 关键词:人晶状体上皮细胞 ; TGF-β2 ; SPARC 年份:2018
    摘要:目的研究TGF-β2对人晶状体上皮细胞酸性富含胱氨酸分泌型蛋白(SPARC)表达的影响,以期为白内障的发病机制提供确切的理论依据。方法用终浓度为10 ng/ml的TGF-β2培养HLECs-B3细胞,连续培养0h、6 h、16 h、24 h。0 h细胞为对照组,6 h、16 h和24 h细胞为实验组。细胞免疫荧光法检测SPARC表达水平变化,Western blotting检测SPARC表达量的变化。结果细胞免疫荧光法检测结果显示,随着TGF-β2培养细胞时间的延长,SPARC表达的荧光逐渐增多增强,各实验组细胞SPARC表达的荧光均较对照组增多增强。Western blot法检测结果显示,随着TGF-β2培养细胞时间的延长,SPARC表达量逐渐增加,各实验组细胞SPARC表达量均较对照组明显增加,各实验组与对照组SPARC表达量的差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞SPARC表达增加。
  • 【期刊】 TGF-β2对人晶状体上皮细胞SPARC表达的影响

    刊名:现代医院 作者:郭瑞 关键词:人晶状体上皮细胞 ; TGF-β2 ; SPARC 年份:2018
    摘要:目的 研究TGF-β2对人晶状体上皮细胞酸性富含胱氨酸分泌型蛋白(SPARC)表达的影响,以期为白内障的发病机制提供确切的理论依据.方法 用终浓度为10 ng/ml的TGF-β2培养HLECs-B3细胞,连续培养0 h、6 h、16 h、24 h.0 h细胞为对照组,6 h、16 h和24 h细胞为实验组.细胞免疫荧光法检测SPARC表达水平变化,Western blotting检测SPARC表达量的变化.结果 细胞免疫荧光法检测结果显示,随着TGF-β2培养细胞时间的延长,SPARC表达的荧光逐渐增多增强,各实验组细胞SPARC表达的荧光均较对照组增多增强.Western blot法检测结果显示,随着TGF-β2培养细胞时间的延长,SPARC表达量逐渐增加,各实验组细胞SPARC表达量均较对照组明显增加,各实验组与对照组SPARC表达量的差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞SPARC表达增加.
  • 【期刊】 白光LED对大鼠晶状体上皮细胞 α-SMA表达的影响

    刊名:临床合理用药杂志 作者:姚领 ; 李军 ; 魏树瑾 ; 宋慧 关键词:晶状体上皮细胞 ; 白光LED ; 光损伤 ; 白内障 机构:天津医科大学眼科临床学院 ; 天津医科大学眼科临床学院 ; 天津市眼科医院 ; 天津市眼科学与视觉科学重点实验室 ; 天津市眼科研究所 年份:2018
    摘要:目的 观察大鼠晶状体上皮细胞接受白光LED照射后细胞内α-SMA基因及蛋白的表达情况.方法 选取SD大鼠60只,随机分为光照组和对照组各30例.光照组在对照组基础上将大鼠置于LED光照箱中进行光照.对照组在常规实验条件下饲养.分别使用Real-time PCR与Western blotting的方法检测2组晶状体上皮细胞中α-SMA mRNA和蛋白表达.结果 光照组的α-SMA基因表达水平为(1.00±0.01),高于对照组的(0.36±0.25),差异具有统计学意义(F=15.273,P=0.012).光照组α-SMA蛋白条带的矫正后灰度值为(0.44±0.02)明显高于对照组的(0.16±0.026),差异有统计学意义(F=0.348,P=0.000).结论 照度为1500勒克斯的LED光照射20 d(每天6 h)后,细胞内α-SMA mRNA和蛋白的表达上调,从而提示白光LED可能具有促进间充质转化过程的作用.
  • 【期刊】 HSP60在早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞的表达

    刊名:眼科新进展 作者:付书华 ; 詹昶 ; 仇晶晶 ; 张倩 ; 游志鹏 ; 刘菲 关键词:晶状体上皮细胞 ; HSP60 ; 糖尿病 机构:南昌大学第二附属医院眼科 ; 南昌大学第二附属医院眼科 年份:2015
    摘要:目的观察热休克蛋白(hot shock protein,HSP)在早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞的表达及变化,探讨HSP60在糖尿病性白内障病变中的作用。方法鼠龄为6~8周的SD大鼠随机分成糖尿病组及对照组,每组18只,糖尿病组在禁食12 h后一次性腹腔注射10 g·L-1链脲佐菌素诱发糖尿病模型,成功诱导糖尿病模型后4周、8周、12周分别应用免疫组织化学法及Western blot分析晶状体上皮细胞上HSP60的表达变化。结果对照组大鼠晶状体上皮细胞上未发现有HSP60表达,糖尿病组大鼠在造模后4周、8周、12周均可见晶状体上皮细胞上有HSP60表达,两组间有显著差异(均为P<0.05)。糖尿病组大鼠造模后4周和8周间表达量无明显差异(P>0.05);而12周时其表达量开始减少,和4周及8周相比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞有大量HSP60表达,而且随着时间的延长,表达量呈下降趋势。
  • 【期刊】 miR-181调控人晶状体上皮细胞凋亡的机制研究

