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  • 【期刊】 SLC-Her-2/neu-P53-Fc融合基因重组腺病毒表达载体的构建及检测

    刊名:癌症进展 作者:张叔人 ; 王慰敏 ; 孙文欣 ; 钱海利 ; 王海娟 ; 林晨 关键词:c-erbB-2 ; p53 ; 趋化因子SLC ; 重组腺病毒 ; 表达载体 机构:西安交通大学第一附属医院妇产科 ; 西安交通大学第一附属医院妇产科 ; 中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 年份:2014
    摘要:目的构建携带融合基因SLC-Her-2/neu-P53-Fc(SLC-HP-Fc)的重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc表达载体。方法提取SLC-HP基因及含Fc段基因的质粒构建携带目的基因的腺病毒穿梭载体pShuttle-CMVSLC-HP-Fc,经酶切线性化后转入含有pAdEasy-1质粒的E.coli BJ5183中进行同源重组,得到重组腺病毒真核表达载体AdEasyTM-SLC-HP-Fc。线性化后的病毒表达载体通过脂质体Lipofectamine 2000转染293细胞,通过包装扩增并经PCR鉴定后得到大量复制病毒并纯化保存。结果得到重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc,成功转染293细胞出现细胞病变反应,经酶切及PCR法确定目的基因的表达。结论成功构建了SLC-Her-2/neu-P53-Fc融合基因重组腺病毒表达载体,并建立了重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc种子病毒库和工作病毒库,为进一步研究该融合基因与肿瘤相关作用奠定了实验基础。
  • 【期刊】 C57小鼠源性淋巴瘤的基因枪途径抗肿瘤免疫研究

    刊名:延边大学医学学报 作者:张叔人 ; 李瑞永 ; 蔡春玉 ; 金文昊 关键词:淋巴瘤 ; 基因 ; 抑制 ; 肿瘤 ; 基因疗法 ; 质粒 ; 小鼠 机构:延边大学医学院附属医院肿瘤科 ; 延边大学医学院附属医院肿瘤科 ; 延边大学医学院附属医院呼吸内科 ; 延边大学医学院附属医院肿瘤科 ; 中国医学科学院肿瘤研究所免疫室 年份:2005
    摘要:[目的]诱导C57小鼠建立有效的抗肿瘤免疫.[方法]用基因枪途径给C57小鼠腹部接种含有粒巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)基因的质粒,24h后在同一部位注射FBL3肿瘤细胞破碎后的上清液,15d后用3×106个FBL3肿瘤细胞皮下接种攻击.[结果]肿瘤的生长受到抑制,小鼠的生存时间明显延长.[结论]基因枪途径局部接种含有GMCSF基因的质粒,可增强机体的抗肿瘤免疫,抑制肿瘤细胞的生长.
  • 【期刊】 学习新版《药品生产质量管理规范》强化体细胞治疗的质控

    刊名:中国肿瘤临床 作者:张叔人 关键词:《药品生产质量管理规范》 ; 体细胞治疗 ; 质控 机构:中国医学科学院 ; 中国医学科学院 ; 中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所免疫室 年份:2012
    摘要:2010年卫生部发布了97号令,有关新版《药品生产质量管理规范》。(以下简称药品GMP),其历经5年修订、2次公开征求意见完成。新版药品GMP吸收了国际先进经验,结合我国国情,按照"软件硬件并重"的原则,贯彻质量风险管理和药品生产全过程管理的理念,更加注重科学性,强调指导性和可操作性,达到了与世界卫生组织药品GMP的一致性。体细胞的制备与新版《药品生产质量管理规范》或制药有何关系,应首先分析体细胞与药品的相同点和不同点(表1,2)。此处所提及的体细胞不包括未经培养加工的血细胞或骨髓细胞,不可混为一谈。因为体外进行细胞培养,就要使用培养基、细胞因子等,需要
  • 【专利】 以细菌纳米磁小体为载体的复合肿瘤基因疫苗及其制备方法

    作者:张叔人 ; 唐翌姝 ; 王冬梅 ; 周春霞 ; 马文波 ; 刘容枝 年份:2010
    摘要:本发明涉及以细菌纳米磁小体为载体的复合肿瘤基因疫苗及其制备方法。本发明具体提供细菌纳米磁小体连接基因疫苗的最佳磷酸盐缓冲体系的pH值范围,体外转染和体内免疫所用的磁场强度和磁场作用时间,以及用该复合基因疫苗对肿瘤模型治疗时,确定了治疗剂量范围和免疫途径。本发明从而建立一种新型简便的基因传递方式,为基因治疗提供一种新的基因疫苗的制备条件和免疫方法。
  • 【期刊】 基因枪介导的neu基因DNA疫苗抗肿瘤作用的实验研究

