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  • 【期刊】 大鼠血浆血清对软骨细胞纤维化转变的影响

    刊名:医学研究杂志 作者:丁道芳 ; 贺自克 ; 王上增 ; 薛艳 ; 郑昱新 ; 王学宗 关键词:血清和血浆 ; 软骨细胞 ; 细胞增殖 ; 形态改变 ; 成纤维样的软骨细胞 机构:河南省中医院 ; 河南省中医院 ; 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心 ; 上海市中医药研究院骨伤科研究所 年份:2018
    摘要:目的观察大鼠的血清和血浆对大鼠软骨细胞的增殖,形态改变,基质蛋白及基质调控基因的表达变化。方法取出生24h SD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得软骨细胞,取P1代细胞进行实验。软骨细胞分别培养于含10%大鼠血浆(rat plasma,RP)和10%大鼠血清(rat serum,RS)的DMEM低糖培养基中,分别为血浆组和血清组。分别培养24h,镜下观察细胞形态变化,CCK8方法检测24h、48h和72h软骨细胞增殖(A_(450))。细胞免疫荧光、Western blot和定量PCR检测软骨指标Sox9、Ⅱ型胶原、MMP13、Col2a1、A-can、ADAMTS5、MMP9、MMP3的表达。结果培养于大鼠血清和血浆的培养基中,24h后血清组的软骨细胞由鹅卵石样排列的多角形变成长梭形。血清组24h(0.67±0.01),48h(1.29±0.05)和72h(1.92±0.03)A_(450)值,明显高于血浆组24h(0.43±0.01),48h(0.72±0.01)和72h(1.27±0.04)A_(450)值,差异均有统计学意义(P<0.01)。血清组软骨细胞MMP13和Col1a1表达显著上调,Ⅱ型胶原和Sox9的表达显著下调。PCR结果表明,血清组A-can(0. 24±0. 01)和Sox9(0.56±0.04)基因表达相对于大鼠血浆组Sox9(1.00±0.05)和A-can(1.00±0.08)表达明显降低,而血清组ADAMTS5(34.51±2.25)和MMP3(40.33±2.43)表达相对于大鼠血浆组ADAMTS5(1.02±0.21)和MMP3(1.00±0.11)表达明显增强,两组间基因表达差异均有统计学意义(P<0.01)。结论血清促进软骨细胞转变成纤维样软骨细胞。
  • 【期刊】 反式维甲酸诱导大鼠关节软骨细胞的退变

    刊名:中国中医骨伤科杂志 作者:丁道芳 ; 胡鸿扬 ; 薛艳 ; 曹月龙 ; 庞坚 ; 郑昱新 关键词:反式维甲酸 ; 细胞增殖 ; 软骨退变 ; 细胞形态 机构:上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心 ; 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心 ; 上海市中医药研究院骨伤科研究所 年份:2018
    摘要:目的:观察反式维甲酸(TRA)对体外培养大鼠软骨细胞的生长增殖、形态和软骨退变相关基因表达的影响。方法:取出生24hSD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。对照组软骨细胞于体积分数为10%的胎牛血清(FBS)的高糖DMEM培养基中进行培养,而TRA组是在对照组培养基的基础上加入10μmolTRA进行培养。培养24h后,观察细胞形态变化,MTT法检测两组细胞的增殖情况,Western Blot检测Ⅱ型胶原和MMP13的表达,DMMB法测定细胞中GAG的含量,定量PCR检测ADAMTS5,MMP9,A-can,Sox9,COLX和ALP的表达。结果:TRA组的软骨形态由原来的多角形变成长梭形,且TRA组抑制软骨细胞的增殖,同时下调基质蛋白Ⅱ型胶原,A-can,GAG含量及转录因子Sox9表达,上调MMP13,MMP9,ADAMTS5,COLX及ALP的表达。结论:TRA具有促进软骨退变的作用,可用于建立体外软骨退变模型。
  • 【期刊】 中国不同地区骨关节炎患者中医证型研究概况

