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  • 【期刊】 基于CODEHOP的欧李钙调蛋白基因片段的克隆

    刊名:烟台大学学报(自然科学与工程版) 作者:邬晓勇 ; 孙雁霞 ; 梁勇 ; 陈月星 ; 苟小军 关键词:克隆 ; 欧李 ; 钙调蛋白基因 ; 简并引物 ; 一致简并杂合寡核苷酸引物(CODEHOP) 机构:成都大学药学与生物工程学院 ; 成都大学药学与生物工程学院 年份:2017
    摘要:为克隆欧李钙调蛋白基因序列,本研究采用CODEHOP方法设计了一对简并引物,F1:5’-GGCTGACCAACTGACCga(c/t) ga(c/t) ca (a/g) at-3,F2:5’-CACGTCAGC-CTCTCTGatcat (c/t) tc(a/g) tc-3,并采用传统简并引物设计方法设计了简并引物N1:5’-AAATGGC (A/C/G) GATCAGCT(A/C/T) AC-3’;N2:5:’-CACTr(A/G)GCCAT-CATGAC (C/T) Tr-3’.从欧李的幼苗组织中成功克隆出了钙调蛋白基因片段,并第一次完成了对该序列的测序.通过利用NCBI的Blast进行分析等方法证实了该序列与其他植物的钙调蛋白序列具有高度的同源性,该序列与梅花、桃、甜樱桃的钙调蛋白序列同源性都在90%以上.研究证明CODEHOP软件相比传统的设计简并引物的方法具有可信性和高效性,并且钙调蛋白目的基因的成功克隆对钙调蛋白以及欧李高钙特性的研究提供了基础数据.
  • 【期刊】 鹅掌楸属GST家族基因的克隆与表达分析

    刊名:西北植物学报 作者:成彦丽 ; 王曦 ; 司卫杰 ; 朱腾飞 ; 李火根 关键词:克隆 ; 鹅掌楸属 ; GST ; 序列分析 ; 表达 机构:[1]南京林业大学南方现代林业协同创新中心 ; [1]南京林业大学南方现代林业协同创新中心 年份:2018
    摘要:该研究以鹅掌楸属植物为试验材料,在北美鹅掌楸和鹅掌楸转录组数据库中筛选出54条GST基因家族的EST序列,通过比对将其归为Tau、Zeta、Theta和Phi等4个亚类。在这4个亚类中各选取1条EST序列设计引物,通过反转录PCR(RT-PCR)与cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从鹅掌楸属植物中克隆出4条全长分别为1 150、932、1 022和1 067 bp的基因,并分别命名为LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1。对LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a和LcGSTT1这4个基因编码蛋白质的结构预测发现,其蛋白质的分子质量分别为25.17、25.34、24.49和28.09 kD;理论等电点分别是5.60、6.53、6.66和9.20,即LtGSTparCb、LtGSTZ-like、LtGSTF13a蛋白质属于酸性蛋白,LcGSTT1属于碱性蛋白;不稳定系数分别是33.01、36.97、43.19和47.96,即LtGSTparCb、LtGSTZ-like为稳定蛋白,LtGSTF13a、LcGSTT1为不稳定蛋白;α-螺旋(alpha helix)是这4个蛋白质二级结构的主要成分。利用在线软件TargetP并结合GST蛋白质在其他植物中亚细胞定位的结果,推测这4种蛋白质极有可能位于鹅掌楸属植物的细胞质内。实时荧光定量PCR分析结果表明,这4个基因在北美鹅掌楸各个组织中均有表达,其中LtGSTparCb和LtGSTF13a在叶中的表达量最高,在其他组织中的表达量均较低;LtGSTZ-like在花器官中的表达量最高,在叶中的表达量最低,在其他组织中的表达量居于两者之间;LcGSTT1在叶中表达量最高,花器官中表达量其次,在茎和叶芽中的表达量偏低。该研究结果可为鹅掌楸属GST家族基因的功能研究奠定基础。
  • 【期刊】 牛源麦氏弧菌ASP基因的克隆与原核表达

