·
搜索结果:找到“张义全”相关结果360条
排序: 按相关 按相关 按时间降序
  • 【期刊】 拟核结合蛋白H-NS调控副溶血弧菌vp1667的转录

    刊名:军事医学 作者:张义全 ; 詹明华 ; 张伟 ; 周冬生 ; 黄新祥 ; 杨慧盈 ; 殷喆 关键词:副溶血弧菌 ; 转录调控 机构:河北北方学院附属第一医院检验科 ; 河北北方学院附属第一医院检验科 ; 河北张家口 ; 军事医学科学院微生物流行病研究所 ; 病原微生物生物安全国家重点实验室 ; 江苏大学医学院 年份:2017
    摘要:目的 研究副溶血弧菌H-NS对vp1667的转录调控机制.方法 提取副溶血弧菌hns突变株(Δhns)和野生株(WT)的总RNA,采用实时定量RT-PCR的方法验证H-NS对vp1667的转录调控关系;采用引物延伸实验研究vp1667的转录起始位点,并根据产物的丰度判断H-NS对vp1667的调控关系;将vp1667的启动子区克隆入pHRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建LacZ重组质粒,并将该重组质粒转入Δhns和WT中获得LacZ菌株.通过LacZ报告基因融合实验研究H-NS对vp1667的调控关系.PCR扩增vp1667的启动子区序列并纯化His-H-NS蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)研究His-H-NS对vp1667启动子区是否具有直接的结合作用;采用DNaseⅠ足迹实验研究His-H-NS对vp1667启动子区的具体结合位点.结果与结论 引物延伸结果显示,vp1667只有一个转录起始位点T(-28)(翻译起始位点为+1),且其转录活性受H-NS的抑制;EMSA和DNaseⅠ足迹实验结果显示,His-H-NS不能结合到vp1667的启动子区,表明H-NS只能间接抑制vp1667的转录.
  • 【期刊】 倍他乐克对心肌梗塞患者院外治疗临床治疗分析

    刊名:医药 作者:张义全 关键词:心肌梗塞 ; 倍他乐克 ; 院外治疗 ; 复发率 机构:重庆市高新区人民医院,重庆 ; 重庆市高新区人民医院,重庆 年份:2016
    摘要:目的:探析倍他乐克在心肌更塞患者院外治疗中的应用效果。方法:选取我院2014年1月至2015年6月期间经治疗后病情稳定出院的80例心肌梗塞患者,根据治疗方法不同分为2组,即参照组(n=40,给予常规治疗)、观察组(n=40,给予倍他乐克治疗),对2组患者治疗3个月、6个月的复发情况进行观察评比。结果:治疗3个月后,观察组患者的复发率为7.5%,相较于参照组患者的25.0%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。治疗6个月后,观察组患者的复发率为15.0%,相较于参照组患者的50.0%,组间差异具有显著性(P<0.05)。结论:在心肌梗塞患者院外治疗中给予倍他乐克,可以显著降低患者的复发率,值得临床进一步应用与普及。
  • 【期刊】 H-NS蛋白对副溶血弧菌hcp1的转录调控

    刊名:微生物学报 作者:张义全 ; 王洁 ; 董新波 ; 高丽晓 ; 周冬生 ; 殷喆 关键词:副溶血弧菌 ; H-NS ; hcp1 ; 转录调控 机构:军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 ; 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 ; 中国人民解放军总装备部科技信息研究中心门诊部 ; 江苏大学医学院 年份:2016
    摘要:【目的】研究调控子H-NS对副溶血弧菌T6SS1结构蛋白基因hcp1的转录调控机制。【方法】利用Western blot检测Hcp1蛋白在野生株(WT)和hns基因敲除株(Δhns)中表达水平的差异。提取WT和Δhns的总RNA,采用实时定量RT-PCR的方法验证H-NS对hcp1的转录调控关系。进而采用引物延伸实验研究hcp1的转录起始位点,并根据产物的丰度判断H-NS对hcp1的调控关系。PCR扩增hcp1的整个启动子区DNA序列,并纯化His-H-NS蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)验证His-H-NS对hcp1启动子区是否具有直接的结合作用。【结果】Western blot和实时定量RT-PCR结果显示H-NS能抑制hcp1的表达;引物延伸结果显示hcp1只有一个转录起始位点T(–62)(翻译起始位点为+1),且其转录活性是H-NS和σ54依赖性的;EMSA实验表明H-NS对hcp1的启动子区具有直接的结合作用。【结论】H-NS能直接结合到hcp1启动子区而抑制其转录表达。
  • 【期刊】 副溶血弧菌calR的基因敲除株与回补株构建