    刊名:河北中医 作者:丁道芳 ; 胡鸿扬 ; 徐勤光 ; 张磊 ; 王学宗 ; 庞坚 ; 郑昱新 ; 曹月龙 ; 詹红生 ; 石印玉 关键词:骨关节炎 ; 中药疗法 ; 综述 机构:上海中医药大学附属曙光医院骨伤科 ; 上海中医药大学附属曙光医院骨伤科 年份:2017
    摘要:目的通过对中国不同地区骨关节炎患者的文献调查以探究其中医证型的分布情况及规律。方法查阅中国知网(CNKI)、万方期刊及万方硕博士论文和维普期刊数据库自其建库至2015年间的所有文献,分别以关键词"因素,辨证,分型,证型,证候""and"关键词"骨痹,骨关节炎",采用模糊查询的方法,在主题、篇名、关键字等类目中分别检索,排除含内容重复或不相关内容文献。结果我国大部分地区呈现出肝肾亏虚证为主的中医证候分布趋势。西部地区风寒湿痹证型较多,且西北地区湿热相关中医证型患者出现较少;南部地区中都出现与湿热相关证型。瘀血、痰湿等病理因素在不同地区未呈明显的规律性。结论骨关节炎在不同地区,特别是气候差异明显的地区呈现一定的特点,以"寒湿、湿热、亏虚"等因素的中医证型居多,肝肾亏虚型居首,补益肝肾法可指导临床。
  • 【期刊】 真核表达人Wnt7b基因建立软骨细胞退变模型

    刊名:南方医科大学学报 作者:丁道芳 ; 王小军 ; 张浩 ; 郑杰 ; 庞坚 ; 曹月龙 ; 詹红生 关键词:Wnt7b基因 ; 293ft细胞 ; 软骨细胞 ; 转染 ; 细胞退变 机构:浙江中医药大学附属湖州市中医院 ; 浙江中医药大学附属湖州市中医院 ; 上海吉凯基因化学技术有限公司 ; 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心 ; 上海市中医药研究院骨伤科研究所 年份:2015
    摘要:目的在真核细胞中表达人Wnt7b基因并且观察对大鼠原代软骨细胞的退变作用。方法取出生24 h SD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。扩增人Wnt7b基因及克隆至PCDH-GFP上,转染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b至293ft细胞中,48 h后收集细胞上清及转染细胞,Western blot鉴定Wnt7b在293ft细胞中的表达。收集的上清分别稀释10倍和50倍培养大鼠软骨细胞,24 h后观察细胞形态并收集细胞蛋白和抽提RNA,Western blot和定量PCR检测软骨退变指标MMP13、MMP3、Ⅱ型胶原、A-can、ADAMTS5、ColⅩ和SOX9的表达。结果成功克隆人Wnt7b基因至PCDH-GFP载体上且在293ft细胞中得到有效表达。含Wnt7b培养基干预软骨细胞24 h后,软骨细胞形态由原来的多角形变成长梭形,Wnt7b处理组软骨细胞MMP13和MMP3表达显著上调,Ⅱ型胶原的表达下调。PCR结果表明A-can和Sox9表达下降,ColⅩ和ADAMTS5表达增强。结论有效在真核细胞中表达Wnt7b基因并且促进大鼠软骨细胞退变,建立软骨细胞退变的体外模型。
  • 【会议】 河蚌提取物葡聚糖对软骨细胞Wnt通路的调控作用研究

