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  • 【期刊】 脂肪间充质干细胞CD73亚群心肌分化能力评价

    刊名:解剖学报 作者:张珉 ; 高建辉 ; 李琼 ; 余霞 ; 王晶晶 ; 郭志坤 关键词:心肌分化 ; CD73 ; 心肌特异性肌钙蛋白T ; 脂肪间充质干细胞 ; 流式细胞术 ; 小鼠 机构:河南省肿瘤医院肝胆胰外科 ; 河南省肿瘤医院肝胆胰外科 ; 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室 年份:2016
    摘要:目的探讨CD73+和CD73-脂肪间充质干细胞(ADMSCs)两个亚群向心肌分化能力的差异,筛选出心肌分化优势亚群,为进一步开展细胞治疗心肌疾患提供实验参考。方法流式细胞仪分选CD73+/CD73-ADMSCs亚群,HE染色观测其形态。体外5-氮杂胞甙(5-aza)诱导CD73+/CD73-亚群,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白T(c Tn T),Real-time PCR检测c Tn T、Gata-4变化;4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记两个亚群后,移植到大鼠心肌内,免疫荧光法检测移植细胞c Tn T表达。结果 CD73+ADMSCs形态以小细胞为主呈细长形或纺锤状,CD73-细胞以宽大扁平或方形等为主。体外成心肌诱导后,CD73+ADMSCs心肌特异性c Tn T表达率为45.5%、CD73-亚群为5.75%,基因水平上CD73+亚群表达c Tn T、Gata-4明显高于阴性亚群(P<0.01)。体内CD73+亚群较阴性亚群高表达c Tn T。结论 CD73+ADMSCs较CD73-ADMSCs具有更高向心肌分化的潜能,CD73+ADMSCs可能更具有心肌治疗的前景。
  • 【期刊】 共表达网络分析识别心肌分化过程中的关键因子

    刊名:电子技术与软件工程 作者:张艺 关键词:心肌分化 ; 共表达网络 ; 聚类模块 ; 网络拓扑 ; 关键因子 机构:北京交通大学计算机与信息技术学院交通数据分析与挖掘北京市重点实验室 ; 北京交通大学计算机与信息技术学院交通数据分析与挖掘北京市重点实验室 年份:2019
    摘要:目的:心脏疾病末期伴随着心肌细胞的大量缺失,心肌细胞直接重编程有助于心肌细胞再生,使心脏功能得以修复。要提高直接重编程的效率,需要更清楚心脏发育过程中相关转录因子的调控机制,发掘关键转录因子。方法:从NCBI的GEO下载心肌发育的单细胞转录组测序(scRNA-seq)数据GSE76118,对单细胞数据进行预处理后,利用加权基因共表达网络分析算法构建转录因子之间共表达网络,寻找与心肌分化相关的功能聚类模块,之后结合网络拓扑性特征参数筛选关键转录因子,从而组建更高效的转录因子组合,进行实验验证。结果:从共表达网络中发现与心肌相关的功能模块,根据网络拓扑性挖掘到关键的候选因子。结论:构建基因共表达网络的分析方法,有利于发掘关键功能模块、关键节点基因,是探索细胞命运机制的一个高效途径。
  • 【期刊】 三氯乙烯对人胚胎干细胞心肌分化的影响和机制

    刊名:中国应用生理学杂志 作者:王丹 ; 陈涛 ; 王国卿 ; 姜岩 关键词:心肌分化 ; 三氯乙烯 ; 人胚胎干细胞 ; 基因表达 ; 钙离子通道 机构:苏州大学医学部 ; 苏州大学医学部 年份:2015
    摘要:目的:探讨三氯乙烯(TCE)对人胚胎干细胞心肌发育分化的影响。方法:以人胚胎干细胞H9体外心肌定向分化为模型,分化培养液中添加不同剂量的TCE(分别为处理组100 ppb组,1 ppm组,10 ppm组)以及DMSO(对照组)。对诱导后形成的拟胚体以及不同发育阶段的细胞进行检测,通过MTT法测定细胞的生存能力,统计有自主节律跳动的拟胚体的数量;流式细胞仪计数分析细胞分化比例;荧光定量PCR检测心肌特异性基因表达;并应用基因芯片方法初步筛选检测三氯乙烯对心肌细胞钙离子通道相关的基因表达的影响。结果:TCE的三个浓度处理组均未显示细胞毒性,但高浓度组明显抑制向心肌细胞分化,能产生自主节律搏动的拟胚体比例显著降低,同时心肌特异性标记物c Tn T表达随剂量的增加而显著降低。在具有自主节律性的拟胚体中,钙离子通路的相关基因表达受到影响。结论:推测TCE通过降低成熟心肌的比例,以及影响心肌细胞中钙离子通道相关基因表达来共同导致心脏发育异常。
  • 【期刊】 抑瘤素M促进小鼠诱导多能干细胞向心肌分化

