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  • 【期刊】 人免疫球蛋白重链可变区基因的特征分析

    刊名:聊城大学学报(自然科学版) 作者:石彬 ; 马嘉欣 ; 涂文静 ; 吴皓明 ; 陈先恋 关键词:Ig ; 重链可变区基因 ; CDR3 ; IMGT/LIGM-DB 机构:遵义医科大学附属医院 ; 遵义医科大学附属医院 ; 遵义医科大学检验医学院 年份:2019
    摘要:目的:分析五类免疫球蛋白重链可变区基因的特征.方法:收集IMGT/LIGM-DB数据库中人类五类Ig重链可变区的基因序列,利用IMGT/HighV-QUEST分析其基因取用、V区AA变化、CDR3氨基酸长度和构成以及连接多样性.结果:IgM、IgG和IgE均较多地取用IGHJ4、IGHV1-69和IGHV5-51,且在IgM、IgG、IgA与IgE中可观察到几个相似的优势V-J配对.IgD具有较高的V区突变,主要体现在FR3区的高突变(AA变化值为7.2±2.4),而IgM的每个结构域的突变均明显低于其他类Ig.此外,IgD具有较高P插入发生率和插入核苷酸数明显多于其他四类Ig.结论:本研究从基因特征上描绘了人类五类Ig相互间的相似性与差异性,这些结果可为抗体工程领域提供重要参考数据.
  • 【期刊】 抗人AEG-1单克隆抗体可变区基因克隆及序列分析

    刊名:中国生物工程杂志 作者:龙敏 ; 董柯 ; 王希 ; 陈曦 ; 刘冲 ; 刘丽 ; 张惠中 关键词:可变区基因 ; AEG-1 ; McAb ; 克隆 机构:第四军医大学唐都医院 ; 第四军医大学唐都医院 年份:2014
    摘要:AEG-1基因位于人染色体8q22,编码582个氨基酸,参与多种信号转导途径并与多种恶性肿瘤的发生、发展及生物学表型密切相关。为更好地探讨AEG-1生物学功能,以纯化的p GSTag-AEG-1蛋白免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术并经筛选及鉴定,获得了分泌抗人AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株1 E3;Western blot及免疫组化证实该细胞株分泌的单克隆抗体能与肿瘤细胞中AEG-1蛋白特异性结合;RT-PCR方法从1E3细胞中克隆出抗AEG-1抗体的VH和VL基因片段,通过测序分析、碱基和蛋白序列的比对确认该株抗体为鼠源性Ig G的轻、重链可变区基因。进一步运用Kabat System在线分析系统对VH和VL基因进行结构分析,确证FWRs和CDRs的结构完整,VH编码117个氨基酸;VL编码119个氨基酸,属于轻链κV家族。实验结果为进一步研究AEG-1与恶性肿瘤发生、发展的关系及在其临床诊断中的应用奠定了基础。
  • 【期刊】 鼠抗镉单抗重链及轻链可变区基因克隆与分析

    刊名:现代畜牧兽医 作者:赵祎云 ; 马宇驰 ; 阚银玲 ; 李贺 ; 李哲 ; 唐峰 关键词: ; ; 单克隆抗体 ; 抗体可变区 ; 序列分析 机构:辽宁医学院畜牧兽医学院 ; 辽宁医学院畜牧兽医学院 ; 天津市津南区畜牧水产发展服务中心 年份:2015
    摘要:为获得鼠抗镉单抗的重链及轻链可变区,提取AG6细胞株的总RNA,利用RT-PCR技术获得c DNA,设计重链(VH)及轻链(VL)可变区基因合并引物,通过PCR扩增基因,对扩增产物进行测序,根据基因测序结果进行分析。结果显示,VH、VL基因分别为345 bp、306 bp,经IMGT分析,其结构具备鼠抗体可变区基因的特征。
  • 【专利】 鼠抗人T细胞抗原ZCH-2B8a单抗可变区基因及用途

    作者:汤永民 ; 徐晓军 年份:2013
    摘要:本发明提供鼠抗人T细胞抗原ZCH-2B8a单抗可变区基因,ZCH-2B8a单克隆抗体所识别的抗原是一个早期稳定的T细胞活化分子。以该抗体为基础制备的异硫氰酸荧光素(FITC)标记的2B8a-FITC荧光抗体对于抗原的结合具有高度的敏感性和特异性,同时活性良好,能识别经植物血凝素(PHA)刺激的活化T细胞和再生障碍性贫血等免疫相关性疾病病人外周血中的活化T细胞。因此,该荧光抗体可用于T细胞功能评估的基础研究和临床病例活化T细胞及其亚群的检测,可在制备靶向治疗活化T细胞介导的免疫相关性疾病药物中的应用。
  • 【期刊】 人免疫球蛋白重链可变区基因引物设计方法的改良