    作者:丁道芳 ; 曹月龙 ; 韦宋谱 ; 王学宗 ; 庞坚 ; 郑昱新 ; 徐勤光 ; 詹红生 机构:上海中医药大学附属曙光医院骨伤科 ; 上海中医药大学附属曙光医院骨伤科 年份:2013
    摘要:目的:探讨河蚌肉提取物葡聚糖HBP-A(Anodontaglucan HBP-A)对体外软骨细胞wnt通路的调控作用。方法:体外培养大鼠软骨细胞,添加IL-1β(10ng/m1)诱导分化,分为空白组,IL-1β组,IL-1β+IWP-2(5μM,Wnt通路抑制剂)组,IL-1β+HBP-A(0.3mg/ml)组,IL-1β+IWP-2+HBP-A共5组培养,提取各组细胞RNA和蛋白,采用Rt-PCR检测各组细胞Wnt-3a、β-catenin(24h、48h、72h)及MMP-13(72h)基因的表达;采用Western-blot检测β-catenin、MMP-13、Sox-9和coll-Ⅱ蛋白的表达(48h)。结果:细胞在IL-1β诱导下分化,出现Wnt-3a、β-catenin以及MMP-13基因表达升高,β-catenin和MMP-13蛋白表达升高,Sox-9和coll-Ⅱ蛋白表达下调。添加HBP-A干预可以抑制IL-1β诱导下软骨细胞Wnt-3a、β-catenin以及MMP-13基因的高表达,抑制β-catenin和MMP-13蛋白的高表达,上调Sox-9和Ⅱ型胶原蛋白的表达。当IWP-2和HBP-A合用时,Wnt-3a、β-catenin基因以及β-catenin蛋白表达最低,Sox-9蛋白表达最高。结论:HBP-A可通过降低Wnt/β-catenin信号通路表达,延缓软骨细胞分化,并且可与Wnt抑制剂协同调节Wnt-3a、β-catenin、Sox-9因子的表达。
  • 【期刊】 石印玉教授治疗腰腿痛临床经验举隅

    刊名:中华中医药杂志 作者:丁道芳 ; 韦宋谱 ; 徐勤光 ; 王学宗 ; 曹月龙 ; 詹红生 ; 石印玉 关键词:石印玉 ; 腰腿痛 ; 经验 ; 治疗 机构:上海中医药大学附属曙光医院骨伤科 ; 上海中医药大学附属曙光医院骨伤科 ; 浙江台州恩泽医疗中心(集团)路桥医院中医骨伤科 年份:2014
    摘要:"石氏伤科"第四代传人石印玉教授在治疗腰腿痛疾患方面有丰富的经验,全面继承了石氏伤科治伤以"十三科一理贯之"、"以气为主,以血为先"的理论指导,注重整体调理,标本兼顾,强调"治伤先识人"。石教授认为腰腿痛疾患由气血虚弱致痰瘀阻滞经络,兼有风寒湿邪加而为病。根据临床表现将腰腿痛疾患分为气虚瘀痰阻滞型、虚实寒热夹杂型、肝胆失和筋失所养等证型,治疗分别用补阳还五汤加减、桂枝芍药知母汤加减、柴胡龙骨牡蛎汤加减化裁治疗取得较好的效果。
  • 【期刊】 细胞凋亡在激素性股骨头坏死机制中的研究进展

    刊名:中国矫形外科杂志 作者:丁道芳 ; 宋奕 ; 李玲慧 ; 杜国庆 ; 刘锦涛 ; 詹红生 ; 姜宏 关键词:细胞凋亡 ; 激素 ; 股骨头坏死 机构:上海中医药大学 ; 上海中医药大学 ; 上海市中医药研究院骨伤科研究所 ; 江苏苏州市中医医院 年份:2013
    摘要:股骨头坏死是骨科常见的难治性疾病,在非创伤性股骨头坏死的病因中,激素的长期或大量使用最为常见,比例可占46.5%[1]。然而对于股骨头坏死的发病机制,目前还没有统一的定论,主要有以下几种学说:骨质疏松学说;脂质代谢紊乱学说;骨内高压学说;血管内凝血学说;免疫复合物沉淀所致的动脉血管炎学说;骨细胞受损学说等。后来又有研究发现,细胞凋亡与激素性股骨头坏死也有密切关系,国内外
  • 【期刊】 丹参酮ⅡA对大鼠原代软骨细胞增殖的影响

