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  • 【期刊】 乳腺癌耐药细胞中c-fos抗凋亡作用的研究

    刊名:中国癌症杂志 作者:师锐赞 ; 彭洪薇 ; 袁向飞 ; 熊冬生 ; 魏筱华 关键词:乳腺癌耐药 ; c-fos ; 细胞凋亡 机构:南昌大学第一附属医院药学部 ; 南昌大学第一附属医院药学部 ; 山西医科大学药理学系 ; 中国医学科学院 ; 北京协和医学院实验血液学国家重点实验室 年份:2014
    摘要:背景与目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,且患者死亡率居高不下,其中乳腺癌耐药是导致临床化疗失败的主要原因。该课题组采用已建立的乳腺癌耐药细胞模型MCF-7/ADR及其敏感株MCF-7,旨在探讨c-fos在乳腺癌耐药细胞中的详细作用机制。方法:MTT检测上述细胞对多柔比星的敏感性,并通过实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)检测上述细胞中mdr-1及c-fos的mRNA表达情况;3μmol多柔比星分别处理MCF-7细胞12、24、36 h后采用RT-PCR检测细胞中c-fos mRNA的表达,以监测化疗药物处理过程中乳腺癌细胞c-fos的表达变化过程;构建相应载体得到了c-fos稳定干扰细胞株及其对照细胞株:MCF-7/ADR/si-fos-8B、MCF-7/ADR/si-fos-3D和MCF-7/ADR/siNC,采用MTT检测干扰c-fos后对5-FU及顺铂的敏感性变化;流式细胞术检测上述药物及γ射线照射处理后细胞凋亡的情况;罗丹明123检测乳腺癌耐药细胞的外排能力;RT-PCR及蛋白质印迹法(Western blot)分别检测c-fos干扰后,凋亡相关基因bax、bcl-2、puma、p53及mdr-1等的表达。结果:与敏感细胞MCF-7相比,MCF-7/ADR细胞中c-fos及mdr-1的表达显著升高,且对多柔比星的耐药倍数为敏感株的近40倍;在3μmol多柔比星处理MCF-7之后c-fos的表达逐渐升高,结果显示,c-fos在乳腺癌的耐药表型形成早期即开始发挥作用;干扰c-fos后,细胞对药物(5-FU、顺铂)的敏感性增高,且经药物处理及γ射线照射后稳定干扰细胞株的凋亡率显著升高,说明干扰c-fos后乳腺癌耐药细胞在受到外界刺激后,更易于发生凋亡;RT-PCR及Western blot检测结果显示,干扰c-fos后,bax、puma、p53的表达明显升高,而bcl-2及mdr-1的表达显著降低。结论:在乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR中发现,c-fos呈异常高表达,其可能通过调节乳腺癌细胞凋亡信号通路蛋白的变化抑制乳腺癌细胞的凋亡,促进了乳腺癌耐药表型的形成。由此,c-fos可作为克服乳腺癌耐药治疗的一个潜在靶点用于今后的药物开发。
  • 【期刊】 橙皮素对异丙基肾上腺素诱导大鼠心衰的保护作用

    刊名:中西医结合心脑血管病杂志 作者:师锐赞 ; 曹静 ; 吕吉元 ; 张明升 ; 冯巧爱 关键词:心衰 ; 橙皮素 ; 异丙基肾上腺素 ; 氧化应激 ; 大鼠 机构:山西医科大学第一医院 ; 山西医科大学第一医院 ; 山西医科大学 ; 山西博爱医院 年份:2017
    摘要:目的 观察橙皮素对大剂量异丙基肾上腺素(ISO)诱导大鼠心衰的保护作用,并探讨其机制.方法 将SD大鼠随机分为正常(C)组、橙皮素对照(H)组、异丙基肾上腺素(Ⅰ)组和橙皮素治疗+Ⅰ(T)组,l组和T组接受皮下注射大剂量ISO(150 mg/kg),2周后行超声心动图检测.确定造模成功后,H组及T组给予橙皮素(100 mg/kg)灌胃,Ⅰ组给予等量的溶剂乙醇,连续给药10d后测定各组大鼠心脏功能包括左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(EF)、左室缩短分数(FS)变化及血清丙二醛(M DA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(TAOC)的变化,观察各组大鼠心肌的病理变化.结果 与C组比较,I组LVEDD变化不大,LVESD值增大、EF、FS降低,氧化应激指标中MDA值升高,SOD、TAOC降低,备指标差异有统计学意义(P<0.05);与I组比较,T组大鼠LVEDD无明显变化,LVESD降低,EF、FS升高,血清MDA值降低,SOD、TAOC升高,各指标差异有统计学意义(P<0.05).H组各指标较C组无明显变化.结论 橙皮素可能通过减轻氧化应激,降低MDA,升高SOD、TAOC,从而改善心衰大鼠的心脏功能.
  • 【期刊】 阿尔茨海默病相关的神经丝蛋白的早期诊断价值