    刊名:微生物学杂志 作者:姜晶 ; 孙颖 ; 刘红艳 ; 牟玲 ; 罗恩杰 关键词:重链可变区 ; 引物设计 ; 序列分析 机构:中国医科大学病原生物学教研室 ; 中国医科大学病原生物学教研室 ; 沈阳市传染病院肾综合征出血热研究所 年份:2012
    摘要:针对抗体胚系基因数据库的数据不断更新和完善,为获得人全部免疫球蛋白(Ig)重链可变区基因,改进引物设计方法,自主设计针对可变区基因高度保守的框架区1(FR1)和框架区4(FR4)的引物,提取未经免疫的健康人外周血单个核细胞,通过RT-PCR扩增重链可变区基因。其DNA序列与GenBank数据库和IMGT/V-QUEST软件比对,序列分析符合人免疫球蛋白重链基本框架结构,为胚系基因重排产生的序列。多个克隆的测序结果对比分析显示了良好的多样性。获得的重链序列为研制基因工程抗体及构建噬菌体抗体库奠定了物质基础,也为扩增其他物种Ig可变区基因的引物提供新的设计思路。
  • 【期刊】 小鼠抗人S100A9单克隆抗体可变区基因克隆及其序列分析

    刊名:细胞与分子免疫学杂志 作者:闫敏 ; 米丹阳 ; 孙向东 ; 张振强 ; 曾华辉 ; 刘文第 关键词:可变区基因 ; 单克隆抗体 ; 克隆 机构:河南中医药大学中医药免疫学实验室 ; 河南中医药大学中医药免疫学实验室 年份:2017
    摘要:目的 克隆小鼠抗人S100A9单克隆抗体(mAb)可变区基因并对其序列进行分析.方法 从分泌小鼠抗人S100A9mAb的杂交瘤细胞株(ⅡD4B10)中提取RNA,采用逆转录PCR扩增出轻链可变区基因VL和重链可变区基因vH,并对vL和VH进行克隆测序与BLAST同源性比较分析.结果 小鼠抗人S100A9 mAb VL基因编码区291 bp,编码97个氨基酸,属于IGKV14-111 *01家族;VH基因编码区324 bp,编码108个氨基酸,属于IGHV1-80* 01家族.所获取的vH和vL序列有明显抗体可变区特征,具有骨架区和互补决定区.结论 获得鼠抗人S100A9 mAb的重链和轻链可变区基因,为构建基因工程抗体奠定基础.
  • 【期刊】 利用RLM-RACE克隆抗DR5单克隆抗体重链可变区基因

    刊名:河南大学学报(医学版) 作者:刘峰涛 ; 季泽俊 ; 马远方 关键词:RLM-RACE ; 重链基因 ; 可变区 ; 死亡受体5 机构:河南大学医学院细胞与分子免疫重点实验室 ; 河南大学医学院细胞与分子免疫重点实验室 年份:2010
    摘要:目的:克隆抗DR5单抗重链可变区基因。方法:使用Trizol从杂交瘤366EC提取总RNA,采用RLM-RACE进行抗体重链可变区基因的扩增。结果:扩增出一个800 bp的基因片段,与小鼠抗体重链可变区基因高度同源。结论:RLM-RACE是一种非常有效的扩增抗体重链可变区基因的方法。
  • 【期刊】 抗BAFF单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定

    刊名:细胞与分子免疫学杂志 作者:肖黎明 ; 龚玖瑜 ; 王畅 ; 陈恒悦 ; 栗向东 ; 金伯泉 ; 陈丽华 关键词:BAFF ; 单克隆抗体 ; 轻、重链可变区基因 ; 基因克隆 机构:第四军医大学基础医学院免疫学教研室 ; 第四军医大学基础医学院免疫学教研室 ; 第四军医大学西京医院西京骨科医院 年份:2012
    摘要:目的:在本实验室成功制备小鼠抗人BAFF单克隆抗体的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人BAFF单克隆抗体杂交瘤细胞FMMUB4中提取总RNA,以此为模版反转录成cDNA,用针对小鼠单克隆抗体重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应,PCR产物连接入载体,经筛选阳性克隆、酶切鉴定后送测序,测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因,测序结果证实序列正确。结论:获得了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因序列,为下一步构建相关基因工程抗体打下良好基础。
  • 【期刊】 抗二氟沙星单克隆抗体可变区基因的克隆及序列分析