    刊名:中国兽医科学 作者:林永润 ; 李章程 ; 刀丽梅 ; 程方俊 ; 曹立亭 ; 蒋梦娜 ; 孙莹莹 ; 张婷婷 关键词:克隆 ; 麦氏弧菌 ; 丝氨酸蛋白酶 ; 原核表达 机构:西南大学荣昌校区动物医学系 ; 西南大学荣昌校区动物医学系 ; 重庆市兽医科学工程研究中心 年份:2017
    摘要:为获得牛源麦氏弧菌重组碱性丝氨酸蛋白酶(ASP),笔者扩增并构建了以麦氏弧菌FD39-1的ASP基因为插入片段的重组表达质粒p ET32a-ASP,将该质粒转化至大肠杆菌Rosetta中诱导表达并纯化,采用SDS-PAGE与Western-blot技术检测目的蛋白是否表达成功。结果显示,扩增的ASP基因与GenBank中相应基因序列(Kp126900.1)的同源性达100%。ASP基因在大肠杆菌中成功表达,表达蛋白相对分子质量大小约为58 ku,与预期一致。Western-blot显示在预期位置出现阳性条带。本研究为麦氏弧菌ASP的生物学特性与亚单位疫苗的制备奠定了基础。
  • 【期刊】 猪EIF2S3基因克隆测序及其组织表达谱分析

    刊名:南方农业学报 作者:龙熙 ; 张廷焕 ; 赵久刚 ; 蓝静 ; 柴捷 ; 郭宗义 ; 王金勇 ; 张亮 关键词:克隆 ; ; 真核翻译起始因子2(eIF2) ; EIF2S3基因 ; 序列分析 ; 组织表达谱 机构:重庆市畜牧科学院 ; 重庆市畜牧科学院 年份:2018
    摘要:【目的】克隆猪EIF2S3基因mRNA全长,并进行生物信息学分析及检测其在猪各组织中的表达特征,为研究真核翻译起始因子2(eIF2)蛋白γ亚基的生物学功能打下基础。【方法】以荣昌猪胸腺mRNA为模板,采用RCAE-PCR克隆EIF2S3基因的m RNA全长序列,在线完成各种生物信息学分析后,利用实时荧光定量PCR分析猪EIF2S3基因的组织表达特征。【结果】猪EIF2S3基因mRNA全长1813 bp,其中蛋白质编码区(CDS)长1419 bp,5'UTR区、3'UTR区分别长14和380 bp,编码472个氨基酸。EIF2S3蛋白分子量51.1 kD,理论等电点(pI)8.62,包含58个带正电的氨基酸和52个带负电的氨基酸,其前体蛋白靠近N端区域有一个强疏水区;EIF2S3蛋白的空间结构由α-螺旋、β-折叠、延伸及无规则卷曲构成。EIF2S3蛋白氨基酸序列与狗和大白鼠的相似性最高(99.6%),其次是马、猫、牛、羊和人类(99.4%),与斑马鱼的相似性最低(96.6%)。EIF2S3基因在猪的心脏、胸腺和淋巴组织中表达量较高,在脾脏和肌肉中呈中度表达,在肾脏中的表达量较低,而在肝脏中基本不表达。【结论】猪EIF2S3基因全长1813 bp,在核酸和氨基酸水平上与其他物种的EIF2S3基因高度同源,尤其与狗和大白鼠的遗传距离最近;其在猪心脏、胸腺和淋巴组织中的表达量较高,在肝脏中基本不表达,据此推测EIF2S3参与合成的蛋白更多地参与心脏泵血和免疫相关功能,基本不发挥能量代谢功能。
  • 【期刊】 黑麦热激蛋白ScHsp90-1基因的克隆及表达分析