    刊名:国际眼科杂志 作者:秦宇 ; 赵江月 ; 罗文婷 ; 李晶 ; 刘佳 ; 张劲松 关键词:微小RNA ; miR-181 ; 细胞凋亡 ; 白内障 机构:中国医科大学附属第四医院眼科 ; 中国医科大学附属第四医院眼科 ; 中国医科大学眼科医院 ; 中国医科大学附属盛京医院实验研究中心 年份:2015
    摘要:目的:探讨miR-181在白内障晶状体组织中的表达情况,及其对人晶状体上皮细胞凋亡的调控机制。方法:利用Real time q-PCR方法,检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和人晶状体上皮细胞凋亡模型中miR-181的表达情况;利用Lipofectamine 2 000瞬时转染miR-181 mimic和inhibitor调节人晶状体上皮细胞中miR-181的表达,利用Real time q-PCR方法验证转染效率,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果:与对照组相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组和人晶状体上皮细胞凋亡模型组,miR-181的表达显著升高;miR-181 mimic转染组,miR-181的表达显著升高,细胞凋亡率显著升高;miR-181 inhibitor转染组,miR-181的表达显著降低,细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-181在年龄相关性白内障晶状体组织中呈高表达,miR-181能够促进人晶状体上皮细胞凋亡,从而可能在年龄相关性白内障的发病过程中发挥一定作用,miR-181可能成为白内障非手术治疗的一种新途径,但具体机制有待进一步研究。
  • 【期刊】 miR-29a抑制H_2O_2诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤

    刊名:眼科新进展 作者:李海燕 ; 郭琳 ; 张倩 ; 唐莉 ; 马波 关键词:miR-29a ; H_2O_2 ; 人晶状体上皮细胞 ; 氧化损伤 机构:西安市第四医院眼科 ; 西安市第四医院眼科 年份:2019
    摘要:目的探究miR-29a在H_2O_2诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤中的作用和机制。方法使用不同浓度(0μmol·L~(-1)、100μmol·L~(-1)、200μmol·L~(-1)、300μmol·L~(-1)、400μmol·L~(-1))的H_2O_2处理人晶状体上皮细胞HLE-B3,以确定后续实验中H_2O_2使用的浓度。将HLE-B3细胞随机分成4组:对照组、H_2O_2组、H_2O_2+模拟物对照组和H_2O_2+miR-29a模拟物组,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,Real-time PCR检测miR-29a和Bcl2修饰因子(Bcl2 modifying factor,BMF)、Bcl2拮抗/杀伤因子1(Bcl2-antagonist/killer 1,BAK1) mRNA表达,Western blotting检测BMF和BAK1蛋白表达。结果 HLE-B3细胞活力随着H_2O_2浓度的增加而降低,呈现剂量依赖性,后续实验H_2O_2浓度选择200μmol·L~(-1)。与对照组相比,H_2O_2组中miR-29a的表达(0.56±0.12)下调,细胞活力[(59.67±10.09)%]和SOD含量[(52.97±6.64)U·mL~(-1)]降低,细胞凋亡率[(40.30±4.76)%]和ROS水平[(299.52±43.95)%]增加,BMF和BAK1 mRNA和蛋白表达均上调,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与H_2O_2组相比,H_2O_2+miR-29a模拟物组中miR-29a的表达(4.49±0.55)上调,细胞活力[(92.83±8.09)%]和SOD含量[(84.03±6.31)U·mL~(-1)]增加,细胞凋亡率[(18.74±2.48)%]和ROS水平[(143.13±21.32)%]降低,BMF和BAK1 mRNA和蛋白表达均下调,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与H_2O_2组相比,H_2O_2+模拟物对照组上述指标变化均不大,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论上调miR-29a可促进H_2O_2诱导的人晶状体上皮细胞的细胞增殖、抑制细胞凋亡、减少氧化损伤,这些作用可能与BMF和BAK1的表达下调相关。
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