    刊名:中华肿瘤杂志 作者:张叔人 ; 查园园 ; 林晨 ; 梁肖 ; 张雪艳 ; 付明 ; 张自强 ; 吴旻 关键词:DNA疫苗 ; 基因枪 ; neu基因 机构:中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 ; 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 ; 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 ; 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 ; 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 ; 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 ; 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 ; 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 ; 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 ; 100021北京 ; 100021北京 ; 100021北京 ; 100021北京 ; 100021北京 ; 100021北京 ; 100021北京 ; 100021北京 年份:2003
    摘要:目的 探讨DNA疫苗pWRG neu的皮内免疫 ,对高表达neu基因的小鼠移植瘤生长和转移的抑制作用。方法 向小鼠黑色素瘤B16F10细胞系转染pcDNA neu ,用有限稀释法筛选一株高表达neu基因的细胞株B16F10 neu。在基因枪介导下 ,向C5 7BL/ 6小鼠导入DNA疫苗pWRG neu ,通过观察免疫动物的生存期 ,评价DNA疫苗的抗肿瘤作用。分离免疫动物脾细胞 ,经自体淋巴细胞混合培养实验 ,分析DNA疫苗体内免疫后机体的CTL应答。结果 筛选到一株高表达neu基因的B16F10 neu细胞株 ,转基因过程和外源基因的表达没有改变细胞系的增殖特性。用基因枪轰击 ,进行DNA疫苗pWRG neu皮内免疫 ,对小鼠黑色素瘤B16F10 neu进行预防、治疗和抗转移的实验研究 ,结果表明 ,DNA疫苗的免疫能够明显推迟移植瘤的生长 ,延长小鼠生存期 ,获得明显的抗肿瘤效果。DNA疫苗免疫后可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性。结论 基因枪介导的DNA疫苗pWRG neu经皮内免疫 ,能够有效的诱导机体的细胞免疫应答 ,预防和治疗小鼠移植瘤的发生 ,并有一定的预防肿瘤肺转移的作用。
  • 【会议】 乳腺癌组织中分离的IgG对细胞免疫的影响

    作者:张叔人 ; 汪泱 ; 周春霞 ; 邱晓彦 ; 何祖根 ; 王冬梅 ; 马文波 ; 张友会 机构:中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所免疫室 ; 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所免疫室 年份:2004
    摘要:目的:揭示从人乳腺癌组织中分离的"IgG"对细胞免疫的影响。方法:用Sepharose CM fast flow离子交换层析从乳腺癌组织中分离IgG;应用还原和非还原性SDS-PAGE电泳,考马斯兰染色。应用淋巴细胞转化实验、混合淋巴细胞反应研究IgG对淋巴细胞增殖的影响;应用MTT法观察IgG对CTL、NK和巨噬细胞细胞毒活
  • 【期刊】 淋巴瘤细胞转染GM-CSF基因后生物学特性的变化

    刊名:郑州大学学报(医学版) 作者:张叔人 ; 黄明宜 ; 高全立 ; 马保根 ; 宋永平 关键词:GM-CSF基因 ; 淋巴瘤 ; 免疫治疗 机构:河南职工医学院临床部 ; 河南职工医学院临床部 ; 河南省血液病研究所 ; 河南省肿瘤医院血液科 ; 河南省血液病研究所 ; 河南省肿瘤医院血液科 ; 河南省血液病研究所 ; 河南省肿瘤医院血液科 ; 中国医学科学院肿瘤研究所免疫室 年份:2002
    摘要:目的 :制备高表达GM CSF的淋巴瘤细胞系 ,观察淋巴瘤细胞转染GM CSF基因后生物学特性的改变。方法 :将小鼠GM CSF真核表达质粒用电穿孔法导入小鼠淋巴瘤细胞系RMA ,有限稀释法制备单个细胞克隆 ,经RT PCR、骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验筛选相对高表达GM CSF的RMA克隆 ,并观察其生物学特性的改变。结果 :获得了高表达GM CSF的RMA细胞系 ,其同基因动物体内致瘤性降低。结论 :淋巴瘤细胞系RMA转染GM CSF基因后致瘤性降低。
  • 【期刊】 免疫突触与T细胞活化关系的研究