    刊名:基础医学与临床 作者:王记 ; 陆玉琴 ; 徐鑫 ; 纪召娟 关键词:抑瘤素M ; 小鼠诱导多能干细胞 ; 心肌细胞 ; 分化 机构:甘肃中医药大学附属医院 ; 甘肃中医药大学附属医院 年份:2017
    摘要:目的 以小鼠诱导多能干细胞(miPSCs)为模型探讨抑瘤素M(OSM)在心肌细胞分化中的作用.方法 用拟胚体分化法,在分化前中期(0~6 d)加入OSM培养分化15 d,实时荧光定量PCR、Western blot与免疫荧光染色法检测心肌细胞特异性标志物.结果 OSM诱导miPSCs分化为心肌细胞的最佳浓度为20 pmol/L,此时心肌肌钙蛋白T (cTnT)表达为对照组的7倍(P<0.05);诱导组心肌细胞特异性基因和蛋白全面高于对照组(P<0.05);心肌特异性标志物cTnT染色显阳性,且与对照组相比,诱导组cTnT阳性细胞比率明显增高(P<0.05).结论 抑瘤素M促进了miPSCs向心肌细胞的高效分化,为干细胞的心肌分化提供了一种有效的分化策略.
  • 【期刊】 1-磷酸鞘氨醇促进间充质干细胞向心肌分化

    刊名:生物工程学报 作者:姜丽丽 ; 刘天庆 ; 宋克东 ; 关水 ; 李香琴 ; 葛丹 关键词:心肌分化 ; 脐带间充质干细胞 ; 脂肪间充质干细胞 ; 1-磷酸鞘氨醇 ; 心肌细胞 机构:大连理工大学化工学院干细胞与组织工程研发中心 ; 大连理工大学化工学院干细胞与组织工程研发中心 ; 大连理工大学盘锦校区生命与医药学院 年份:2013
    摘要:为研究1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)对脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)和脂肪间充质干细胞(Adipose derived mesenchymal stem cells,AD-MSCs)向心肌分化的影响,探索其适宜的作用时间和浓度,将UC-MSCs和AD-MSCs接种到培养板,用添加不同浓度S1P的心肌细胞培养液诱导两种干细胞向心肌分化,诱导时间分为7 d、14 d和28 d。采用免疫荧光染色检测心肌特异性蛋白,α-肌动蛋白(α-actin)、缝隙连接蛋白(Connexin-43)以及肌球蛋白重链(MYH-6)的表达,并通过共聚焦显微镜和荧光显微镜进行观察;采用MTT分析细胞的活性;膜片钳检测分化细胞的钙瞬变(此为心肌细胞的功能性指标)。结果表明,S1P与心肌细胞培养液协同作用,能够促进UC-MSCs和AD-MSCs向心肌细胞的分化。并且,随着S1P浓度的增加,促分化作用增强,但细胞活性降低。S1P在心肌细胞培养液中的适宜作用时间为14 d,适宜作用浓度为0.5μmol/L。而且联合心肌细胞培养液可以使UC-MSCs和AD-MSCs的心肌分化细胞产生钙瞬变,具有类似心肌细胞的功能性。S1P能够与心肌细胞培养液协同作用,促进UC-MSCs和AD-MSCs的心肌功能性分化。
  • 【期刊】 骨髓间充质干细胞亚群心肌分化基因的筛选