    刊名:山东农业科学 作者:王利彬 ; 董爽爽 ; 王灿国 ; 程敦公 ; 李豪圣 ; 刘爱峰 ; 宋健民 ; 刘建军 ; 刘成 ; 张玉梅 ; 穆平 ; 赵振东 ; 曹新有 关键词:克隆 ; 黑麦 ; 热激蛋白Hsp90 ; 表达分析 机构:青岛农业大学农学院 ; 青岛农业大学农学院 ; 青岛农业大学农学院 年份:2018
    摘要:本研究从黑麦中克隆了一个热激蛋白Hsp90基因,暂命名为ScHsp90-1,并对其序列进行分析.结果显示,该基因cDNA序列全长2103 bp,共计编码700个氨基酸,蛋白质分子量约80.47 kD.序列同源性分析表明,ScHsp90-1与小麦、玉米、水稻等物种的热激蛋白同源性较高;进化树分析表明ScHsp90-1与小麦的TaHsp90亲缘关系最近.利用实时荧光定量PCR技术对其表达特性分析表明,ScHsp90-1对高温、低温、高盐、干旱等非生物胁迫均有响应,其可能是黑麦的一个胁迫相关基因.
  • 【期刊】 甘蔗乙醇脱氢酶基因的克隆与表达

    刊名:应用与环境生物学报 作者:苏炜华 ; 黄宁 ; 凌辉 ; 刘峰 ; 曾瑞金 ; 苏亚春 ; 吴期滨 ; 高世武 ; 阙友雄 关键词:甘蔗 ; ADH基因 ; 生物信息学 ; 实时荧光定量PCR ; 非生物胁迫 ; 生物胁迫 机构:福建农林大学农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室 ; 福建农林大学农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室 年份:2017
    摘要:乙醇脱氢酶基因(Alcohol dehydrogenase,ADH)在植物抵御涝害、冷害、干旱等逆境中起着重要作用.基于前期已构建的甘蔗受黑穗病菌胁迫后基因差异表达的抑制消减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)文库,利用电子克隆和RT-PCR技术,从甘蔗品种ROC22中获得一条ADH基因的c DNA全长序列,命名为Sugarcane Alcohol Dehydrogenase(Sc ADH;Gen Bank登录号为KJ577593).生物信息学分析显示,Sc ADH基因全长为1 644 bp,含有1 140bp的开放阅读框,编码一个379个氨基酸的蛋白质.Sc ADH蛋白为稳定、亲水的酸性非分泌蛋白,定位于叶绿体基质上.蛋白二级结构元件多为无规则卷曲,具有典型的ADH蛋白结构域以及NAD和锌的结合位点.实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR)表达分析表明,该基因在甘蔗各组织中组成型表达,其中根中表达量最高,而叶中的表达量最低.在SA和Me JA胁迫下,Sc ADH基因的表达趋势为"先扬后抑",均在胁迫6 h达到最大值,分别为对照的7.34倍和11.81倍.在ABA胁迫下,该基因均上调表达,在胁迫12 h达到最大值,为对照的5.53倍.在黑穗病菌胁迫下,该基因在感病品种ROC22中的表达受到抑制,而在抗病品种YC05-179中的表达模式为"先抑后扬".综上推测Sc ADH基因在甘蔗应答非生物胁迫和生物胁迫中发挥重要作用.
  • 【期刊】 菊花去饱和酶CmSAD基因的克隆与表达分析