    刊名:上海中医药大学学报 作者:丁道芳 ; 宋奕 ; 李玲慧 ; 杜国庆 ; 刘锦涛 ; 詹红生 ; 姜宏 关键词:丹参酮ⅡA ; 软骨细胞 ; 细胞增殖 ; 增殖细胞核抗原 ; 大鼠 机构:上海中医药大学 ; 上海中医药大学 ; 江苏省苏州市中医医院 ; 上海市中医药研究院骨伤科研究所 年份:2013
    摘要:目的:研究丹参酮ⅡA对体外培养的原代大鼠软骨细胞增殖的影响。方法:取24 h新生SD大鼠肱骨头处软骨,用Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。对照组软骨细胞用含10%FBS的H-DMEM的培养基培养;实验组分4个浓度组,在培养基内分别加入终浓度为6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L的丹参酮ⅡA。培养24 h后,MTT法检测各组细胞的增殖情况,Western Blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况,流式细胞仪检测细胞周期。结果:丹参酮ⅡA可明显抑制软骨细胞的增殖,且抑制程度与丹参酮ⅡA的浓度呈正相关;丹参酮ⅡA可抑制软骨细胞PCNA的表达;随着丹参酮ⅡA浓度的增加,G0/G1期的软骨细胞比例明显增高,而S期的比例明显降低。结论:丹参酮ⅡA可诱导软骨细胞发生G0/G1期阻滞,抑制软骨细胞增殖。
  • 【期刊】 MAPK-ERK1/2信号通路调控成骨性基因表达和细胞增殖

    刊名:南方医科大学学报 作者:丁道芳 ; 李玲慧 ; 宋奕 ; 杜国庆 ; 卫晓恩 ; 曹月龙 关键词:原代成骨细胞 ; 成骨性基因表达 ; 大鼠血清 ; 信号通路 机构:上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心 ; 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心 ; 上海市中医药研究院骨伤科研究所 年份:2013
    摘要:目的观察在不同浓度大鼠血清作用下,激活或抑制MAPK-ERK1/2信号通路对大鼠成骨细胞的成骨性基因表达和增殖的影响。方法原代培养大鼠成骨细胞,进行形态和碱性磷酸酶初步鉴定后,分别用1%和5%的大鼠血清进行培养24 h,WB检测MAPK-ERK1/2信号通路蛋白p-ERK1/2和ERK1/2表达,同时检测成骨性基因(Runx2、Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶)和增殖蛋白PCNA的表达;MAPK-ERK1/2信号通路阻断剂PD0325901抑制P-ERK1/2的表达后观察对Runx2、Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶和增殖蛋白PCNA的表达。结果 5%大鼠血清激活p-ERK1/2水平明显高于1%大鼠血清(P<0.05),在MAPK-ERK1/2高水平激活状态下,成骨性基因如Runx2、Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶的表达水平出现显著的增加及促进PCNA的表达;当抑制MAPK-ERK1/2信号通路时,成骨性基因Runx2、Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶的表达水平也随之下调,且PCNA表达也受到抑制。结论激活MAPKERK1/2通路促进成骨基因表达和成骨细胞增殖,抑制此通路将抑制成骨性基因表达和细胞增殖,此通路可能作为治疗骨质疏松症的药物靶点。
  • 【期刊】 大鼠腹腔脂肪干细胞的分离培养及诱导成骨

    刊名:中国组织工程研究 作者:丁道芳 ; 李玲慧 ; 龚浩 ; 杜国庆 ; 宋奕 ; 邓真 ; 詹红生 关键词:干细胞 ; 脂肪干细胞 ; 种子细胞 ; 分离培养 ; 成骨分化 ; 诱导 ; 腹腔 ; 矿化结节 ; 碱性磷酸酶 ; 矫形外科 ; 组织工程:国家自然科学基金 ; 干细胞图片文章 机构:上海市中医药研究院骨伤科研究所 ; 上海市中医药研究院骨伤科研究所 ; 中国中医科学院 年份:2013
    摘要:背景:脂肪干细胞取材方便、增殖旺盛、具有多向分化潜能,有望取代骨髓间充质干细胞而成为新一代组织工程的种子细胞。然而,脂肪干细胞的分离培养仍存在诸多困难与不足。目的:优化脂肪干细胞的分离培养方法,并鉴定其成骨分化潜能。方法:选取200g成年雌性大鼠1只,无菌环境下切取大鼠肾脏、子宫周围及腹后外侧白色脂肪组织,多次胶原酶消化法分离消化,低糖培养基培养脂肪干细胞,倒置显微镜下观察脂肪干细胞的形态变化及增殖能力。采用成骨诱导培养液对第3代细胞进行成骨诱导,并采用碱性磷酸酶、茜素红染色方法进行鉴定。结果与结论:脂肪干细胞形态以长梭形为主,增殖活跃呈旋涡状生长。经成骨诱导10d后,碱性磷酸酶染色为阳性;成骨诱导28d后,茜素红染色阳性。提示采用多次酶消化法得到的大鼠腹腔源性脂肪干细胞在体外易于分离培养,可以稳定传代。在一定条件诱导下,可以向成骨细胞分化。采用以上方法进行脂肪干细胞的分离培养可以为组织工程提供大量、优质的种子细胞。
  • 【期刊】 蛇床子素对大鼠原代软骨细胞增殖的抑制作用