    刊名:西南国防医药 作者:滕小梅 ; 贺继刚 ; 王霄琳 ; 吴伟华 关键词:心肌分化 ; 骨髓 ; 间充质干细胞 ; 基因芯片 机构:苏州大学附属第一医院心血管外科 ; 苏州大学附属第一医院心血管外科 ; 苏州大学附属第一医院检验科 年份:2014
    摘要:目的利用基因芯片筛选小鼠骨髓间充质干细胞4个亚群的差异表达基因,寻找心肌分化特异性基因。方法将小鼠骨髓间充质干细胞通过CD45和CD31的磁珠分选,获得SCA-1+/CD45-/CD31-、SCA-1+/CD45-/CD31+、SCA-1+/CD45+/CD31+及SCA-1+/CD45+/CD31-4群细胞。采用基因芯片技术完成Agilent小鼠全基因4*44K芯片表达谱基因检测,分析差异表达基因。根据基因芯片中所检测的基因表达量在SCA-1+/CD45+/CD31+亚群中最高,且为其他亚群表达量的两倍以上为原则,通过RT-PCR验证各亚群及未分选细胞中的差异基因的表达量。结果根据皮尔森关联算法计算4组细胞亚群之间的关联值位于0.979~0.995之间,通过RT-PCR检测发现,Rock2基因在SCA-1+CD45-CD31-亚群中表达最高,而在SCA-1+CD45+CD31+亚群中表达很低,Itga4在未分选群中表达最高;Cxadr在SCA-1+CD45-CD31-亚群中表达最高;Epor在SCA-1+CD45-CD31+亚群中表达最高;myl3在SCA-1+CD45+CD31+亚群中表达最高。结论 Rock2、Cxadr、Itga4、Epor和myl3基因在干细胞亚群向心肌分化中发挥不同作用。
  • 【期刊】 miRNA-19b对P19CL6细胞心肌分化晚期增殖及凋亡的影响

    刊名:《中华医学杂志》 作者:韩宇 ; 范太兵 ; 彭帮田 ; 李斌 ; 程江涛 ; 徐红党 ; 高传玉 ; 程兆云 关键词:心肌细胞 ; 细胞分化 ; 细胞增殖 ; 细胞凋亡 机构:郑州大学人民医院儿童心脏中心 ; 郑州大学人民医院儿童心脏中心 ; 郑州大学人民医院心内科 ; 郑州大学人民医院麻醉科 ; 郑州大学人民医院心外科 年份:2018
    摘要:目的探讨miR-19b对晚期分化P19CL6细胞功能的影响及其作用机制。方法通过脂质体2000转染技术将miR-19b过表达质粒与空载质粒转染到P19CL6细胞中;二甲基亚砜(DMSO)诱导小鼠P19CL6细胞株和稳定表达miR-19b的细胞株进行分化;MTT法和流式细胞术检测miR-19b对细胞活力和凋亡的影响;Western印迹检测P19CL6细胞中Sox6的表达;ELISA法和Western印迹检测细胞分化晚期P19CL6凋亡相关蛋白(Bax, Bcl-2)的表达变化;使用TargetScan预测及双荧光素酶报告基因实验证实miR-19b与Sox6的靶向作用。结果miR-19b在分化的晚期(第10天起)表达量显著降低。miR-19b过表达显著促进细胞增殖和抑制细胞凋亡;且凋亡相关蛋白Bax表达显著降低,而Bcl-2表达增加,即凋亡蛋白Bax/Bcl-2比例降低;TargetScan预测及双荧光素酶报告基因实验证实Sox6是miR-19b的靶基因。结论在心肌细胞发育晚期,miR-19b可能通过靶向干扰Sox6基因的表达,促进P19CL6细胞的增殖抑制细胞的凋亡。
  • 【会议】 PM2.5抑制P19小鼠畸胎瘤干细胞心肌分化的分子机制