    刊名:军事医学 作者:张义全 ; 侯书宁 ; 孟彦言 ; 朱文君 ; 张凌宇 ; 周冬生 ; 黄新祥 关键词:副溶血弧菌 ; calR ; 突变株 ; 回补株 机构:江苏大学医学院 ; 江苏大学医学院 ; 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 年份:2016
    摘要:目的构建副溶血弧菌calR的基因突变株和回补株,为研究CalR的功能奠定基础。方法 PCR扩增calR基因的同源臂融合片段,并直接克隆入自杀质粒p DS132中。通过接合转移的方式将重组自杀质粒转入副溶血弧菌RIMD2210633株(WT)中,利用同源重组的方法替换原始calR基因以构建calR无痕突变株(ΔcalR)。PCR扩增calR的基因序列,并将其直接克隆入p BAD33质粒中,构建回补质粒。将回补质粒转入到ΔcalR中,即得回补株(ΔcalR/calR∷p BAD33)。将vop N的启动子区克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒分别转入WT/p BAD33、ΔcalR/p BAD33和ΔcalR/calR∷p BAD33中,通过测定并比较3株菌中β-半乳糖苷酶活性的差异来判定CalR对vop N的调控关系。结果与结论 Lac Z结果表明,CalR负调控vop N的转录,且回补株的回补效果良好,表明成功构建了副溶血弧菌calR基因的突变株和回补株,为后续对CalR的功能研究打下了基础。
  • 【期刊】 AphA蛋白对副溶血弧菌vopT的转录调控研究

    刊名:微生物学通报 作者:张义全 ; 张伟 ; 侯书宁 ; 何婷 ; 徐淼 ; 黄新祥 ; 杨瑞馥 ; 周冬生 关键词:副溶血弧菌 ; 转录调控 ; AphA ; vopT 机构:河北北方学院附属第一医院微生物科 ; 河北北方学院附属第一医院微生物科 ; 江苏大学医学院 ; 北京微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 年份:2015
    摘要:【目的】研究副溶血弧菌AphA对vop T的转录调控机制。【方法】提取野生株(WT)和aphA突变株(ΔaphA)的总RNA,采用引物延伸实验研究vop T的转录起始位点,并根据产物的丰度差异判断AphA对其调控关系。分别将WT和ΔaphA的总RNA逆转录成c DNA,利用实时定量RT-PCR进一步研究AphA对靶基因的调控关系。将vop T的启动子区克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒转入WT和ΔaphA中,通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性的差异来判定AphA对vop T的调控关系。PCR扩增靶基因整个启动子区DNA序列,并纯化His-AphA蛋白,利用凝胶阻滞实验(EMSA)验证His-AphA对靶基因启动子区是否具有直接的结合作用。【结果】vop T只有一个转录起始位点A(-86),且其转录活性受AphA的间接抑制。RT-PCR和EMSA结果显示AphA对vtrA的转录也具有间接的抑制作用。【结论】AphA间接抑制vop T转录,且该间接抑制作用与VtrA无关。
  • 【期刊】 H-NS对副溶血弧菌泳动能力的调控研究

    刊名:军事医学 作者:张义全 ; 王洁 ; 林磊 ; 孙凤军 ; 董新波 ; 侯书宁 ; 周冬生 ; 殷喆 关键词:副溶血弧菌 ; H-NS ; 泳动 ; flaA 机构:军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 ; 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 ; 第三军医大学附属西南医院药剂科 ; 江苏大学医学院 年份:2015
    摘要:目的研究H-NS对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)泳动能力的调控作用。方法将VP接种于泳动实验平板上,37℃静置培养4.5 h后,通过比较不同菌株间菌苔直径的差异来判定H-NS对泳动表型的影响。提取WT和hns基因突变株(Δhns)的总RNA,采用实时定量RT-PCR方法研究H-NS对极鞭毛蛋白基因fla A的转录调控关系。将fla A启动子区DNA克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒转入WT和Δhns中,通过比较二者中β-半乳糖苷酶活性的差异研究H-NS对fla A的调控关系。结果与结论动力表型结果显示,H-NS可促进VP的泳动能力;实时定量RT-PCR和Lac Z报告基因融合实验结果表明H-NS正调控fla A的转录。这表明H-NS至少可通过激活fla A的转录而促进VP的泳动能力。
  • 【期刊】 QseBC双组分调控系统对伤寒沙门菌动力的调节作用