    刊名:核农学报 作者:邹明 ; 陈杖榴 关键词:可变区基因 ; 二氟沙星 ; 单克隆抗体 ; 克隆 ; 碱基序列分析 机构:青岛农业大学动物科技学院 ; 青岛农业大学动物科技学院 ; 华南农业大学兽医学院 年份:2011
    摘要:采用RT-PCR技术,从抗二氟沙星单克隆抗体X1杂交瘤细胞株总RNA中扩增VH和VL基因片段,克隆入pUC18载体,测序进行(X1)可变区基因的克隆及序列分析。通过互联网检索发现VH和VL基因与Ig同源,分别符合小鼠IgVH和Igκ基因特征。VH基因全长363bp,编码121个氨基酸;VL基因全长为348bp,编码116个氨基酸。氨基酸序列分析结果显示,可变区含有明确的4个骨架区和3个抗原决定簇互补区。本试验成功获得X1株单抗的重、轻链可变区基因,为基因工程抗体的构建奠定了基础。
  • 【期刊】 抗氯霉素抗体可变区基因的克隆与序列分析

    刊名:现代预防医学 作者:李黄金 ; 赵林 ; 陈伟 ; 刘家劲 ; 李秋 ; 郭志云 ; 林冬霞 ; 田素娟 ; 黄树林 关键词:抗氯霉素单克隆抗体 ; 轻链可变区基因 ; 重链可变区基因 ; 克隆 ; 序列分析 机构:广东药学院生命科学与生物制药学院生物技术系 ; 广东药学院生命科学与生物制药学院生物技术系 年份:2009
    摘要:[目的]克隆并分析抗氯霉素单克隆抗体(抗CAPmAb)的轻、重链可变区基因VL和VH。[方法]从分泌抗CAPmAb的杂交瘤细胞株4D10中提取总RNA,利用RT-PCR技术和一系列简并引物扩增VL和VH基因,扩增产物克隆于pMD18-T后测序,利用VBASE2数据库进行比对分析。[结果]有多对引物扩增到VL或VH基因,但同一基因的不同引物扩增到的序列相同。VL和VH基因长度分别为342bp和357bp,分别编码114个和119个氨基酸残基,编码产物均具有4个FR区、3个CDR区和2个特征性半胱氨酸残基,符合典型的KABAT结构特点,分别属于IGKV1亚群和IGH-V3609VH8家族。所克隆序列已被GenBank收录,序列号分别为FJ477893和FJ477894。[结论]成功克隆到抗CAPmAb的VL和VH基因,为进一步构建氯霉素残留检测用基因工程抗体打下了基础。
  • 【期刊】 利用噬菌体表面展示技术克隆抗人DR5抗体可变区基因

    刊名:河南大学学报(医学版) 作者:刘瑞敏 ; 王明丽 ; 季泽俊 ; 刘峰涛 ; 白慧玲 ; 马远方 关键词:噬菌体展示技术 ; 单链抗体 ; 死亡受体5 机构:河南大学细胞与免疫学重点实验室 ; 河南大学细胞与免疫学重点实验室 年份:2011
    摘要:目的:利用噬菌体表面展示技术制备抗人DR5单链抗体。方法:从抗DR5杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,并利用重叠扩增PCR将VH和VL拼接为scFv基因。将scFv与PAK100载体通过相同的酶切位点连接后,转化大肠杆菌XL1-Blue,经VSCM13辅助噬菌体拯救,构建成鼠抗人DR5单链抗体库。以DR5作为固相筛选分子,对噬菌体展示肽库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"生物筛选,从第3轮洗脱物中随机挑选10个单克隆噬菌体扩增后进行ELISA鉴定,对所筛选克隆进行DNA序列测定和通过phage-ELISA验证噬菌体单链抗体的结合特异性。结果:经过3轮筛选后,对随机选取的10个噬菌体克隆进行鉴定,其中4个具有和DR5结合的特异性。结论:利用噬菌体表面展示技术筛选单链抗体,结果更加可信。
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