    作者:王会敏 ; 金红梅 ; 童建 ; 陈涛 ; 姜岩 机构:苏州大学医学部基础医学与生命科学学院 ; 苏州大学医学部基础医学与生命科学学院 年份:2018
    摘要:目的多项研究表明大气PM_(2.5)与先天性心脏病相关,但其分子机制尚不明确。P19小鼠畸胎瘤干细胞是研究心肌分化的常用细胞模型。本研究用PM_(2.5)染毒P19小鼠畸胎瘤干细胞,检测对心肌分化的影响及相关分子机制。方法利用P19畸胎瘤干细胞,建立体外心肌定向分化模型,MTT法检测PM_(2.5)暴露对P19细胞毒性,浓度梯度为0、1、10、100mg/L;选择非细胞毒性的PM_(2.5)暴露剂量(10mg/L)进行后续研究。分化启动后,显微镜下观察形态学改变,qPCR检测不同分化期相关标志物OCT4、ISL1、MLC2V的表达变化(分别为干细胞
  • 【论文】 诱导干细胞心肌分化中甲基化修饰作用探讨

    作者:易勤 关键词:Islet-1 ; C3H10T1/2 ; DNA甲基化 ; 组蛋白甲基化 ; 心肌细胞 机构:重庆医科大学 ; 重庆医科大学 年份:2016
    摘要:目的在Islet-1诱导间充质干细胞C3H10T1/2向心肌样细胞定向分化过程中的早期相关基因启动子区甲基化修饰作用探讨。方法1.实验分组:(1)空白对照组(未经处理的C3H10T1/2细胞),(2)阴性对照组(感染慢病毒空载体的C3H10T1/2细胞Lv-GFP),(3)高表达Islet-1的C3H10T1/2细胞组,分为1周、2周、3周、4周四个时间点(Islet-1-1W、Islet-1-2W、Islet-1-3W、Islet-1-4W),(4)在过表达Islet-1的C3H10T1/2中加入5-Aza的细胞组,为Islet-1+5-Aza组,(5)在过表达Islet-1的C3H10T1/2中加入BIX01294的细胞组,为Islet-1+BIX01294组。2.实验方法:荧光倒置相差显微镜观察各组细胞的形态与绿色荧光,流式细胞术(Flow CytoMetry,FCM)检测转染效率,用蛋白印迹法检测Islet-1蛋白表达,用实时荧光定量PCR检测Mef2c、GATA4、Nkx2.5的mRNA的时序性表达,用免疫荧光检测心肌特异蛋白cTnT、CX43的表达,用甲基化特异PCR检测各组细胞的心肌特异早期基因CPG岛的DNA甲基化水平,用染色质免疫共沉淀检测在GATA4、Nkx2.5启动子区结合的组蛋白甲基化水平。结果1.荧光倒置显微镜显示绿色荧光稳定表达;流式细胞检测islet-1的转染效率为91.7%;westernblot显示转染islet-1细胞组高表达islet-1蛋白;与空白和阴性对照组相比,islet-1组的细胞形态呈现出方向均一、短棒状、排列紧密;免疫荧光结果表明,转染islet-1细胞心肌特异性蛋白ctnt在细胞质中表达,心肌早期发育的特异性缝隙连接蛋白cx43在细胞膜上表达;q-pcr检测心肌特异早期转录因子nkx2.5、gata4和mef2c的表达逐渐增高,在第三周最明显(*p<0.05),第四周略有降低。2.msp检测gata4启动子区的cpg岛的第二个位点(1329bp-1489bp)dna甲基化水平,甲基化水平逐渐降低,在第三周最低(*p<0.05);msp检测nkx2.5启动子区cpg岛(51bp-219bp)的dna甲基化水平,各组几乎没有变化;染色质免疫共沉淀(chip)结果显示实验组gata4、nkx2.5基因启动子区组蛋白二甲基化水平依次降低,于第3周最低,且实验组各组均低于空白组和阴性对照组(*p<0.05)。3.chip检测显示islet-1+5-aza组的gata4启动子区组蛋白甲基化水平低于lv-islet-1组(*p<0.05);msp检测显示islet-1+bix01294组gata4启动子区dna甲基化水平低于lv-islet-1组(*p<0.05)。结论1.在诱导mscs心肌分化中,gata4启动子区dna甲基化与gata4的表达负相关,而nkx2.5可能不受dna甲基化调控。2.在本研究过程中组蛋白h3k9位点的二甲基化水平与gata4、Nkx2.5的表达呈现负相关。3.在本研究过程中,心肌早期特异基因GATA4启动子区结合的组蛋白H3K9位点的二甲基化水平和DNA甲基化水平呈现正相关。
  • 【期刊】 microRNA对胚胎干细胞心肌分化的调控作用研究进展