    刊名:军事医学 作者:张义全 ; 吉滢 ; 倪斌 ; 杨瑞馥 ; 黄新祥 关键词:伤寒沙门菌 ; QseBC双组分系统 ; flhD ; 动力 机构:江苏大学医学院 ; 江苏大学医学院 ; 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 年份:2015
    摘要:目的研究伤寒沙门菌Qse BC双组分调控系统对伤寒菌动力的调节作用。方法比较伤寒沙门菌野生株(WT)、qse B缺陷株(Δqse B)和qse C缺陷株(Δqse C)动力差异,选取主要鞭毛基因flh D进行实时定量RT-PCR检测,同时检测qse B的表达水平;构建qse B高表达株,比较其与空载体对照株动力和flh D表达差异。结果与WT相比,Δqse B动力无变化,Δqse C动力减弱;在Δqse C中,flh D表达量下调至约1/4而qse B表达上调;qse B高表达株动力较WT减弱,flh D表达下调。结论 qse BC双组分调控系统能调节伤寒菌动力和主要鞭毛基因flh D的表达;qse B高表达时可抑制细菌动力。
  • 【期刊】 副溶血弧菌基因回补实验方法的建立与应用

    刊名:南方医科大学学报 作者:张义全 ; 陈振鸿 ; 王丽 ; 冯娇 ; 杨瑞馥 ; 常德 ; 安莉 ; 刘长庭 ; 周冬生 关键词:副溶血弧菌 ; 基因回补 ; pBAD33 ; aphA ; opaR 机构:解放军总医院南楼呼吸科 ; 解放军总医院南楼呼吸科 ; 重庆医科大学检验医学院 ; 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 年份:2014
    摘要:目的建立以pBAD33质粒为载体的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)基因回补实验平台。方法 PCR扩增aphA和opaR的整个ORF区序列,并将其直接克隆入pBAD33质粒中,构建重组质粒。分别将重组质粒转入到ΔopaR和ΔaphA中(分别代表opaR和aphA的突变株),以构建出相应的回补株C-ΔaphA和C-ΔopaR。分别在aphA和opaR基因内设计特异性引物,采用RT-PCR方法,验证在相应的回补突变株中aphA和opaR是否转录。利用引物延伸实验研究野生株(WT)、ΔopaR、ΔaphA、C-ΔaphA和C-ΔopaR中mfpA(aphA负调控,opaR正调控其表达)的相对RNA水平。结果 aphA和opaR在相应的回补株中发生转录;且mRNA水平与野生株一致。结论成功建立了以pBAD33质粒为载体的VP基因回补方法,并得到应用。
  • 【期刊】 AphA蛋白促进副溶血弧菌c-di-GMP合成和生物膜形成

    刊名:微生物学报 作者:张义全 ; 黄倩 ; 胡小许 ; 王丽 ; 杨瑞馥 ; 钟青萍 ; 周冬生 ; 黎晓敏 关键词:副溶血弧菌 ; 生物膜形成 ; c-di-GMP ; AphA ; scrABC ; scrG 机构:西南大学动物科技学院 ; 西南大学动物科技学院 ; 军事医学科学院微生物流行病研究所 ; 病原微生物生物安全国家重点实验室 ; 华南农业大学食品学院 年份:2014
    摘要:【目的】综合运用表型和分子生化实验研究AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜形成的调节机制。【方法】利用菌落褶皱和结晶紫染色实验比较aphA突变株(ΔaphA)和野生株(WT)的表型差异;进而利用色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法分别检测ΔaphA和WT中c-di-GMP分子含量;提取ΔaphA和WT的总RNA,采用实时定量RT-PCR的方法研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;分别构建克隆有scrABC和scrG上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入ΔaphA和WT中,通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来进一步研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;PCR扩增scrABC和scrG的整个启动子区DNA序列,并纯化His-AphA蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)验证AphA对靶基因启动子区是否具有直接的相互作用。【结果】表型结果显示AphA能促进c-di-GMP的合成和生物膜形成;实时定量RT-PCR和LacZ结果表明AphA能抑制scrABC和scrG的转录表达;EMSA结果证明AphA不能结合到scrABC和scrG的启动子区DNA上。【结论】AphA间接抑制scrABC和scrG的表达是其促进副溶血弧菌c-di-GMP合成及生物膜形成的机制之一。
  • 【期刊】 肺炎克雷伯菌CRP对kfuABC操纵子的转录调控机制研究