    刊名:现代免疫学 作者:张叔人 ; 覃汉军 关键词:免疫突触 ; T细胞 ; 活化 机构:中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所免疫室 ; 中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所免疫室 ; 中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所免疫室 年份:2005
    摘要:免疫突触是免疫识别中T细胞与APC间形成的超分子活化簇的结构,其形成过程涉及多种接头蛋白、共刺激分子的相互作用,与细胞骨架的活化以及黏附分子的作用有关。突触形成将提高TCR与MHC-肽的相互作用、促进T细胞信号转导相关分子的相互作用、有利于T细胞效应功能的发挥。目前关于免疫突触与T细胞活化关系的研究已成为免疫学研究的焦点问题之一,这问题的解决将进一步丰富免疫学理论,为肿瘤及自身免疫性疾病的免疫治疗提供治疗靶点。
  • 【期刊】 小鼠SLC基因真核表达载体的构建及其趋化活性鉴定

    刊名:细胞与分子免疫学杂志 作者:张叔人 ; 马飞 ; 宁力 ; 孙文欣 ; 梁肖 ; 张雪艳 ; 付明 ; 林晨 关键词:趋化因子 ; 次级淋巴样组织趋化因子 ; 基因枪 机构:中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所 ; 中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所 ; 中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所 ; 第四军医大学唐都医院普外科 ; 中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所 ; 中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所 ; 中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所 ; 中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所 ; 中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所 年份:2003
    摘要:目的:克隆小鼠次级淋巴样组织趋化因子(secondary lymph-oid-tissue chemokine,SLC)基因,并构建真核表达载体。在体 内外检测该表达载体表达产物的免疫趋化功能。方法:用RT-PCR从C57BL/6小鼠胸腺组织中克隆小鼠SLC基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-mSLC。在体外,用基因枪转染小鼠黑色素瘤B16F10细胞;RT-PCR检测转染细胞有SLC的表达;利用趋化小室法,检测表达产物针对淋巴细胞的趋化活性。在体内,用基因枪通过小鼠皮肤局部转染SLC基因,观察转染局部淋巴细胞的浸润。结果:克隆的基因经测序证实,为小鼠SLC基因Scya21b型。转染SLC基因的B16F10细胞体外培养48 h后,RT-PCR检测到SLC的表达,同时培养基上清具有针对淋巴细胞的趋化活性。通过基因枪局部转染小鼠皮肤,24 h后皮肤病理检查显示,局部皮内有明显的淋巴细胞浸润。结论:从小鼠胸腺组织中克隆到小鼠SLC基因,构建的真核表达载体pcDNA3.1-mSLC在体内外均可以表达,并具有针对淋巴细胞的趋化活性。
  • 【期刊】 结直肠癌患者外周血CD4+ CD25high调节性T细胞检测及其表型分析

    刊名:中国肿瘤临床与康复 作者:张叔人 ; 梁建明 ; 钟永 ; 解亦斌 ; 马洁 关键词:结直肠肿瘤 ; 调节性T淋巴细胞 机构:中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所中心实验室 ; 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所中心实验室 ; 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所免疫室 ; 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院腹部外科 年份:2010
    摘要:目的分析CD4+ CD25high T细胞(Treg)在50例结直肠癌患者外周血中的分布及其表型特征,初步探讨其临床意义。方法采用流式细胞术检测结直肠癌患者及健康人外周血中Treg的比例,探讨其表型特征并分析Treg比例与临床分期间的关系。结果与正常对照(3.1±1.46)%相比,结直肠癌患者外周血中Treg比例明显增加(11.22±5.47)%,二者差异有显著统计学意义(P〈0.01);手术后,患者外周血中Treg的比例相比术前显著下降(P〈0.01);患者外周血CD4+ CD25high T细胞水平在疾病的临床分期间差异无显著性(P〉0.05)。表型分析显示:Treg高表达CD45RO、HLA-Ⅰ、Foxp3分子,较高水平表达OX40、GITR、CD152、CD95、CD95L、B7-H1,较低水平表达CD62L,低表达CD80、CD86、B7-H4分子,基本不表达CD45RA、CD69分子,HLA-DR、CD154的表达水平在个体间差异较大,同时大部分细胞CD127表达阴性。结论结直肠癌患者外周血CD4+ CD25high T细胞水平明显升高,可能与患者肿瘤免疫功能低下密切相关。
  • 【期刊】 胰腺癌患者外周血CD4^+ CD25^(high)调节性T细胞分析