    刊名:武警医学 作者:师锐赞 ; 尹黎英 ; 袁慧欣 ; 张冀平 ; 李慧媛 ; 胡为民 ; 李国平 关键词:阿尔茨海默病 ; 神经丝蛋白 ; 智能精神状态检查量表 ; 临床痴呆评定量表 ; 日常生活能力量表 机构:武警山西总队医院神经内科 ; 武警山西总队医院神经内科 ; 山西医科大学 年份:2012
    摘要:目的探讨一种简便、可靠、无损伤、特异性较强的早期诊断阿尔茨海默病(alzheimer disease,AD)的方法。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定尿液中神经丝蛋白(alzheimer associated neuronal thread protein,AD7c-NTP)的含量,并比较38例AD患者与35例年龄相匹配的健康对照组尿中的AD7c-NTP的含量;同时分析尿中AD7c-NTP含量与智能精神状态检查量表(MMSE)、临床痴呆评定量表(CDR)和日常生活能力量表(ADL)评分的相关性。结果 AD组与对照组尿液中AD7c-NTP含量分别为(90.78±16.54)ng/ml(、70.63±12.56)ng/ml,AD组明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AD组尿液AD7c-NTP含量与MMSE、CDR、ADL分数变化有一定相关性,相关系数分别为0.756、-0.658、-0.760。结论测定尿液中AD7c-NTP含量在AD早期诊断和病情评估中有重要的临床参考价值。
  • 【期刊】 shRNA抑制c-fos表达对P-gp介导的乳腺癌多药耐药的影响

    刊名:中国生物工程杂志 作者:师锐赞 ; 胡晓玲 ; 范彦英 关键词:c-fos ; 多药耐药 ; P-糖蛋白 ; 分子靶向治疗 机构:山西医科大学 ; 山西医科大学 年份:2012
    摘要:多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致化疗失败的重要原因,多药耐药基因(multidrug resistance gene,mdr1)产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)过表达是最主要的耐药机制。原癌基因c-fos在肿瘤MDR中的作用渐受重视。主要选用人乳腺癌敏感株MCF-7和阿霉素(adriamycin,ADR)筛选的、mdr1/P-gp高表达的耐药株MCF-7/ADR,探讨c-fos在P-gp介导的乳腺癌MDR中的作用。相对于MCF-7,c-fos在MCF-7/ADR高表达。采用shRNA法下调c-fos表达后,MCF-7/ADR对ADR的敏感性大大增强,且mdr1/P-gp表达减少、P-gp外排功能降低。c-fos表达下调可逆转对P-gp介导的乳腺癌MDR的实验结果,为c-fos成为逆转肿瘤耐药诊断和治疗的新靶标,对实现耐药乳腺癌的分子靶向治疗提供了理论基础。
  • 【期刊】 靶向人原癌基因c-fos的shRNA表达质粒的构建及鉴定

    刊名:中国生物制品学杂志 作者:师锐赞 ; 景志杰 ; 刘田福 关键词:原癌基因蛋白质c-fos ; RNA干扰 ; 乳腺肿瘤 机构:山西医科大学实验动物中心 ; 山西医科大学实验动物中心 ; 山西医科大学药理教研室 年份:2011
    摘要:目的构建靶向人原癌基因c-fos的短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)重组真核表达质粒,并进行鉴定。方法构建靶向人c-fos基因的shRNA重组表达质粒Psilencer 3.1-sic-fos,转染乳腺癌MCF-7细胞,采用RT-PCR法检测稳定转染细胞中c-fos基因mRNA的表达。结果重组表达质粒Psilencer 3.1-sic-fos经PCR、双酶切及测序证明构建正确;重组表达质粒在mRNA水平明显抑制了MCF-7细胞c-fos基因的表达(P<0.05)。结论已成功构建了人c-fos基因shRNA重组表达质粒,为深入研究c-fos基因在肿瘤发生、发展过程中的作用提供了技术手段。
  • 【会议】 CK18在乳腺癌多药耐药和侵袭转移中的作用及机制探讨