    刊名:重庆医科大学学报 作者:张义全 ; 杨世亚 ; 王丽 ; 杨瑞馥 ; 周冬生 ; 李迎丽 ; 邱景富 关键词:肺炎克雷伯菌 ; 环磷酸腺苷受体蛋白 ; kfuABC ; 转录调控 机构:重庆医科大学公共卫生与管理学院营养与食品卫生教研室 ; 重庆医科大学公共卫生与管理学院营养与食品卫生教研室 ; 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 年份:2014
    摘要:目的:利用分子生物学实验研究肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白(cAMP receptor protein,CRP)对kfuABC操纵子的转录调控机制。方法:设计相关跨基因引物,用Real-time PCR方法验证kfuABC的转录结构。以肺炎克雷伯菌野生株NTUHK2044(wild type,WT)的总RNA为模板,利用引物延伸的方法寻找kfuA的转录起始位点,确定其核心启动子区。构建含kfuA启动子区DNA序列的LacZ重组质粒,并将其转入突变株△crp(肺炎克雷伯菌野生株基因组中crp基因敲除)和WT中,通过测定比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来判定CRP调控子对kfuA的调控关系;分别提取△crp和WT的总RNA,进一步采用实时定量Real-time PCR的方法验证CRP对kfuA的调控关系。通过凝胶阻滞实验验证His-CRP是否对kfuA启动子区具有直接的结合作用,进一步采用DNaseⅠ足迹实验确定具体的结合位点。结果:肺炎克雷伯菌kfuA、kfuB和kfuC位于同一个操纵子kfuABC;引物延伸实验结果显示kfuABC只有一个转录起始位点T;CRP能够结合到kfuABC启动子区-204到-171之间的碱基序列上(转录起始位点为+1),抑制其转录表达。结论:CRP能直接结合到kfuABC启动子区抑制其转录表达。
  • 【期刊】 副溶血弧菌生物膜相关基因突变株的构建

    刊名:中华预防医学杂志 作者:张义全 ; 李迎丽 ; 闫小娟 ; 刘梦颖 ; 杨瑞馥 ; 邱景富 ; 周冬生 关键词:弧菌属 ; 质粒 ; 生物膜 ; 基因敲除技术 ; 突变 机构:重庆医科大学公共卫生与管理学院 ; 重庆医科大学公共卫生与管理学院 ; 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 年份:2013
    摘要:目的 构建副溶血弧菌生物膜相关基因突变株并进行验证.方法 采用PCR方法扩增得到靶基因的上下游同源臂片段,然后以上下游同源臂片段为模板,PCR扩增得到同源臂融合片段.将同源臂融合片段经酶切处理后克隆到自杀质粒pDS132中.通过结合转移的方式将携带有同源臂融合片段的重组质粒转入副溶血弧菌RIMD 2210633中,利用同源重组得到突变株.用PCR方法筛选和鉴定突变株,同时对突变株进行表型分析,从而在分子水平和表型试验上验证突变株是否构建成功.结果 构建得到了分别携带副溶血弧菌生物膜相关基因vbfR、crp、hns、swrZ、swrT、cpsR融合同源臂片段的重组质粒,通过PCR扩增,分别得到了大小为1190、1128、1136、953、1242、1112 bp的片段;用重组质粒构建了相应的突变株(ΔvbfR、Δcrp、△hns、ΔswrZ、ΔswrT和ΔcpsR),进行PCR鉴定时,突变株得到了大小分别为1190、1128、1136、953、1242、1112 bp的扩增产物,比阳性对照分别小610、739、421、542、427、1367 bp;用靶基因内部的引物进行扩增时,无扩增产物;选其中一株突变株Δhns进行生物膜形成能力表型分析,结果表明突变株Δhns生物膜形成量与野生株相比明显增加.结论 构建得到了6株副溶血弧菌生物膜相关基因突变株,并从分子和表型试验上验证了突变株构建正确.
  • 【期刊】 鼠疫菌OxyR调控子蛋白对dps的转录调控机制

    刊名:微生物学报 作者:张义全 ; 倪斌 ; 黄新祥 ; 杨瑞馥 ; 周冬生 关键词:鼠疫菌 ; OxyR ; dps ; 转录调控 机构:江苏大学基础医学与医学技术学院 ; 江苏大学基础医学与医学技术学院 ; 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 年份:2013
    摘要:【目的】利用分子生物学实验研究鼠疫菌调控子OxyR对dps的转录调控机制。【方法】提取鼠疫菌野生株(WT)和oxyR突变株(ΔoxyR)的总RNA,采用引物延伸实验研究dps的转录起始位点,并根据产物的丰度判断OxyR对dps的调控关系。进一步采用实时定量RT-PCR的方法验证OxyR对dps的调控关系。PCR扩增dps的整个启动子区DNA序列,并纯化His-OxyR蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)验证OxyR对dps启动子区是否具有直接的相互作用。利用大肠杆菌OxyR识别基序,预测鼠疫菌OxyR对dps启动子区的结合位点,从而得出鼠疫菌OxyR对dps的转录调控机制。【结果】鼠疫菌dps有一个转录起始位点G(-40)(翻译起始位点为+1),其转录表达受OxyR的激活;体外实验及生物信息学预测结果表明OxyR能结合到dps启动子区-111到-78之间的碱基上。【结论】OxyR能直接结合到dps启动子区而激活其转录表达。
上一页 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 下一页 跳转