    刊名:中西医结合学报 作者:丁道芳 ; 韦宋谱 ; 李晓锋 ; 张晓钢 ; 詹红生 ; 段铁骊 ; 曹月龙 关键词:植物提取物 ; 蛇床子素 ; 软骨细胞 ; 细胞增殖 ; 增殖细胞核抗原 ; 细胞周期蛋白D1 ; 大鼠 机构:上海市中医药研究院骨伤科研究所 ; 上海市中医药研究院骨伤科研究所 ; 上海中医药大学曙光医院石氏伤科医学中心 ; 上海中医药大学脊柱病研究所 ; 上海中医药大学龙华医院 年份:2012
    摘要:目的:观察蛇床子素对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法:分离出生24h内大鼠的软骨细胞,进行原代培养。细胞扩增至第2代时观察1周内细胞增殖情况,并用细胞免疫荧光法鉴定Ⅱ型前胶原基因(typeⅡprocollagen gene,Col2a1)的表达。将第2代软骨细胞分为对照组和不同浓度蛇床子素(6.25、12.5、25和50μmol/L)组。药物作用24和48h后,观察细胞增殖情况,蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和细胞周期素D1(cyclinD1)的表达。结果:第2代原代软骨细胞活力正常,Col2a1表达明显。蛇床子素可以抑制软骨细胞的增殖,并随浓度的增加,抑制作用愈明显。蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测发现,随着蛇床子素浓度的增加,软骨细胞中PCNA和cyclinD1的表达下降。结论:蛇床子素可能通过抑制PCNA和cyclinD1的表达发挥抑制软骨细胞增殖的作用。
  • 【期刊】 血清血浆对成骨细胞增殖和分化的影响

    刊名:医学研究杂志 作者:丁道芳 ; 贺自克 ; 王上增 ; 薛艳 ; 郑昱新 关键词:原代成骨细胞 ; 成骨性基因 ; 细胞增殖 ; 大鼠血清和大鼠血浆 ; 成骨分化 机构:河南省中医院 ; 河南省中医院 ; 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心 ; 上海市中医药研究院骨伤科研究所 年份:2018
    摘要:目的观察大鼠血清和血浆对大鼠成骨细胞的增殖和分化的影响。方法取出生24h SD大鼠头颅骨,Ⅰ型胶原酶多次消化后获得成骨细胞,DMEM加10%FBS进行常规培养,同时细胞免疫荧光鉴定Col1a1的表达,传代后分别用10%血清(rat serum,RS)和10%血浆(rat plasma,RP)进行培养,分别命名为血清组和血浆组。培养24h,镜下观察细胞形态变化及检测增殖蛋白PCNA的表达; CCK8方法检测成骨细胞增殖。成骨诱导刺激1周后,检测(alkaline phosphatase,ALP)染色、ALP活性,同时定量PCR检测ALP、Runx2、Col1a1和OCN基因的表达。分化3周后,进行矿化结节染色。成骨细胞经过血清和血浆处理6h后,标记钙离子探针检测钙离子内流。结果几乎所有的细胞均表达Ⅰ型胶原。血清组成骨细胞明显变得细长,失去成骨细胞原有的特征;大鼠血浆组的PCNA表达水平低于大鼠血清组,CCK8检测表明血清组细胞增殖速度高于血浆组细胞;大鼠血浆组碱性磷酸酶活性及染色显著强于大鼠血清组;成骨性基因ALP、Runx2、OCN和Col1a1在大鼠血浆刺激下,表达明显高于血清组。大鼠血浆组的钙离子内流和矿化结节明显优于大鼠血清组。结论大鼠血清刺激大鼠成骨细胞的增殖,在促进成骨分化方面的作用弱于大鼠血浆的作用。
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