    刊名:蚌埠医学院学报 作者:张叔人 ; 梁建明 ; 钟永 ; 蔡建强 ; 马洁 关键词:胰腺肿瘤 ; 调节性T细胞 ; 流式细胞术 机构:中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所中心实验室 ; 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所中心实验室 ; 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所中心免疫室 ; 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院腹部外科 年份:2009
    摘要:目的:探讨胰腺癌患者外周血高表达CD25的CD4+调节性T(CD4^+CD25^highT)细胞比率变化特点及其临床意义。方法:用流式细胞术检测58例胰腺癌患者和14名健康人外周血CD4^+CD25^highT细胞水平,进行分层分析,初步探讨其表型特征。结果:胰腺癌患者外周血中CD4^+CD25^highT细胞占CD4^+T细胞的百分比率为(15.61±13.97)%,明显高于健康人群(2.53±1.26)%(P〈0.01);CD4+CD25highT细胞具有调节性T细胞的表面标记特征,即HLA-Ⅰ、CD45 RO阳性,CD45 RA、CD69阴性。人白细胞DR抗原的表达水平在不同个体间的CD4^+CD25^highT细胞差异较大。这群细胞细胞膜表面共刺激分子CD80、CD86表达水平很低,而共刺激分子CD152(CTLA-4)在不同个体间的CD4^+CD25^highT细胞差异较大。胰腺癌Ⅰ-Ⅱ期患者,其外周血CD4^+CD25^highT细胞占CD4^+T细胞的比率为(18.75±20.76)%;Ⅲ期为(13.71±9.53)%;Ⅳ期为(14.20±7.46)%;各期CD4^+CD25^highT细胞占CD4^+T细胞的比率均显著高于健康人群水平(P〈0.01)。结论:胰腺癌患者外周血CD4^+CD25^highT细胞水平明显升高,可能与肿瘤免疫功能低下及肿瘤发生、发展密切相关。
  • 【会议】 靶向肿瘤干细胞抗原EpCAM的过继性T细胞免疫治疗前列腺癌的研究

    作者:张叔人 ; 邓振领 ; 吴艳红 ; 马文波 ; 周春霞 ; 张玉倩 关键词:嵌合抗原受体 ; 肿瘤干细胞 ; EpCAM ; 前列腺癌 机构:北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所,免疫室 ; 北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所,免疫室 年份:2014
    摘要:研究背景:嵌合抗原受体(CAR)修饰的T细胞显示出的靶向性、杀伤活性和持久性为过继性细胞免疫治疗注入了新的解决方案。目前,许多关于CAR-T治疗肿瘤的l临床试验正在进行,并且取得了一些可喜的成果。肿瘤抗原的选择对于CAR-T细胞的治疗效果具有一定的影响。目的:由于肿瘤干细胞在肿瘤的快速生长和转移的过程中起着重要的作用,因此我们想探讨靶向肿瘤干细胞抗原EpCAM是否可以产生显著的抗肿瘤效应。方法:我们首先构建了靶向EpCAM的逆转录病毒载体pLNCX-EpCAM.CAR以及携带luciferase的逆转录病毒载体pLNCX-LUC2,并采用Takara的逆转录病毒包装试剂盒包装出相应的病毒。pLNCX-LUC2病毒感染Hela、PC3和PC3M细胞,筛选出稳定表达luciferase的肿瘤细胞克隆用于后续的体内外实验。luciferase生物发光法检测PBL对肿瘤细胞的体外杀伤作用。应用PC3M腹腔种植NOD-SCID的模型来检测PBL-CAR对肿瘤生长的体内抑制作用:应用PC3人工肺转移模型来检测PBL-CAR对肿瘤转移能力的抑制作用。结果:(1)我们成功构建了靶向肿瘤干细胞抗原EpCAM的嵌合抗原受体pLNCX-EpCAM.CAR,包装好病毒颗粒,并成功转导至人外周血淋巴细胞(PBL)中,转导效率约48%:(2)PC3细胞EpCAM阳性率约13%,且EpCAM+/PC3细胞生长速度明显比EpCAM-/PC3生长速度快;PC3M细胞EpCAM阳性率约98%,且PC3M是PC3细胞中具有高转移能力的细胞克隆,提示EpCAM可能与前列腺癌的转移相关;(3)我们在体外应用生物发光法检测PBL-EpCAM.CAR对前列腺癌细胞PC3和PC3M的杀伤作用:PBL-EpCAM.CAR对EpCAM阴性的Hela细胞无特异性杀伤,对EpCAM阳性的PC3M细胞及EpCAM部分阳性的PC3产生特异性杀伤,并呈剂量依赖性。当PC3M细胞与PBL-EpCAM.CAR共培养时,PC3M显著刺激PBL-EpCAM.CAR增殖:(4)在PC3M腹腔种植NOD-SCID的模型中,PBL-EpCAM.CAR能够显著抑制PC3M腹腔肿瘤的生长:(5)在PC3人工肺转移模型中,PBL-EpCAM.CAR能显著抑制肺转移,延长NOD-SCID的生存期。结论:我们的数据显示PBL-EpCAM.CAR能显著抑制前列腺癌的生长与转移,提示靶向EpCAM或其他肿瘤干细胞抗原的过继性T细胞治疗在肿瘤的治疗中具有很大的潜能。
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