    刊名:河南农业大学学报 作者:张华奥 ; 逯久幸 ; 李静 ; 李永华 关键词:克隆 ; 菊花 ; 低温 ; 表达分析 机构:河南农业大学林学院 ; 河南农业大学林学院 年份:2017
    摘要:以秋菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)抗寒品种‘星光灿烂’为材料,利用RT-PCR和RACE方法从叶片中克隆△9硬脂酰-ACP去饱和酶(Stearoyl-ACP desaturase,SAD)基因,命名为CmSAD,GenBank登录号为KC529335.该基因cDNA全长1 203 bp,编码401个氨基酸,相对分子质量为45.57 kD,等电点为6.48,编码的氨基酸序列与新疆雪莲同源性最高(80.29%).通过对该蛋白进行生物信息学分析得出其没有跨膜结构,主要存在于叶绿体基质中,N端含有一段包含60个氨基酸的叶绿体转运肽.通过实时荧光定量PCR研究低温胁迫下叶片和根系中CmSAD基因的表达量变化,该基因在叶片和根系中均有表达.根系中CmSAD基因的表达量随着温度的降低而降低,16℃时表达量最高;叶片中CmSAD表达量随着温度的降低先升高再降低,5℃时最高.随着温度的降低,菊花叶片和根系中CmSAD基因的表达情况表现出一定的差异.CmSAD基因的表达变化与温度有关,为低温胁迫下菊花脂肪酸代谢的分子机理研究提供了基础.
  • 【期刊】 菊花几丁质酶基因ChCHI的克隆及表达分析

    刊名:河南农业大学学报 作者:崔波 ; 宋彩霞 ; 王莹博 ; 王若斓 ; 蒋素华 ; 梁芳 ; 叶永忠 关键词:克隆 ; 菊花 ; 几丁质酶基因 ; 表达分析 机构:河南农业大学生命科学学院 ; 河南农业大学生命科学学院 ; 郑州师范学院生物工程研究所 ; 郑州大学生命科学学院 年份:2017
    摘要:根据GenBank发布的几丁质酶基因的保守序列设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术,克隆到菊花1个几丁质酶基因ChCHI(GenBank登录号为KX881373)。ChCHI基因cDNA全长为1 385 bp,包含960 bp开放阅读框,编码319个氨基酸。ChCHI属于亲水性蛋白,相对分子质量约为35.5 k D,等电点为6.38,为稳定蛋白,二级结构预测表明该蛋白以α螺旋和无规则卷曲为主。蛋白序列比对和进化树分析表明,ChCHI基因编码的蛋白属于糖苷水解酶19家族几丁质酶,与薇甘菊(ACO25187.1)几丁质酶蛋白的亲缘关系最近,序列一致性为87%。qRT-PCR分析结果显示,SA处理可以明显提高贡菊叶片中ChCHI的表达量。菊花ChCHI在对抗环境胁迫的分子调控中起重要作用。
  • 【专利】 靶向人CD19抗原的人源化单克隆抗体

    作者:张巍 年份:2017
    摘要:本发明公开了一种靶向人CD19抗原的人源化单克隆抗体,并将其应用于嵌合抗原受体T细胞的构建与制备,而后在体外实验中验证了嵌合抗原受体T细胞肿瘤治疗效果。靶向人CD19抗原的嵌合抗原受体由前导肽、靶向人CD19抗原的单链抗体、连接ScFv所用的铰链区、跨膜结构域和免疫受体酪氨酸活化基序组成,将该嵌合抗原受体构建成慢病毒表达载体,然后感染免疫细胞,能够在免疫细胞表达靶向人CD19抗原的嵌合抗原受体,通过识别肿瘤细胞表面的CD19抗原,从而杀死表达CD19抗原的肿瘤,实现肿瘤治疗目的,为肿瘤靶向治疗提供了新的工具。
  • 【期刊】 多疣壁虎tubulin beta3基因克隆和多克隆抗体制备