    作者:师锐赞 ; 胡晓玲 ; 张慧丰 机构:山西医科大学药理教研室 ; 山西医科大学药理教研室 年份:2014
    摘要:目的探讨角蛋白18(cytokeratin,CK18)在乳腺癌多药耐药(Multidrug resistant,MDR)和侵袭转移中的作用,并探讨其相关机制。方法选用人乳腺癌敏感株MCF-7/WT和米托蒽醌(mitoxantrone,MX)筛选的、乳腺癌癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein,BCRP)高表达的MDR株MCF-7/MX,RT-PCR和Western blot法测定CK18在二者表达的差异;shRNA干扰CK18表达,采用细胞增殖毒性实验、划痕实验、transwell侵袭实验观察对乳腺癌MDR及侵袭转移的影响,并进一步采用WesternBlot检测对BCRP、转录因子snail、PI3K/AKT通路的表达改变。结果 CK18在MCF-7/WT和MCF-7/MX中呈差异表达;抑制CK18表达降低对化疗药物的敏感性,增加BCRP表达,促进侵袭迁移;CK18表达下调增加snail及PI3K/AKT表达。结论抑制CK18可增加乳腺癌MDR和侵袭转移能力,转录因子snail和PI3K/AKT通路参与CK18的作用。
  • 【期刊】 高果糖诱导大鼠胰岛素敏感性及血压改变

    刊名:山西医科大学学报 作者:师锐赞 ; 李洁 ; 薛文鑫 ; 牛龙刚 ; 张明升 ; 梁月琴 关键词:模型 ; 动物 ; 果糖 ; 胰岛素抵抗 ; 大鼠 机构:山西医科大学药理学教研室 ; 山西医科大学药理学教研室 ; 山西医科大学药理学教研室 ; 山西医科大学机能实验室 ; 山西医科大学药理学教研室 ; 山西医科大学药理学教研室 ; 山西医科大学机能实验室 年份:2007
    摘要:目的评估高果糖饲料对机体胰岛素敏感性及血压的影响。方法雄性SD大鼠24只,随机分为对照组和高果糖组升高。对照组大鼠普通饲料喂养;模型组大鼠以高果糖饲料喂养4周。测定对照组和高果糖组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹血胰岛素(FSI)计算胰岛素敏感性指数,尾套法测定收缩期血压(SBP),生化酶法测定甘油三酯(TG)。结果高果糖组大鼠2周后血压升高,4周后,除血压升高外血胰岛素、甘油三酯较对照组明显升高,胰岛素敏感指数降低,而体重、每天平均饲料摄入量两组间无显著差异。结论高果糖饲料喂养的SD大鼠,具有典型的胰岛素抵抗伴高血压的特点,是研究胰岛素抵抗和高血压理想的动物模型。
  • 【期刊】 原癌基因c-fos在人乳腺癌耐药株MCF-7/ADR中的表达及意义

    刊名:山西医科大学学报 作者:师锐赞 ; 范彦英 ; 胡晓玲 关键词:c-fos ; 多药耐药 ; 分子靶点 机构:山西医科大学药理教研室 ; 山西医科大学药理教研室 年份:2012
    摘要:目的探讨原癌基因c-fos在人乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药形成中的作用。方法采用MTT法测定化疗药物阿霉素(adriamycin,ADR)、紫杉醇、依托泊甙对人乳腺癌敏感株MCF-7和耐药株MCF-7/ADR的IC_(50);用real time PCR法检测MCF-7/ADR和MCF-7的c-fos mRNA表达差异;用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot法检测ADR对MCF-7中c-fos mRNA和蛋白表达的诱导作用。结果相对于MCF,MCF-7/ADR对ADR、紫杉醇、依托泊甙的耐药倍数分别为39.94,102.34和12.16;MCF-7/ADR中c-fos mRNA表达明显高于MCF-7;ADR可诱导MCF-7中c-fos mRNA和蛋白呈时间依赖性表达。结论 c-fos在MCF-7/ADR多药耐药中起重要作用,有可能成为耐药肿瘤诊断和治疗的新分子靶点。
  • 【期刊】 二甲基氨氯吡咪对正常大鼠离体心功能的影响

    刊名:山西医药杂志 作者:师锐赞 ; 武冬梅 关键词:大鼠 ; 心脏功能试验 ; 二甲基氨氯吡咪 ; 心功能 ; 正性肌力 机构:山西医科大学 ; 山西医科大学 ; 山西医科大学 年份:2006
    摘要:目的研究二甲基氨氯吡咪(dimethylamiloride,DMA)对正常大鼠离体心功能的影响及特点。方法采用Langendorff心脏灌流方法观察DMA对正常大鼠离体心脏功能的影响。结果①在Langendorff灌流的大鼠心脏,DMA(2.5~20μmol/L)能增强正常大鼠离体心脏功能。2.5μmol/L DMA对心功能各项指标左室收缩压(LVSP)-左室舒张压(LVDP)、左室压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室压最大下降速度(-dp/dtmax)的增强幅度分别为8.17%、5.22%、10.15%;5μmol/L DMA的增强幅度分别为7.59%、8.84%、10.93%,;10μmol/LDMA的增强幅度分别为9.27%、10.53%、11.48%;20μmol/L DMA的增强幅度分别为8.37%、11.19%、13.31%。②在离体心脏,DMA在用药2 min后明显起效,6 min时作用达高峰,之后作用逐渐减弱,10 min作用消失。结论DMA(2.5~20μmol/L)能增强正常大鼠离体心功能,产生正性肌力作用。
  • 【期刊】 离体乳头肌灌流方法对药物影响心脏收缩功能的评价