    刊名:国际生物制品学杂志 作者:王江凯 关键词:微RNAs ; 胚胎干细胞 ; 肌细胞,心脏 ; 细胞分化 ; 基因表达调控 机构:上海生物制品研究所有限责任公司第二研究室 ; 上海生物制品研究所有限责任公司第二研究室 年份:2014
    摘要:microRNA (miRNA)是一类非编码小RNA分子,通过降解靶mRNA或抑制蛋白质翻译而在转录后水平上对基因表达进行负调控.近年来的大量研究表明,某些特异性miRNA在胚胎干细胞向心肌细胞分化的过程中发挥了不可替代的作用.此文阐述了miRNA的基本生物学特征,以及胚胎干细胞心肌分化及心脏发育过程中几种miRNA所发挥的作用.
  • 【期刊】 多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响

    刊名:临床儿科杂志 作者:王瑛 ; 朱春 ; 余章斌 ; 王薛洁 ; 潘亚 ; 彭宇竹 ; 郭锡熔 ; 韩树萍 关键词:心肌分化 ; 多氯联苯 ; P19细胞 ; GATA4基因 ; Nkx2.5基因 机构:南京医科大学附属南京市妇幼保健院儿科 ; 南京医科大学附属南京市妇幼保健院儿科 ; 南京医科大学附属常州市妇幼保健院儿科 年份:2011
    摘要:目的探讨多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响。方法在P19细胞向心肌细胞分化的培养液中加入多氯联苯(Aroclor 1254)2.5μmol/L,同时设立阴性对照组。显微镜下连续观察P19细胞形态的变化,并采用实时荧光定量RT-PCR技术对分化过程的第0、4、10天中GATA4及Nkx2.5基因mRNA的表达水平进行检测。结果在分化全程(0~10天),实验组与对照组无细胞形态上的差别;而GATA4、Nkx2.5基因的表达量除在分化开始前(第0天)差异无统计学意义外,在分化中期(第4天)及末期(第10天),实验组中GATA4、Nkx2.5基因的相对表达量均显著低于对照组。结论多氯联苯可通过对早期心脏发育相关重要基因的表达影响心肌分化进程。
  • 【期刊】 外源表达Nkx2.5诱导骨髓间充质干细胞向心肌分化

    刊名:解剖学报 作者:陈炜 ; 张雷 ; 孔祥增 ; 张金平 ; 赵昱 ; 李航 ; 李莉 ; 赵春芳 关键词:骨髓间充质干细胞 ; 心肌细胞 ; 细胞分化 ; 流式细胞术 ; 大鼠 机构:河北医科大学组织学胚胎学教研室 ; 河北医科大学组织学胚胎学教研室 ; 河北医科大学第一医院神经内科 年份:2012
    摘要:目的探讨转染外源性Nkx2.5基因对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌细胞分化的作用。方法全骨髓法分离大鼠BMSCs,经多次传代培养扩增纯化,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90、CD45。脂质体法将pEGFP-N1-Nkx2.5质粒转染BMSCs,观察细胞形态变化;转染48h后,免疫细胞化学检测Nkx2.5的表达。转染4周后,Western blotting检测心肌肌钙蛋白(cTnT)的表达;免疫细胞化学检测cTnT、GATA4的表达,鉴定细胞分化。结果第3代生长良好的细胞中表达CD90而不表达CD45的占细胞总数的99%。转染48h后,实验组可见部分细胞表达绿色的Nkx2.5-pEGFP融合蛋白,免疫细胞化学结果表明,Nkx2.5蛋白只在实验组有表达(n=3)。转染4周后,Western blotting、免疫细胞化学结果表明,cTnT、GATA4表达在实验组显著高于pEGFP-N1空质粒转染组和空白对照组(n=3)。结论外源表达Nkx2.5基因能够增强BMSCs向心肌分化
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