    刊名:动物学研究 作者:李静 ; 秦勇 ; 顾云 ; 刘炎 ; 刘梅 关键词:多疣壁虎 ; Tubulin beta3 ; 分子克隆 ; 多克隆抗体 机构:南通大学 ; 南通大学 ; 江苏省神经再生重点实验室 ; 浙江省湖州市中心医院中心实验室 年份:2012
    摘要:Tubulin beta3(TUBB3)是特异表达于神经元的微管蛋白tubulin beta家族成员,被认为在维持轴突正常状态起着重要作用,是神经元特异的标志蛋白。该研究旨在获得多疣壁虎TUBB3全长cDNA序列并制备其多克隆抗体,为进一步研究多疣壁虎断尾再生提供基因和抗体工具。根据多疣壁虎中枢神经组织cDNA文库中TUBB3的EST片段序列,采用RACE-PCR方法,获得了全长cDNA,序列全长1790bp,编码450个氨基酸,与其他物种TUBB3蛋白高度同源;RT-PCR方法和Northern blotting检测了TUBB3组织表达谱及其转录本的大小;在GenBank登录号为JQ080315;NJ法构建的系统进化树分析表明,多疣壁虎的TUBB3蛋白与鸡的TUBB3蛋白在进化距离上较近;构建pET-32a-TUBB3原核表达载体,诱导表达并纯化TUBB3蛋白,获得兔抗壁虎TUBB3多克隆抗体,ELISA检测其效价大于1:65536,Western blotting方法证实所制备的多克隆抗体可特异识别多疣壁虎神经组织的的TUBB3蛋白。
  • 【期刊】 水蕨中心体蛋白基因的克隆与原核表达

    刊名:西北植物学报 作者:陈雪菲 ; 王尧 ; 秦召远 ; 王全喜 ; 曹建国 关键词:克隆 ; 中心体蛋白 ; 原核表达 机构:上海师范大学生命与环境科学学院 ; 上海师范大学生命与环境科学学院 ; 上海资源植物功能基因组学重点实验室上海辰山植物园 年份:2016
    摘要:蕨类植物的精子形成是一个运动细胞器重新发生的过程,但对其精子发生的分子机制仍不甚了解。中心体蛋白(centrin)是定位于细胞中心体上的一种高度保守的钙结合蛋白,被认为可能是最早参与运动细胞器发生的蛋白质。克隆鉴定centrin蛋白为进一步分析蕨类精子发生的分子机制奠定基础。该研究从蕨类模式植物水蕨(Ceratopteris thalictroides)中克隆到了水蕨centrin基因(CtCEN),其cDNA序列全长为1 077bp,结构分析表明CtCEN基因属于EF-hand超家族的centrin基因。Centrin的系统树分析发现,藻类、蕨类以及动物等具鞭毛游动精子的生物聚为一支,而被子植物聚为另一分支,表明centrin的功能可能与运动细胞器鞭毛发生有关。原核表达和Western blot分析表明,CtCEN基因表达的蛋白能与人源centrin抗体发生结合,这一结果证实克隆到了centrin基因。
  • 【期刊】 茄子抗逆相关基因SmDREB3的克隆和表达分析

    刊名:上海交通大学学报(农业科学版) 作者:刘新宇 ; 葛海燕 ; 刘杨 ; 韩洪强 ; 陈火英 关键词:克隆 ; 茄子 ; DREB3基因 ; 表达分析 机构:上海交通大学农业与生物学院 ; 上海交通大学农业与生物学院 年份:2016
    摘要:DREB(dehydration responsive element binding protein)基因在植物非生物胁迫的应激反应中具有非常重要的作用,本研究运用同源克隆的方法从‘YZ-14’紫茄品种中分离克隆得到了一个DREB基因,因其与番茄和马铃薯中DREB3基因的相似度很高,所以命名为SmDREB3。SmDREB3基因的cDNA全长为887bp,开放阅读框(ORF)长度为777bp,可以编码一个含有259个氨基酸的蛋白,与同科作物马铃薯中DREB基因序列的相似性高达90%,与番茄中DREB基因序列的相似性也能达到88%。成熟蛋白等电点为6.39,分子量为28.665kDa。RT-qPCR实验结果表明,SmDREB基因在紫茄的各个组织中都会表达,但表达水平具有组织特异性,其在果皮中的表达量最高,其次为叶和果肉,而在根、花和茎中的表达量相对较低。本研究为深入研究茄子的抗逆机制以及培育抗逆茄子新品种方面提供了理论基础。
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