    刊名:山西医科大学学报 作者:师锐赞 ; 武冬梅 关键词:乳头肌 ; 灌流 ; Langendorff灌流法 ; 心脏收缩 ; 体外研究 机构:山西医科大学药理学教研室 ; 山西医科大学药理学教研室 ; 山西医科大学药理学教研室 年份:2005
    摘要:目的 研究离体乳头肌灌流方法评价药物影响心脏收缩功能的可靠性和准确性。方法 利用离体乳头肌灌流和Lan gendorff灌流法检测异丙肾上腺素 (isoprenaline,Iso)对心脏收缩功能的影响 ,并评价两种实验方法对药物反应的相关性。 结果与结论 乳头肌收缩功能与心脏收缩功能具有明显的相关关系 ,乳头肌灌流实验方法能够反映药物对心脏收缩功能的影响。
  • 【期刊】 消减免疫法制备抗HL60、HL60/ADR表面抗原差异抗体

    刊名:中国免疫学杂志 作者:师锐赞 ; 任思楣 ; 俞云 ; 佘鸣 ; 邵晓枫 ; 彭洪薇 ; 林阳 ; 张秀丽 ; 张砚君 ; 熊冬生 关键词:消减免疫 ; 肿瘤耐药 ; 单克隆抗体 ; 差异识别 机构:中国医学科学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室 ; 中国医学科学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室 ; 南京中医药大学药学院 年份:2010
    摘要:目的:建立可特异识别HL60和HL60/ADR细胞膜表面差异蛋白的抗体库,制备单克隆抗体并研究其生物学活性。方法:通过Cp诱导的消减免疫法免疫BALB/c小鼠,采用传统杂交瘤技术制备可特异识别两种细胞差异膜蛋白的单克隆抗体;采用FACS和激光共聚焦显微镜鉴定其和两种靶细胞结合的特异性和差异性。结果:获得51株候选的差异抗体,成功筛选并纯化其中一株单抗(5F6)。5F6与可特异稳定的识别HL60/ADR细胞,结合率扣除本底为68.2%,而该抗体与HL60细胞的结合率为17%。结论:SI结合差异筛选的方法是制备差异抗体便捷可行的方法,所获得的单克隆抗体与HL60和HL60/ADR细胞膜蛋白结合有特异性和差异性,实验中所获得的单抗是寻找肿瘤耐药的新靶点和发现肿瘤耐药新机制的工具,为研究这些问题开拓了新思路。
  • 【期刊】 靛玉红衍生物PHⅡ-7对人乳腺癌细胞株MCF-7的杀伤效应及其机制

    刊名:中国中西医结合杂志 作者:师锐赞 ; 胡晓玲 ; 彭洪薇 ; 范俊强 ; 吕志杰 ; 郭芬芬 ; 熊冬生 关键词:PHⅡ-7 ; 杀伤效应 ; 细胞周期阻滞 ; 活性氧 ; c-fos 机构:山西医科大学药理学教研室 ; 山西医科大学药理学教研室 ; 中国医学科学院血液学研究所药物室 年份:2012
    摘要:目的观察靛玉红衍生物PHⅡ-7对人乳腺癌癌细胞株MCF-7的杀伤作用并探讨其初步机制。方法四唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖活性;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;PI染色结合流式细胞术检测细胞周期分布;DCFH-DA染色检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成变化;RT-PCR法、Western blot法检测原癌基因c-fos基因及蛋白表达水平。结果不同浓度的PHⅡ-7对MCF-7细胞的增殖抑制率为43.13%~90.90%,抑制效应随着浓度增加而增强(P<0.05);各实验浓度的PHⅡ-7均能诱导细胞凋亡,1.25、2.5、5.0μmol/L PHⅡ-7作用24h后,MCF-7细胞的早期凋亡率分别为(1.43±0.02)%,(9.14±0.36)%,(45.79±8.46)%,具有浓度依赖性;PHⅡ-7处理MCF-7后致其G0/G1期和S期细胞比例下降,G2/M期细胞比例明显上升;PHⅡ-7作用于MCF-7细胞2h后,细胞内ROS水平显著增高;PHⅡ-7处理MCF-7后,原癌基因c-fos mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性下调。结论 PHⅡ-7对MCF-7具有明显的体外杀伤作用,其作用机制可能与细胞周期阻滞、改变细胞氧化还原平衡状态及下调原癌基因表达有关。
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